精子DNA碎片率與男性不育的關(guān)系研究

黎智彪　嚴(yán)共全　黃莉　梅金梁?陳亮

[摘要] 目的 分析研究精子DNA碎片率與男性不育的關(guān)系，探究不育患者年齡、精子碎片率和精液常規(guī)參數(shù)的相關(guān)性。方法 選擇我院收治的男性不育患者100例作為本次研究的對(duì)象，收治時(shí)間在2013年3月～2014年6月，按照年齡將這100例患者分成三組，25～29歲組（n=33），30～35歲組（n=33），36～50歲組（n=34），使用SCD檢測(cè)其精子DNA碎片率，分析檢測(cè)其精液常規(guī)參數(shù)。結(jié)果 正常形態(tài)精子率和精子活力不存在相關(guān)性（r=0.65，P>0.05）；精子活力和年齡存在負(fù)相關(guān)（r=-2.41，P<0.05）；和精子DFI存在正相關(guān)關(guān)系（r=0.33，P<0.05）。結(jié)論 隨著年齡的增長(zhǎng)精子活力會(huì)逐漸的下降，對(duì)男性的生育能力具有影響，且精液常規(guī)參數(shù)與精子DNA碎片率不存在密切的聯(lián)系，故認(rèn)為，精子DNA碎片檢測(cè)可以在精液常規(guī)分析中應(yīng)用，作為反映男性生育能力的重要指標(biāo)。

[關(guān)鍵詞] 精子DNA碎片率；男性不育；關(guān)系

[中圖分類(lèi)號(hào)] R711.6 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 2095-0616（2016）09-128-03

[Abstract] Objective To analyze and research the relationship between sperm DNA fragmentation rate and male infertility， and to explore the relativity among age， sperm fragmentation rate and semen routine parameters of infertile patients. Methods 100 male infertility patients who were selected as the study object this time from March 2013 to June 2014 in our hospital were divided into three groups according to the age， which were 25-29 years old group（n=33）， 30-35 years old group（n=33）， and 36-50 years old group（n=34）， SCD was utilized to detect the sperm DNA fragmentation rate and analyze semen routine parameters. Results There was no correlation between normal sperm morphology rate and sperm motility（r=0.65， P>0.05）. There was a negative correlation between sperm motility and age（r=-2.41， P<00.05）， and positive correlation between sperm motility and sperm DFI（r=0.33， P<00.05）. Conclusion With the increase of age， the sperm activity would gradually decrease， which had an effect on the male fertility. There was no close relationship between semen routine parameters and sperm DNA fragmentation rate. Therefore， sperm DNA fragmentation detection could be applied in semen routine analysis， which was considered as an important indicator of male fertility.

[Key words] Sperm DNA fragmentation rate， Male infertility； Relationship

男性不育是指育齡夫婦同居1年，未采取任何避孕措施，因男方原因造成不育的現(xiàn)象稱為男性不育。相關(guān)的臨床研究資料表明[1]，男性的年齡和自然流產(chǎn)具有密切的關(guān)系，男性年齡越大，意味著精子碎片率的概率越大，相關(guān)的研究資料認(rèn)為，精子碎片率和男性生育力存在密切的聯(lián)系，精子碎片率越高，男性的生育力則相對(duì)較弱，目前臨床學(xué)術(shù)上關(guān)于精子脫氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid，DNA）碎片率與男性不育關(guān)系方面的研究資料較少，臨床尚未有完全的定論[2]。本研究為進(jìn)一步探究精子DNA碎片率與男性不育的關(guān)系，特選擇了我院收治的100例男性不育患者作為研究對(duì)象，經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)精子DNA碎片率和精液常規(guī)各參數(shù)不存在相關(guān)性，通過(guò)整理匯總分析如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

將我院2013年3月～2014年6月收治的男性不育患者100例作為本次研究的對(duì)象，按照年齡將這100例患者分成三組，20～29歲組（n=33），30～35歲組（n=33），36～50歲組（n=34）。

