孕前炔雌醇暴露對大鼠子代糖代謝變化和肝臟糖代謝相關(guān)基因表達(dá)的影響

徐凱旋，李寧寧，管磊劍，夏彥愷，吳笛

（南京醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院衛(wèi)生毒理學(xué)系，江蘇南京 211166）

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研究報告

孕前炔雌醇暴露對大鼠子代糖代謝變化和肝臟糖代謝相關(guān)基因表達(dá)的影響

徐凱旋，李寧寧，管磊劍，夏彥愷，吳笛*

（南京醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院衛(wèi)生毒理學(xué)系，江蘇南京 211166）

【摘要】目的 以SD大鼠為模型，觀察孕前炔雌醇（ethinyl estradiol，EE）暴露對子代糖代謝變化和肝臟內(nèi)與糖代謝相關(guān)基因表達(dá)的影響。方法 52只雌性大鼠隨機(jī)分為4組：對照組（芝麻油）、50、200、800 μg/kg EE組，每天1次，連續(xù)灌胃暴露15 d后受孕。在子代出生后第23天（postnatal day，P23）和P25分別進(jìn)行口服葡萄糖耐量（OGTT）和胰島素耐量（ITT）實驗，并用RT-PCR檢測肝臟中糖代謝相關(guān)基因表達(dá)水平。結(jié)果 子代雌鼠OGTT：200 μg/kg EE組空腹血糖值顯著低于對照組（P＜0.05）；800 μg/kg EE組第15min血糖值顯著高于對照組、50、200 μg/kg EE組（P＜0.01，P＜0.01，P＜0.01），50、800 μg/kg EE組2 h血糖值顯著低于對照組（P＜0.05，P＜0.01）。子代雄鼠OGTT：在第15 min，800 μg/kg EE組血糖值顯著高于對照組（P＜0.01）；第30 min時，200 μg/kg EE組血糖值顯著低于對照組（P＜0.05）。子代雌鼠ITT：第15 min時，50、200 μg/kg EE組血糖值顯著高于對照組（P＜0.001，P＜0.01）。子代雄鼠ITT：第30 min時50、200 μg/kg EE組血糖值顯著高于對照組（P＜0.01，P＜0.01）。子代雌鼠RT-PCR：50，200 μg/kg EE和800 μg/kg EE組Glut2和Lpk mRNA表達(dá)水平顯著低于對照組（P ＜0.01，P＜0.05，P＜0.05）；50、200 μg/kg EE組Gys2 mRNA表達(dá)水平顯著低于對照組（P＜0.01，P＜0.01）。子代雄鼠RT-PCR：200 μg/kg EE組G6pase和Pepck mRNA表達(dá)水平顯著高于對照組（P＜0.01，P＜0.01），50 μg/kg EE組Glut2 mRNA表達(dá)水平相對于對照組顯著降低（P＜0.01），800 μg/kg EE組Gys2 mRNA表達(dá)水平顯著高于對照組（P＜0.01）。結(jié)論 孕前炔雌醇暴露會導(dǎo)致子代雌鼠葡萄糖耐量受損、子代出現(xiàn)胰島素抵抗及肝臟內(nèi)糖代謝相關(guān)基因表達(dá)異常。而且這些效應(yīng)具有性別差異，子代雌鼠對孕前EE暴露更敏感。

【關(guān)鍵詞】孕前；炔雌醇；糖代謝失衡；肝臟

炔雌醇（ethinyl estradiol，EE）是一種人工合成雌激素，被廣泛使用在藥物制劑中，是目前短效口服避孕藥中的高效雌激素。在我國偏遠(yuǎn)鄉(xiāng)村，有1%的已婚婦女選擇服用短效避孕藥［1］，但是在人口密集的沿海發(fā)達(dá)地區(qū)，由于婚前對短期有效且可逆的避孕方法需求的增加，服用含有EE避孕藥的人群相對比較龐大。在我國，EE更多地被用于調(diào)節(jié)女性正常生理周期、恢復(fù)流產(chǎn)后生理周期、輔助受孕、治療痤瘡和婦科疾?。?，3］，EE非避孕性應(yīng)用是避孕性應(yīng)用的21倍［4］。值得注意的是，服用EE的女性人群相對年輕，往往在短期內(nèi)會有懷孕計劃。那么，最令人關(guān)心的是女性在孕前服用EE是否會給子代健康發(fā)育帶來不良影響。

