正交法優(yōu)化甘草酸單銨鹽β-環(huán)糊精包合工藝研究

劉　文， 王　瑩， 施　洋， 郝宇薇， 劉婧怡， 蘭　衛(wèi)

(1庫爾勒市新城街道社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心， 新疆　庫爾勒　841000； 2新疆醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院， 烏魯木齊　830002 ；3新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報編輯部; 4新疆醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院， 烏魯木齊　830011)

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·藥學(xué)研究·

正交法優(yōu)化甘草酸單銨鹽β-環(huán)糊精包合工藝研究

劉文1， 王瑩2， 施洋3， 郝宇薇4， 劉婧怡4， 蘭衛(wèi)4

(1庫爾勒市新城街道社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心， 新疆庫爾勒841000；2新疆醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院， 烏魯木齊830002 ；3新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報編輯部;4新疆醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院， 烏魯木齊830011)

摘要：目的優(yōu)化甘草酸單銨鹽的β-環(huán)糊精包合工藝。方法采用正交實驗對甘草酸單銨鹽-β-環(huán)糊精包合的主要參數(shù)進行篩選，以包合物的包合率和收得率為指標，選定最佳工藝。結(jié)果飽和水溶液法制備甘草酸單銨鹽β-環(huán)糊精包合物的最佳工藝為：甘草酸單銨鹽與β-環(huán)糊精的投料比為1∶6，包合溫度為60℃，攪拌時間為1 h，攪拌速度為400 r/min。結(jié)論飽和水溶液法制備甘草酸單銨鹽-β-環(huán)糊精，方法簡便、操作簡單。

關(guān)鍵詞：甘草酸單銨鹽； β-環(huán)糊精； 包合工藝

甘草酸單銨鹽是植物中含有的一類生物活性較強的化學(xué)成分，研究發(fā)現(xiàn)甘草酸單銨鹽可以通過抑制禽流感病毒對組織細胞的吸附及調(diào)節(jié)機體細胞免疫而達到抗禽流感病毒的作用[1]。甘草酸單銨鹽對微波輻射造成的機體功能失衡有一定的保護作用，其機制可能與清除自由基、提高機體抗氧化能力有關(guān)[2]。甘草酸單銨鹽還對大鼠子宮角粘連具有明顯的預(yù)防作用[3]。β-環(huán)糊精中藥包合物可以提高原藥物的穩(wěn)定性,掩蓋藥物的異味和臭味[4]。本研究通過優(yōu)化甘草酸單銨鹽-β-環(huán)糊精包合物的制備工藝，為進一步研究甘草酸單銨鹽的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1儀器與試藥

甘草酸單銨鹽(Monoammonium Glycyrrhizinate)[西安富捷藥業(yè)有限公司，批號：20101105，本品按干燥品計算，含甘草酸(C42H62O16)不得少于95.0%]，β-環(huán)糊精(天津市光復(fù)精細化工研究所，批號：20030305)，離心機(型號：80-2型，金壇市金分儀器責任有限公司)，紅外快速干燥箱(型號：WS70-1，鞏義市英峪子華儀器廠)，紫外分析攝影儀(型號：YOKO-SY，武漢藥科新技術(shù)開發(fā)有限公司)。

2方法與結(jié)果

2.1對照溶液的制備[5]精密稱取甘草酸單銨鹽0.100 0 g用無水乙醇定容至100 mL，再吸取2.5 mL至25 mL容量瓶中，用無水乙醇定容至刻度,配制成0.1 mg/mL的對照溶液，備用。

2.2甘草酸單銨鹽-β-環(huán)糊精包合物的制備[6-7]稱取適量β-環(huán)糊精加入水制成飽和水溶液，置于磁力攪拌器上加熱，逐滴加入甘草酸單銨鹽對照液攪拌，在冰箱中冷藏，抽濾，分別用無水乙醇和蒸餾水沖洗，放入恒溫干燥箱中干燥，備用。

2.3標準曲線的制備分別精密吸取上述甘草酸單銨鹽對照液1.0、1.5、2.0、3.0、3.5、4.5 mL定容至10.0 mL，在249 nm處測定吸光度(A)。以濃度(C)橫坐標，以吸光度值(A)為縱坐標，得回歸方程為Y=6.845 1X+0.172 8, r=0.999 8,線性范圍為0.010～0.045 mg/mL。

2.4重現(xiàn)性試驗平行制備3批甘草酸單銨鹽-β-環(huán)糊精包合物，采用相同方法處理，計算其包合率,重復(fù)性試驗RSD為1.79% 。

2.5甘草酸單銨鹽包合物的包合率和收得率測定包合率(EF%)=包合物中實際含甘草酸單銨鹽量(g)/投入甘草酸單銨鹽的量(g)×100%,收得率(%)=包合物的重量(g)/β-環(huán)糊精投入量(g)+甘草酸單銨鹽投入量(g)×100%。

2.6方法篩選結(jié)果取飽和水溶液法、超聲法、研磨法樣品各0.100 0 g，依“2.5”項下方法測定包合率，包合率分別為78.37%、63.21%和74.55%，飽和水溶液法包合率最高，故確定選擇飽和水溶液法。

