西羅莫司對(duì)支氣管哮喘患者血清神經(jīng)生長(zhǎng)因子及IL-21的影響

姚國(guó)麗，毛偉，張雙美，王斌，劉志聰

(湖州市中心醫(yī)院 呼吸內(nèi)科，浙江 湖州 313000)

西羅莫司對(duì)支氣管哮喘患者血清神經(jīng)生長(zhǎng)因子及IL-21的影響

姚國(guó)麗Δ，毛偉，張雙美，王斌，劉志聰

(湖州市中心醫(yī)院 呼吸內(nèi)科，浙江 湖州 313000)

目的 探究西羅莫司對(duì)支氣管哮喘患者血清神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)及白介素21(IL-21)水平的影響。方法 收集湖州市中心醫(yī)院呼吸科門診和住院支氣管哮喘患者83例，根據(jù)治療方法不同分為對(duì)照組和治療組，其中治療組42例，對(duì)照組41例，2組患者均采取保持酸堿電解質(zhì)平衡、吸氧解痙、抗生素等實(shí)施常規(guī)支氣管治療，并應(yīng)用0.5%霧化吸入沙丁胺醇治療，治療組在此基礎(chǔ)上服用西羅莫司治療，治療結(jié)束后對(duì)比分析2組患者哮喘發(fā)作評(píng)分、血清神經(jīng)生長(zhǎng)因子及IL-21水平。結(jié)果 治療后，與對(duì)照組相比，治療組患者哮喘發(fā)作評(píng)分較低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；治療組患者血清神經(jīng)生長(zhǎng)因子水平較低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；治療組患者IL-21水平較低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 西羅莫司對(duì)支氣管哮喘患者具有緩解哮喘發(fā)作，降低血清神經(jīng)生長(zhǎng)因子及IL-21水平，改善患者病情的功效。

西羅莫司；支氣管哮喘；神經(jīng)生長(zhǎng)因子；IL-21

支氣管哮喘是一種由于多種炎癥細(xì)胞以及神經(jīng)遞質(zhì)參與的氣道慢性多發(fā)性臨床常見的炎癥疾病，與免疫原性因素作用相關(guān)。據(jù)統(tǒng)計(jì)，我國(guó)哮喘患者超過3000萬，其發(fā)病率以及病死率呈逐年上升趨勢(shì)，嚴(yán)重危害人類身心健康，疾病遷延難愈，為患者的家庭以及社會(huì)帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)以及精神壓力[1]。不及時(shí)規(guī)范的治療，哮喘有致命危險(xiǎn)，因此如何規(guī)范化治療是哮喘疾病發(fā)病以及傳播控制的關(guān)鍵問題。激素治療臨床使用最為廣泛，但長(zhǎng)期用藥致使患者出現(xiàn)腎上腺皮質(zhì)抑制、骨質(zhì)疏松、生長(zhǎng)受抑以及口腔念珠菌感染等嚴(yán)重副作用，部分患者存在激素治療抵抗[2]。為彌補(bǔ)藥物存在的不足，急需對(duì)新的藥物進(jìn)行研發(fā)，近年來，研究學(xué)者發(fā)現(xiàn)，應(yīng)用西羅莫司對(duì)支氣管哮喘患者的臨床治療可以達(dá)到快速控制哮喘發(fā)作次數(shù)，預(yù)防復(fù)發(fā)的效果[3]。由于國(guó)內(nèi)西羅莫司研究課題較少，因此本研究探究西羅莫司對(duì)支氣管哮喘患者血清神經(jīng)生長(zhǎng)因子及IL-21水平影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2014年10月～2015年8月湖州市中心醫(yī)院呼吸科門診和住院支氣管哮喘患者83例，男性40例，女性43例，年齡9個(gè)月～50歲，平均年齡(34.77±4.11)歲，按照就診先后順序，隨機(jī)分配為治療組與對(duì)照組，其中治療組42例，男性22例，女性20例，年齡10個(gè)月～51歲，平均年齡(34.74±4.32)歲；對(duì)照41例，男性18例，女性23例，年齡9個(gè)月～48歲，平均年齡(33.62±4.09)歲，2組患者的年齡、性別、臨床資料等一般情況基本相仿，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