EE高效而且相對不易降解，消除半衰期比較長（36±13）h，長期定量服用很容易在體內(nèi)積累，也較容易引起妊娠早期暴露，從而具有潛在的生殖發(fā)育毒性。所以，EE作為雌激素內(nèi)分泌干擾物代表，被美國國家毒理學(xué)項目重點研究［5］。但目前關(guān)于EE生殖發(fā)育毒性的報道很少。根據(jù)2003年國際上正式認(rèn)可的 DOHaD理論（Developmental Origins of Health and Disease），慢性代謝疾病如糖代謝穩(wěn)態(tài)失衡和糖尿病的病因，往往可以追溯到人類在早期發(fā)育過程中經(jīng)歷的不利因素［6］，這些不利因素可引起子代出生后表型的改變，如糖代謝失衡［7］，很多動物和人群研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)孕期母體內(nèi)環(huán)境對子代出生后的生長發(fā)育有影響［8］，但是關(guān)于圍孕期特別是孕前母體環(huán)境對后代出生后生長發(fā)育影響的研究剛剛開展。肝臟是糖代謝和脂代謝調(diào)節(jié)的重要器官［9］，在穩(wěn)定血糖、清除血氨和解毒方面有重要作用。因此我們建立了孕前EE暴露SD大鼠模型，研究孕前EE暴露是否會影響子代健康發(fā)育，尤其是糖代謝以及從肝臟角度探索子代糖代謝失衡的可能機(jī)制。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物

SPF級雌鼠SD大鼠52只，體重230～250 g，7 ～9周齡，購自上海斯萊克實驗動物有限責(zé)任公司【SCXK（滬）2012-0002】，SPF級雄鼠SD大鼠52只，體重430～450 g，12～14周齡，購自上海斯萊克實驗動物有限責(zé)任公司【SCXK（滬）2013-0018】，均飼養(yǎng)于南京醫(yī)科大學(xué)江寧校區(qū)動物中心屏障實驗室【SYXK（蘇）2014-0009】，環(huán)境溫度：20±2℃，相對濕度：50% ～60%，光照：150～200 lx，12 h/12 h明暗交替，噪音＜50 db，每個IVC籠內(nèi)飼養(yǎng)2只大鼠，自由飲食，并按實驗動物使用的3R原則給予人道的關(guān)懷。

1.1.2 實驗試劑

Ethinylestradiol，購自德國Dr.Ehrenstorfer標(biāo)準(zhǔn)品公司；羅氏血糖試紙，購自南京邁迪特生物化學(xué)有限公司；中性胰島素注射液，購自江蘇萬邦生化醫(yī)藥股份有限公司；Trizol，購自Invitrogen（Carlsbad，CA，USA）公司；逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、RNA酶抑制劑（RNasin）和SYBR Green PCR Master Mix reagent kits，均購自Takara公司（大連寶生物有限公司）。

1.1.3 實驗儀器

羅氏卓越型血糖儀，購自南京邁迪特生物化學(xué)有限公司；臺式低溫高速離心機(jī)（GS215R，美國Backman），7900型熒光定量 PCR儀（美國ABI公司）。

1.2 炔雌醇染毒

將52只雌鼠按照體重隨機(jī)分為4組，每組13只，采取灌胃方法對4組大鼠分別給予芝麻油及50、200 μg/kg和800 μg/kg EE暴露，每日一次，連續(xù)暴露15 d，給藥前禁食不禁水。