25～29歲組患者的平均年齡為（26.1±1.3）歲，不育時(shí)間為（3.1±2.3）年，精液體積為（2.32±0.15）mL；30～35歲組患者的平均年齡為（32.1±1.3）歲，不育時(shí)間為（4.0±2.3）年，精液體積為（2.32±0.15）mL；36～50歲組患者的平均年齡為（36.3±1.3）歲，精液體積為（2.45±0.17）mL，育齡夫婦婚后一直同居，性生活正常，亦未采取任何避孕措施，一年以上未懷孕者稱為不孕癥，自確診為不孕癥后已有（5.2±2.6）年，即不育時(shí)間為（5.2±2.6）年。

經(jīng)確認(rèn)，參與本次研究的所有患者均在婚后同居1年以上、夫妻性生活正常、未采取避孕措施而未育者，且將心肝腎功能異常、血液系統(tǒng)異常、神經(jīng)系統(tǒng)異常及不愿配合本次調(diào)查研究的患者排除在外，所有患者均符合本次研究的基本條件。

1.2 方法

提醒患者在檢測(cè)前1個(gè)星期禁欲，使用手淫法采集患者的精液標(biāo)本，并使用潔凈的塑料容器放置標(biāo)準(zhǔn)，待標(biāo)本液化后，使用偉力彩色精子質(zhì)量檢測(cè)系統(tǒng)對(duì)5μL的精液進(jìn)行常規(guī)分析，檢測(cè)各組的精子活力、密度和精液量，使用瑞-吉染色鏡檢觀察[3]。

使用精子染色質(zhì)擴(kuò)散法對(duì)精子DNA碎片檢測(cè)，使用生理鹽水將新鮮的精液稀釋至10×106/mL，稀釋結(jié)束后進(jìn)行常規(guī)的精液檢查，將60μL的待測(cè)標(biāo)本加入至熔化的易熔凝膠管中，并充分混勻，將標(biāo)本放入37℃中的暖箱中孵育待用，將精子凝膠混合液加入至預(yù)先處理的載玻片上，放入22cm2的蓋玻片上，放入2～8℃的冰箱中，凝固5min[4]。

1.3 觀察指標(biāo)

對(duì)所有研究患者的精液體積、精子濃度、精子活力、正常形態(tài)精子率、精子DFI（精子DNA完整性）進(jìn)行觀察，并探討精子DNA碎片率與男性不育的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

對(duì)所有研究患者的精液體積、精子濃度、精子活力、正常形態(tài)精子率、精子DFI使用SPSS18.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，以95%作為可信區(qū)間，精液體積、精子濃度、精子活力、正常形態(tài)精子率、精子DFI使用（）表示，使用t檢驗(yàn)，數(shù)據(jù)結(jié)果顯示P<0.05，則認(rèn)為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，使用Pearson相關(guān)系數(shù)對(duì)不育男性的年齡、精子密度、活力、形態(tài)、精液量等指標(biāo)的相關(guān)性進(jìn)行檢驗(yàn)和分析。

2 結(jié)果

2.1 各年齡段的精子參數(shù)比較表

精子DFI，精液體積，精子濃度、精子活力、正常形態(tài)精子率在3個(gè)年齡組組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具體如表1所示。

2.2 精子活力和年齡的關(guān)系

本研究統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明，正常形態(tài)精子率和精子活力不存在相關(guān)性（r=0.65，P>0.05），精子活力和年齡存在負(fù)相關(guān)（r=-2.41，P<0.05），和精子DFI存在正相關(guān)關(guān)系（r=0.33，P<0.05）。