納入標(biāo)準(zhǔn)：所有患者均符合以下條件：①診斷符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)分會(huì)哮喘學(xué)組制定的《支氣管哮喘防治指南》[4]中支氣管哮喘的診斷標(biāo)準(zhǔn)，具備以下臨床特點(diǎn)：反復(fù)喘息、氣促、咳嗽、胸悶等癥狀；多與接觸變應(yīng)原、刺激物以及呼吸道感染等原因?qū)е略邪Y狀加劇，伴有呼吸困難；發(fā)作時(shí)雙肺可聞及散在或彌漫性，以吸氣為主的哮鳴音；癥狀可經(jīng)治療緩解或自行緩解；具備以下肺功能試驗(yàn)陽性其中1項(xiàng)或多項(xiàng)：支氣管激發(fā)試驗(yàn)陽性；運(yùn)動(dòng)激發(fā)試驗(yàn)陽性；支氣管舒張?jiān)囼?yàn)陽性，F(xiàn)EV1增加≥12%，F(xiàn)EV1增加絕對(duì)值≥200 mL；呼氣流量峰值1天內(nèi)或2周內(nèi)，變異率≥20%；符合以上1～4或4、5；②皮膚點(diǎn)刺試驗(yàn)陽性；③血清過敏原特異性抗體陽性；③患者均為自愿參與本實(shí)驗(yàn)，并簽署知情同意書。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①藥物過敏史，接受免疫抑制劑治療的患者，2周內(nèi)使用皮質(zhì)激素；②活動(dòng)性肺結(jié)核、風(fēng)濕性疾病、嚴(yán)重高血壓、糖尿病以及嚴(yán)重心、肝、腎等多臟器功能障礙或衰竭；③合并惡性腫瘤、癲癇等神經(jīng)系統(tǒng)疾病。

1.2 方法

1.2.1 治療方法：2組患者入院后進(jìn)行保持酸堿平衡、維持電解質(zhì)平衡、吸氧解痙以及給予抗生素等常規(guī)支氣管治療，應(yīng)用0.5%沙丁胺醇[葛蘭素史克制藥(蘇州)有限公司，批準(zhǔn)文號(hào)：J20140104]治療，年齡小于4歲1.25 mL，大于4歲0.5 mL，與0.9%NaCl注射液混合后實(shí)施霧化吸入方式持續(xù)吸入15 min，每天3次，用藥3～7 d；治療組在此基礎(chǔ)上采用口服西羅莫司(Pfizer Ireland Pharmaceuticals，注冊(cè)證號(hào)：H20130698)治療，清晨以水或橙汁一次性送服，口服初始劑量為16～24 mg/(m2·d)，第7～10天劑量為8～12 mg/(m2·d)，7 d為1個(gè)療程，連續(xù)用藥4個(gè)療程。

1.2.2 觀察指標(biāo)

① 2組患者支氣管哮喘發(fā)作情況評(píng)分：采用評(píng)分法比較2組患者治療前后支氣管哮喘發(fā)作情況：治療后，患者無煩躁不安、精神萎靡等精神異常，無喘息、咳嗽、呼吸困難等癥狀發(fā)作者記0分；患者僅出現(xiàn)輕度呼吸急促，無躁動(dòng)不安以及喘息等記1分；患者出現(xiàn)明顯呼吸急促、躁動(dòng)不安以及喘息等癥狀記2分；患者出現(xiàn)煩躁不安、精神萎靡等精神異常加重，呼吸極度困難記3分。

② 2組患者神經(jīng)生長(zhǎng)因子水平檢測(cè)：于患者治療前后采取空腹外周靜脈血5 mL，置于無菌無抗凝管內(nèi)，靜置30 min，3000 r/min 4 ℃低溫離心15 min，取上清液，收集標(biāo)本于-70 ℃冰柜內(nèi)冷凍保存。實(shí)驗(yàn)時(shí)，取出并進(jìn)行解凍，采用美國(guó)Biolegend公司NGF檢測(cè)試劑盒，實(shí)施雙抗體夾心(ELISA)方法檢測(cè)患者血清神經(jīng)生長(zhǎng)因子(nerve growth factor，NGF)水平，嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