1.3 大鼠交配及子代體重測定

大鼠連續(xù)EE暴露15 d后給予15 d的洗脫期，之后雌雄按1∶1的比例進(jìn)行合籠交配，每天上午9：00-11：00檢查雌鼠陰栓脫落情況，記觀察到陰栓為懷孕第1天，懷孕的母鼠單獨(dú)飼養(yǎng)與鼠籠內(nèi)，給予不含雌激素的食物，且每5 d記錄1次體重。大鼠的妊娠期為21 d，在19 d左右密切觀察大鼠分娩情況，觀察到子代出生記為出生后第1天（postnatal day，P1），對新生子代采取剪趾標(biāo)記，并在同組間交換不同窩別的子代以減少子代個體差異，子代在出生后第22天斷奶，第25天進(jìn)行雌雄分籠。子代從P4-P14，每2 d稱1次體重。

1.4 子代葡萄糖耐量和胰島素耐量測定

1.4.1 葡萄糖耐量實驗

在子代P23前1 d晚上對子代（n=8）禁食12 ～14 h，并在第2天早上8點按2 g/kg劑量給子代灌胃50%葡萄糖，尾尖采集0、15、30、60、120 min時間點的血糖并利用羅氏卓越型血糖儀記錄數(shù)值，繪制OGTT曲線。

1.4.2 胰島素耐量實驗

在子代P25前1 d晚上對子代（n=8）禁食12 ～14 h，并在第2天早上8點按0.75 IU/kg劑量對子代腹腔注射胰島素，尾尖采集0、15、30、60、120 min時間點的血糖并記錄血糖數(shù)值，繪制ITT曲線。

1.5 RT-PCR

1.5.1 子代肝臟總RNA提取

在抽提RNA之前，所有需使用的器材、離心管及槍頭等均需在0.1%DEPC水中浸泡24 h，烘干，高壓消毒去除RNase以后待用。稱取各組子代肝臟0.1 g并超聲，接下來用TRizol試劑盒按產(chǎn)品說明書提取總RNA。

1.5.2 引物設(shè)計

根據(jù)GenBank上提供的基因序列，應(yīng)用Primer Premier 5.0軟件設(shè)計基因特異性引物。引物設(shè)計完成后，通過NCBI對其特異性進(jìn)行鑒定，結(jié)果表明均具有良好的特異性（表1）。引物由上海捷瑞生物工程有限公司合成。

表1 肝臟內(nèi)與糖代謝相關(guān)基因引物序列及反應(yīng)條件Tab.1 Primer sequences and reaction conditions of glucose-related genes in the liver of rats

1.6 統(tǒng)計分析

用統(tǒng)計學(xué)分析軟件SPSS 19.0結(jié)合Origin對各項指標(biāo)進(jìn)行數(shù)據(jù)整理及分析，所有數(shù)據(jù)均行正態(tài)性、方差齊性檢驗，所有實驗結(jié)果用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤表示，采用單因素方差分析（One-way ANOVA）比較各組間的差異后用LSD多重比較的方法進(jìn)行兩兩比較，來判斷是否有統(tǒng)計學(xué)顯著差異。

2 結(jié)果

2.1 子代體重

母鼠孕前EE暴露后，觀察子代出生后P4-P14體重變化，結(jié)果顯示子代雌鼠在P4和P10組間體重差異有顯著性（P＜0.05，圖1A）。經(jīng)LSD法比較發(fā)現(xiàn)在P4，800 μg/kg EE組子代體重顯著低于對照組（P＜0.01，圖 1A）；在P10，200 μg/kg EE和800 μg/kg EE組子代體重顯著高于對照組（P＜0.01）。而對于子代雄鼠，在P6，50 μg/kg EE組子代體重顯著低于對照組（P＜0.01，圖1B）。