3 討論

不育癥給家庭造成了嚴(yán)重的危害，相關(guān)的研究資料表明，有50%的不育夫婦均因?yàn)槟行源嬖谏彻δ苋毕?，但是男性的生育能力的檢測(cè)手段相對(duì)缺乏，精子濃度、活力、形態(tài)是評(píng)估男性生育能力的重要指標(biāo)，近年來(lái)，以精子DNA損傷為特征的精子染色結(jié)構(gòu)異常對(duì)男性生育能力具有較好的預(yù)測(cè)價(jià)值。

遺傳物質(zhì)正確傳遞給后代需要以精子DNA保持完整為前提，精子DNA的完整性在受精過(guò)程和胚胎發(fā)育中扮演著重要的角色[5]，多年的臨床實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)表明[6]，自然生育、輔助生殖技術(shù)治療結(jié)局與精子質(zhì)量的優(yōu)劣具有密切的聯(lián)系，精子DNA的損傷會(huì)給輔助生殖技術(shù)治療結(jié)局、自然生育造成不良影響，且其損傷與復(fù)發(fā)性流產(chǎn)具有密切的關(guān)系，目前，臨床上關(guān)于DNA的損傷機(jī)制尚未有明確的闡述，但多認(rèn)為該病與多因素的聯(lián)合作用結(jié)果有關(guān)。穩(wěn)定態(tài)二氧化氯（stabilized chlorine dioxide，SCD）法檢測(cè)是反映男性不育患者精子DFI的常見(jiàn)手段，精液常規(guī)參數(shù)檢測(cè)結(jié)果表明，不育患者的精液量、密度、男性精子DFI、正常形態(tài)比率不會(huì)受患者年齡增長(zhǎng)的影響，但精子活力會(huì)受年齡增長(zhǎng)的影響，但是精子DNA碎片率、精子活性等與精液常規(guī)各參數(shù)無(wú)明顯的聯(lián)系[7-8]。

目前臨床上對(duì)胚胎發(fā)育、受精率是否與精子DNA碎片化有關(guān)存在較大的爭(zhēng)論，相關(guān)的臨床資料表明，男性精子DFI如果在30%以上，就會(huì)降低正常妊娠的可能性，精子細(xì)胞核內(nèi)的DFI含量一般經(jīng)歷著從少到多的過(guò)程，DFI的分布含量較少，非蛋白編碼區(qū)分布就會(huì)有大量的精子DNA損傷斷裂區(qū)域，但該現(xiàn)象并不會(huì)導(dǎo)致精子功能下降，但是當(dāng)精子DNA的損傷斷鏈得不到及時(shí)有效的修復(fù)時(shí)[9-10]，精子DNA蛋白編碼區(qū)基因就會(huì)在精漿中有害因素的影響下發(fā)生損壞，精子功能在此影響下也會(huì)受到損傷。還有相關(guān)的臨床資料認(rèn)為，精子染色質(zhì)中的DFI也會(huì)影響精子的穩(wěn)定性，導(dǎo)致IVF受精過(guò)程中雄性原核的形成受阻，降低受精率[11-13]。另一方面，精子卵裂停滯、卵裂率的降低與男性不育患者精子表達(dá)微管的基因損傷有關(guān)，胚胎數(shù)量增多后，胚胎的質(zhì)量就會(huì)受損[14-15]。

本研究結(jié)果表明，正常形態(tài)精子率和精子活力不存在相關(guān)性（r=0.65，P>0.05），精子活力和年齡存在負(fù)相關(guān)（r=-2.41，P<0.05），和精子DFI存在正相關(guān)關(guān)系（r=0.33，P<0.05）。故認(rèn)為隨著年齡的增長(zhǎng)精子活力會(huì)逐漸的下降，對(duì)男性的生育能力具有影響，且精液常規(guī)參數(shù)與精子DNA碎片率不存在密切的聯(lián)系，故認(rèn)為，精子DNA碎片檢測(cè)可以在精液常規(guī)分析中應(yīng)用，作為反映男性生育能力的重要指標(biāo)。

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（收稿日期：2015-12-21）