③ 2組患者IL-21水平檢測(cè)：于患者治療前后采取空腹外周靜脈血5 mL，置于無菌無抗凝管內(nèi)，靜置30 min，3000 r/min 4 ℃低溫離心15 min，取上清液，收集標(biāo)本于-70 ℃冰柜內(nèi)冷凍保存。實(shí)驗(yàn)時(shí)，取出并進(jìn)行解凍，采用上海森雄生物公司檢測(cè)試劑盒，實(shí)施酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)方法檢測(cè)患者血清基質(zhì)金屬蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9，MMP-9)水平，嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

2 結(jié)果

2.1 2組患者哮喘發(fā)作評(píng)分比較 研究結(jié)果顯示，治療前2組哮喘發(fā)作評(píng)分比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；治療后2組哮喘發(fā)作評(píng)分降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，與對(duì)照組相比，治療組哮喘發(fā)作評(píng)分較低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 2組患者治療前后哮喘發(fā)作評(píng)分比較分)

*P<0.05，與同組治療前比較，compared with the same group pre-treatment；#P<0.05，與對(duì)照組治療后比較，compared with control group post-treatment

2.2 2組患者血清NGF變化情況 治療前2組血清NGF水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；治療后2組血清NGF水平降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與對(duì)照組相比，治療組血清NGF水平較低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 2組患者治療前后血清NGF比較

*P<0.05，與同組治療前比較，compared with the same group pre-treatment；#P<0.05，與對(duì)照組治療后比較，compared with control group post-treatment

2.3 2組患者血清IL- 21水平變化 治療前2組血清IL- 21水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；治療后2組血清IL-21水平降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，與對(duì)照組相比，治療組血清IL- 21水平較低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 2組患者治療前后血清IL-21水平比較

*P<0.05，與同組治療前比較，compared with the same group pre-treatment；#P<0.05，與對(duì)照組治療后比較，compared with control group post-treatment

3 討論

近年來，支氣管哮喘發(fā)病率呈全球性上升趨勢(shì)，全球約有3億支氣管哮喘患者，哮喘正嚴(yán)重困擾人類正常健康生活，哮喘的防治成為各國(guó)的熱議問題[5]。哮喘的基本病理改變是氣道炎癥，誘發(fā)高反應(yīng)性、氣道重塑以及疾病慢性化的發(fā)生，肥大細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、氣道上皮細(xì)胞、肥大細(xì)胞以及嗜酸粒細(xì)胞等多種細(xì)胞參與其炎癥反應(yīng)，腫瘤壞死因子-α誘發(fā)血管內(nèi)皮表達(dá)，加速炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)作用，激活血小板活化因子以及炎癥介質(zhì)合成，導(dǎo)致氣道高反應(yīng)性；嗜酸粒細(xì)胞分泌增多，誘發(fā)氣道上皮細(xì)胞脫落，加重哮喘的發(fā)生[6]。

臨床應(yīng)用激素類作為控制氣道炎癥的首選藥物，但長(zhǎng)期服用可以引起骨質(zhì)疏松、糖尿病、青光眼、白內(nèi)障以及肌無力等不良反應(yīng)，對(duì)于患有以上疾病的患者，可引起病情的復(fù)發(fā)以及加重[7]。因此激素不是一種可以經(jīng)常使用緩解哮喘的方法?，F(xiàn)代研究顯示，應(yīng)用西羅莫司對(duì)支氣管哮喘患者臨床治療，預(yù)防哮喘復(fù)發(fā)。西羅莫司是一種新型大環(huán)內(nèi)酯類抗排斥藥物，具有強(qiáng)效的免疫抑制作用，能夠阻斷信號(hào)傳導(dǎo)，不良反應(yīng)小，臨床應(yīng)用治療器官移植的抗排斥反應(yīng)和自身免疫性疾病的預(yù)防以及治療[8]。延光海等[9]探討西羅莫司研究學(xué)者在支氣管哮喘小鼠氣道重塑中的作用機(jī)制，發(fā)現(xiàn)西羅莫司通過其靶細(xì)胞蛋白降低Th2類細(xì)胞因子，從而降低氣道炎癥。本研究顯示，與對(duì)照組相比，西羅莫司治療組哮喘發(fā)作評(píng)分較低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，證實(shí)西羅莫司有效減輕支氣管哮喘患者哮喘發(fā)作，緩解癥狀，臨床療效。