2.2 子代葡萄糖耐量實驗

子代雌鼠OGTT實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)P23空腹血糖值組間存在差異（P＜0.05，圖2A）。使用LSD法比較發(fā)現(xiàn)200 μg/kg EE組子代空腹血糖值顯著低于對照組（P＜0.05，圖2A），說明200 μg/kg EE暴露有可能導(dǎo)致子代代謝失衡。在第15 min，800 μg/kg EE組血糖值顯著高于對照組、50μg/kg EE和200 μg/kg EE組（P＜0.01，P＜0.01，P＜0.01，圖2A）；但在2 h，50 μg/kg EE和800 μg/kg EE組血糖值卻顯著低于對照組（P＜0.05，P＜0.01，圖2A），說明孕前EE暴露可使子代雌鼠糖耐量受損。

在子代雄鼠OGTT中，第15 min、30 min血糖水平組間差異有顯著性（P＜0.05，圖2B）。LSD法兩兩比較發(fā)現(xiàn)，在第15 min，800 μg/kg EE組血糖值顯著高于對照組（P＜0.01，圖2B）；在第30 min，200 μg/kg EE組血糖值顯著低于對照組（P＜0.05，圖2B）。然而在2 h，EE暴露組的血糖值和對照組相比差異無顯著性（P＞0.05，圖2B），說明較雌鼠而言，子代雄鼠的糖耐量可能未受損。

2.3 子代胰島素耐量實驗

在P25，ITT實驗結(jié)果顯示子代雌鼠和雄鼠對胰島素的敏感性具有類似趨勢。在雌鼠中，腹腔注射胰島素后第15 min，50 μg/kg EE、200 μg/kg EE組血糖值顯著高于對照組（P＜0.001，P＜0.01，圖3A）。在子代雄鼠中，第30 min組間血糖水平差異有顯著性（P＜0.05，圖3B），LSD法發(fā)現(xiàn)，50 μg/kg EE和200 μg/kg EE組血糖值顯著高于對照組（P＜0.01，P＜0.01，圖3B），綜上可說明50 μg/kg EE和200 μg/kg EE組子代經(jīng)孕前EE暴露后有可能出現(xiàn)胰島素抵抗現(xiàn)象。

注：—■—對照組；—·—50 μg/kg EE組；—▲—200 μg/kg EE組；—▼—800 μg/kg EE組；*P＜0.05，**P＜0.01。圖1 子代雌鼠（A）和雄鼠（B）P4-P14體重Note.—■—Control group；—·—50 μg/kg EE group；—▲—200 μg/kg EE group；—▼—800 μg/kg EE group；*P＜0.05，**P＜0.01.Fig.1 Body weight of the female（A）and male（B）offsprings from P4 to P14

2.4 RT-PCR

用RT-PCR的方法檢測了肝臟內(nèi)糖代謝相關(guān)基因Glut2、Gck、Lpk、G6pase、Pepck、Gys2和Pygl mRNA的相對表達(dá)水平。在子代雌鼠中，50、200 μg/kg EE和800 μg/kg EE組Glut2和Lpk的表達(dá)水平相對于對照組顯著降低（P＜0.01，P＜0.05，P＜0.05，圖4A）；糖原合成相關(guān)酶Gys2基因表達(dá)水平在50 μg/ kg EE和200 μg/kg EE組也顯著低于對照組（P＜0.01，P＜0.01，圖4A）；糖異生關(guān)鍵基因G6pase和Pepck、Gck和Pygl基因表達(dá)水平在對照組和劑量組中差異無顯著性（P＞0.05，圖4A）。

在子代雄鼠中，糖異生基因G6pase和Pepck表達(dá)水平在200 μg/kg EE組中相對于對照組顯著增高（P＜0.01，P＜0.01，圖 4B）；50 μg/kg EE組Glut2表達(dá)水平相對于對照組顯著降低（P＜0.01，圖4B）；糖原合成相關(guān)酶Pygl表達(dá)水平在800 μg/ kg EE顯著高于對照組（P＜0.01，圖4B）。