2.7包合工藝優(yōu)化

2.7.1正交試驗[8-9]選擇L9(34)正交設(shè)計，分別選擇甘草酸單銨鹽:β-環(huán)糊精用料比、包合溫度、攪拌時間、攪拌速度4個因素，以綜合評分為考察指標進行正交實驗，見表1。由表2、表3可知B因素有顯著影響，即包合溫度對甘草酸單銨鹽-β-環(huán)糊精包合物包合率有較大的影響，影響甘草酸單銨鹽-β-環(huán)糊精包合物包合率因素大小依次為 B>A>C>D，最優(yōu)工藝條件為B1A3C1D3，因A 、C 、D 3個因素無顯著差異，最優(yōu)工藝條件確定為為A1B1C1D1，見表4、表5。

表1　因素水平表

表2　包合率正交試驗表

表3　包合率方差分析表

2.7.2正交試驗結(jié)果B因素有顯著影響，A、C、D 3個因素無顯著影響，影響包合率因素大小依次為 B>A>C>D。A、B、C、D 4個因素均無顯著影響，影響收得率因素大小依次為B>A>D>C。 包合率和收得率的最優(yōu)工藝條件為同一條件，綜合各因素的影響水平的顯著性和非顯著性，從經(jīng)濟、簡便上考慮，確定最優(yōu)工藝條件為A1B1C1D1，即:β-環(huán)糊精∶甘草酸單銨鹽比為6∶1，溫度為60℃，攪拌時間為1 h，攪拌速度為400 r/min。

表4　收得率正交實驗表

表5　收得率方差分析表

2.7.3最優(yōu)制備工藝驗證制備3批樣品，計算其包合率分別為63.25%、63.61%、62.92%，平均值為63.26%，RSD%=0.55%。制備3批樣品，計算其收得率分別為82.42%、82.15%、81.94%，平均收得率為82.17%，RSD%=0.29%。

3討論

β-環(huán)糊精包合技術(shù)可增加藥物的溶解度和溶解速度，提高生物利用度，提高藥物穩(wěn)定性，降低毒副作用等優(yōu)點[10]。甘草酸單銨鹽(monoammonium glycyrrhizinate，MAG)具有多種生物活性，但MAG在體內(nèi)易與血漿蛋白結(jié)合，采用β-環(huán)糊精包合技術(shù)可提高藥物生物利用度[11]。包合物常用的制備方法有飽和水溶液法、超聲波法和膠體磨法,經(jīng)預(yù)試驗飽和水溶液法較適宜。由單因素試驗可知飽和水溶液法包合率最高，故確定本實驗選擇飽和水溶液法。本實驗所制備的甘草酸單銨鹽包合物為純白色，顆粒均勻。本研究運用正交試驗法,采用L9(34)正交表進行甘草酸單銨鹽包合試驗,確定了甘草酸單銨鹽的β-環(huán)糊精包合物的最佳工藝。采用飽和水溶液法制備甘草酸單銨鹽-β-環(huán)糊精，方法簡便、操作簡單，對甘草酸單銨鹽的開發(fā)利用具有重要的指導(dǎo)意義。

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(本文編輯施洋)

基金項目：國家自然科學(xué)基金(81060350)

作者簡介：劉文(1970-)，女，本科，主管藥師，研究方向：藥學(xué)研究，E-mail：1178816808@qq.com。 通信作者：蘭衛(wèi)，男，在讀博士，教授，碩士生導(dǎo)師，研究方向：中藥民族藥研究, E-mail ：lanwei516@sina.com.。

中圖分類號：R943

文獻標識碼：A

文章編號：1009-5551(2016)08-1009-03

doi:10.3969/j.issn.1009-5551.2016.08.018

[收稿日期：2016-03-08]

Research on optimization inclusion technology of licoflavone β-cyclodextrin with orthogonal method

LIU Wen1， WANG Ying2， SHI Yang3， HAO Yuwei4， LIU Jingyi4， LAN Wei4

(1CenterofCommunityHealthService,NewTownStreetKorla，KorlaXinjiang841000,China；2TheAffiliatedofChineseMedicineHospitalXinjiangMedicalUniversity,Urumqi830002,China；3DepartmentofEditorial,JournalofXinjiangMedicalUniversity；4CollegeofTCM,XinjiangMedicalUniversity,Urumqi830011,China)

Abstract:ObjectiveThe optimized licorice licoflavone β-cyclodextrin inclusion process. MethodsThe main parameters for the licorice flavanone-β-cyclodextrin inclusion were screened by the orthogonal experiment. The best technical process were chosen according to, the inclusion rate and the yield rate. ResultsThe best licoflavone-β-cyclodextrin inclusion condition was that the licoflavone with β-cyclodextrin′s batch feeding ratio was 1∶6 and the package gathers the temperature was 40℃, stirring as the speed of 400 r/min for 1 hour. ConclusionThe saturated peroxide solution law preparation licoflavone-Beta-β-cyclodextrin the method is simple, simplicity of operator.

Keywords:licoflavone;；β-cyclodextrin； inclusion technology