神經(jīng)生長(zhǎng)因子(nerve growth factor, NGF)是多功能細(xì)胞生長(zhǎng)的調(diào)節(jié)因子，對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)以及免疫炎癥具有調(diào)控作用，并與生殖、細(xì)胞增殖、造血以及細(xì)胞凋亡相關(guān)，參與支氣管哮喘、過敏性鼻炎以及慢性神經(jīng)炎等炎癥疾病的發(fā)生發(fā)展[10]。Blanco-Mezquita等[11]在支氣管哮喘研究中發(fā)現(xiàn)，哮喘患者較正常人血清NGF水平升高，病情的加劇與NGF水平呈正相關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)，西羅莫司治療組血清NGF水平較低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P<0.05)，證實(shí)西羅莫司具有降低支氣管哮喘患者NGF水平，改善精神異常，緩解病情的作用。

白細(xì)胞介素-21是具有免疫調(diào)節(jié)的重要細(xì)胞因子，能夠誘導(dǎo)B細(xì)胞亞群分化與分泌，參與免疫應(yīng)答。支氣管患者體內(nèi)IL-21水平升高，抑制T細(xì)胞相關(guān)免疫反應(yīng)，病情惡化加重[12]。本研究顯示，與對(duì)照組相比，西羅莫司治療組血清IL-21水平較低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。西羅莫司的低毒抗真菌以及免疫抑制作用可有效調(diào)節(jié)支氣管哮喘患者IL- 21等炎癥細(xì)胞水平，臨床癥狀得到改善。

本研究通過對(duì)本院呼吸科門診和住院支氣管哮喘患者83例的哮喘發(fā)作評(píng)分、血清神經(jīng)生長(zhǎng)因子及IL-21水平進(jìn)行研究，證實(shí)了西羅莫司對(duì)支氣管哮喘患者具有緩解哮喘發(fā)作，降低血清神經(jīng)生長(zhǎng)因子及IL-21水平，改善患者病情的功效。在下一步研究中，本課題組將進(jìn)行藥理學(xué)方面研究，對(duì)本實(shí)驗(yàn)過程中出現(xiàn)現(xiàn)象做進(jìn)一步研究。

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(編校：王儼儼)

Effect of sirolimus on serum nerve growth factor and IL-21 in patients with bronchial asthma

YAO Guo-liΔ,MAO Wei, ZHANG Shuang-mei, WANG Bin, LIU Zhi-cong

(Department of Respiratory Medicine, Huzhou Central Hospital, Huzhou 313000, China)

ObjectiveTo explore the effect of sirolimus on serum levels of nerve growth factor (NGF) and interleukin 21(IL-21) in patients with bronchial asthma. Methods83 cases outpatient and hospitalized patients with bronchial asthma in the respiratory department were collected and divided into control group and treatment group according to the different treatment methods, 42 cases in treatment group, 41 cases in the control group. Two groups of patients

maintain acid-base and electrolyte balance, oxygen inhalation antispasmodic, antibiotics and other implementation of routine treatment of bronchial, and application of 0.5% atomization inhalation salbutamol, the treatment group received sirolimus treatment on the basis of routine treatment. After treatment, the asthma attack score, serum levels of NGF and IL-21 were compared. ResultsAfter treatment, compared with the control group, asthma attack score in treatment group was lower, the difference was statistically significant (P<0.05), the serum nerve growth factor level in treatment group was lower, the difference was statistically significant (P<0.05); the serum IL-21 level in treatment group was lower, the difference was statistically significant (P<0.05). ConclusionRapamycin has the effect of relieving asthma attacks, reducing serum NGF and IL-21 levels in patients with bronchial asthma.

sirolimus; bronchial asthma; nerve growth factor; IL-21

湖州市科技計(jì)劃項(xiàng)目(2011YS03)

姚國(guó)麗，通信作者，女，本科，住院醫(yī)師，研究方向：支氣管哮喘，E-mail：lucy3178657@163.com。

R562.2+5

A

10.3969/j.issn.1005-1678.2016.05.22