注：—■—對照組；—·—50 μg/kg EE組；—▲—200 μg/kg EE組；—▼—800 μg/kg EE組；*P＜0.05，**P＜0.01。圖2 子代雌鼠（A）和雄鼠（B）P23葡萄糖耐量實驗Note.—■—Control group；—·—50 μg/kg EE group；—▲—200 μg/kg EE group；—▼—800 μg/kg EE group；*P＜0.05，**P＜0.01.Fig.2 Results of glucose tolerance test in the female（A）and male（B）offsprings at P23

注：—■—對照組；—·—50 μg/kg EE組；—▲—200 μg/kg EE組；—▼—800 μg/kg EE組；*P＜0.05，**P＜0.01。圖3 子代雌鼠（A）和雄鼠（B）P25胰島素耐量實驗Note.A：Female offspring；B： Male offspring.—■—Control group.—·—50 μg/kg EE group.—▲—200 μg/kg EE group.—▼—800 μg/kg EE group.*P＜0.05，**P＜0.01.Fig.3 Results of insulin tolerance test in the female（A）and male（B）offsprings at P25

3 討論

炔雌醇（EE）屬于環(huán)境內(nèi)分泌干擾物（environmental endocrine disrupting chemicals，EDCs），長期以來一直是口服避孕藥中的重要激素，由于EE在育齡婦女中的廣泛運(yùn)用，其對于女性本身是具有安全性的［2.3］，但對后代是否具有毒性作用應(yīng)該引起足夠的重視。既往的動物實驗主要著重于孕期以及哺乳期暴露EE對子代的影響，而關(guān)于孕前暴露EE的研究還較少，本實驗選擇SD大鼠孕前EE暴露模型，研究其對子代糖代謝的影響和肝臟內(nèi)糖代謝相關(guān)基因mRNA的轉(zhuǎn)錄水平，進(jìn)而探索子代糖代謝失衡的可能機(jī)制。

Ferguson等［10］研究發(fā)現(xiàn)SD大鼠在孕期第6～21天連續(xù)暴露5 μg/kg和10 μg/kg EE，子代雌鼠和雄鼠體重較對照組均隨年齡增加顯著增高，與本實驗子代雌鼠體重變化趨勢類似（圖1A），卻不同于子代雄鼠體重變化，推測可能與不同性別子代對EE的敏感性有關(guān)；Mandrup等［11］卻發(fā)現(xiàn)Wister大鼠在孕期第7～10天暴露0、5、15和50 μg/kg EE導(dǎo)致50 μg/kg子代雄鼠P6體重下降，與我們的結(jié)果完全一致；在鯽魚暴露EE模型中，亦發(fā)現(xiàn)體重下降現(xiàn)象［12］。這些結(jié)果意味著孕前同孕期暴露EE在一定程度上都可導(dǎo)致子代體重變化，原因推測有可能與攝食量及代謝變化有關(guān)［13］。

注：對照組；50 μg/kg EE組；200 μg/kg EE組；800 μg/kg EE組；*P＜0.05，**P＜0.01。圖4 子代雌鼠（A）和雄鼠（B）肝臟內(nèi)與糖代謝相關(guān)基因mRNA表達(dá)水平Note：Control group；50 μg/kg EE group；200 μg/kg EE group；800 μg/kg EE group；*P＜0.05，**P＜0.01.Fig.4 The mRNA expression level of glucose metabolic-related genes of liver in the female（A）and male（B）offsprings

Lawrence等［14］研究的甲基炔諾酮（norgestrel/ ethinyl estradiol；NEE）和Kendig［15］給CD1小鼠喂食含有炔雌醇的飼料，均發(fā)現(xiàn)子代糖耐量受損現(xiàn)象，說明EE在不同的種屬中且與其他具有雌激素效應(yīng)的短效避孕藥一樣，都可使子代糖耐量受損。本實驗研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同劑量的孕前EE暴露都可使子代糖耐量發(fā)生變化，但是糖耐量發(fā)生異常的時間點不一樣，這可能與不同性別子代體內(nèi)的代謝功能和脂肪分布有關(guān)，因為雄鼠更傾向于改變皮下脂肪分布而非腹部脂肪［15］。此種效應(yīng)的差異與同樣作為EDCs的雙酚A（bisphenol A，BPA）有共同點，劉景麗等［13］在C57BL6小鼠孕期及哺乳期不同階段暴露BPA，因給藥的劑量、時間和對胰島素具有的不同敏感性等［16］原因均可使不同性別子代的葡萄糖耐量存在差異。

肝臟是調(diào)節(jié)糖代謝的主要器官，Gck和Lpk均是肝臟糖酵解的關(guān)鍵酶，它們的表達(dá)或活性降低，將直接影響胰島素在肝臟的利用以及葡萄糖在肝臟的吸收，導(dǎo)致葡萄糖耐量下降及胰島素抵抗［17］。Lpk是肝臟糖酵解三個關(guān)鍵的限速酶之一，且處于糖酵解過程的最后一步，Lpk活性高，葡萄糖分解加快［18］，Glut2可促進(jìn)體內(nèi)葡萄糖攝取且與葡萄糖敏感基因表達(dá)的調(diào)節(jié)密切相關(guān)［19］，Glut2表達(dá)升高可促進(jìn)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)，為肝糖原含量增加提供條件，Glut2敲除的小鼠出現(xiàn)明顯的高糖血癥［20］。本實驗孕前EE暴露組子代雌鼠肝臟內(nèi)Lpk和Glut2表達(dá)下調(diào)，可間接解釋50 μg/kg EE和800 μg/kg EE組子代雌鼠2 h的血糖水平低于對照組的現(xiàn)象。而在子代雄鼠中，Glut2在只50 μg/kg EE組中表達(dá)下調(diào)，與糖耐量結(jié)果不一致。在哺乳動物中，肝糖原生成對去除體內(nèi)過量血糖起到關(guān)鍵的作用［21］，在子代雌鼠中，Gys2作為肝糖原合成酶在50 μg/kg EE和200 μg/kg EE組中表達(dá)降低，說明在高劑量組中Gys2合成較少，葡萄糖轉(zhuǎn)化為肝糖原的量較少，體內(nèi)血糖水平繼而升高，同子代雌鼠胰島素耐量實驗結(jié)果一致。Pepck和G6pase是糖異生的關(guān)鍵酶，Pepck和G6pase表達(dá)上調(diào)可使血糖水平升高［22］，我們的ITT結(jié)果顯示200 μg/kg EE組血糖水平顯著增高，符合Pepck和G6pase表達(dá)上調(diào)的結(jié)果，說明200 μg/kg EE孕前暴露確實會導(dǎo)致使子代產(chǎn)生胰島素抵抗。

綜述所述，孕前炔雌醇長期暴露會導(dǎo)致子代代謝失衡，如葡萄糖耐量受損、出現(xiàn)胰島素抵抗現(xiàn)象等，結(jié)合肝臟內(nèi)與糖代謝相關(guān)基因的表達(dá)，可在一定程度上解釋子代幼年期糖代謝失衡的現(xiàn)象，繼而為幼年期糖代謝失衡的發(fā)生發(fā)展提供新的理論依據(jù)，最終為預(yù)防和控制EE引起的兒童高血糖提供直接依據(jù)。

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【中圖分類號】Q95-33

【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A

【文章編號】1005-4847（2016）03-0221-07

Doi：10.3969/j.issn.1005-4847.2016.03.001

［基金項目］國家自然科學(xué)基金資助項目（81470150）；江蘇省高校自然科學(xué)研究計劃項目（12KJB330001）；留學(xué)回國人員科研啟動基金。

［作者簡介］徐凱旋（1988-），女，碩士研究生，主要研究方向：生殖發(fā)育與內(nèi)分泌毒理學(xué)。E-mail：xkx516@163.com。

［通訊作者］吳笛（1977-），女，副教授，博士，主要研究方向：生殖毒理學(xué)與神經(jīng)內(nèi)分泌毒理學(xué)。E-mail：diwu@njmu.edu.cn。blood glucose level than that in the control group（P＜0.05）.At 15 min after glucose administration，the blood glucose level in the 800 μg/kg EE group was much higher than that in the control group，50 μg/kg and 200 μg/kg EE groups（P ＜0.01，P＜0.01，P＜0.01）.At the time point of 2 h，the blood glucose level of the 50 μg/kg and 800 μg/kg EE groups were both significantly lower than that in the control group（P＜0.05，P＜0.01）.The female offsprings in the 50 μg/kg and 200 μg/kg EE groups had significantly higher glucose level after insulin administration than that in the control group（P＜0.001，P＜0.01）.In the male offsprings，the 800 μg/kg EE group had a significantly higher blood glucose level than the control group at 15 min after glucose administration（P＜0.01），and the 200 μg/kg EE group had a lower blood glucose level than the control at 30 min after glucose administration.In the male offsprings，the blood glucose level of 50 μg/kg and 200 μg/kg EE groups were much higher than that of the control group（P＜0.01，P＜0.01）.In the female offsprings，Glut2 and Lpk mRNA expressions in the 50 μg/kg，200 μg/kg and 800 μg/kg EE groups were much lower than that in the control group（P＜0.01，P＜0.05，P＜0.05）.Gys2 mRNA expressions in the 50 μg/kg and 200 μg/kg EE groups were much lower than that in the control group（P＜0.01，P＜0.01）.In the male offsprings，the 200 μg/kg EE group had much higher G6pase and Pepck mRNA expression than in the control group（P＜0.01，P＜0.01）.The Glut2 mRNA expression in the 50 μg/kg EE group was much lower than that in the control group（P＜0.01）.The Gys2 mRNA expression in the 800 μg/kg EE group was significantly higher than that in the control group（P＜0.01）.Conclusions Pregestational EE exposure can lead to impaired glucose tolerance and insulin resistance in female offspring and alterations of key hepatic glucose-metabolism-related gene expression，and these effects are sex-specific，and female offspring is more sensitive to pregestational EE exposure.

Corresponding author：WU Di，.E-mail：diwu@njmu.edu.cn

［收稿日期］2016-04-08

Pregestational ethinyl estradiol exposure leads to glucose homeostasis disruption and changes of expressions of glucose-metabolism-related genes in rat offsprings

XU Kai-xuan，LI Ning-ning，GUAN Lei-jian，XIA Yan-kai，WU Di*
（Department of Toxicology，School of Public Health，Nanjing Medical University，Nanjing 211166，China）

【Abstract】Objective The aim of this study was to observe pregestational ethinyl estradiol（EE）-exposure-induced glucose metabolism alterations and hepatic glucose-metabolism-related gene expression changes in the offsprings of SD rats.Methods Fifty-two female and 52 male SD rats were used in this study.The female rats were gavaged with sesame oil，50 μg/kg，200 μg/kg and 800 μg/kg EE for 15 consecutive days.After the end of exposure period，the female rats were mated with male rats and gave birth to next generation.The blood glucose and insulin tolerance in the offsprings were measured on postnatal days 23（P23）and 25（P25）.The expressions of hepatic glucose-metabolism-related genes were measured by RT-PCR.Results In the female offsprings，the 200 μg/kg EE group had significantly lower fasting

【Key words】Pregestational；Ethinyl estradiol；Glucose metabolism imbalance；Liver