外周血microRNA-155-5p的表達(dá)與急性冠脈綜合征相關(guān)性研究*

陜西省人民醫(yī)院心血管內(nèi)三科(西安 710061)

楊禹娟△　張偉靖　邢　坤　田　剛△▲

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外周血microRNA-155-5p的表達(dá)與急性冠脈綜合征相關(guān)性研究*

陜西省人民醫(yī)院心血管內(nèi)三科(西安 710061)

楊禹娟△張偉靖邢坤田剛△▲

摘要目的：探討ACS患者外周血中miRNA-155-5p的水平及其與冠脈病變嚴(yán)重程度的關(guān)系。方法：收集ACS患者45例，其中不穩(wěn)定性心絞痛(UAP)、非ST段抬高型心肌梗死(NSTEMI)和ST段抬高型心肌梗死(STEMI)各15例，收集同期行選擇性冠脈造影術(shù)示正常者15例作為對(duì)照組；根據(jù)美國(guó)心臟病協(xié)會(huì)規(guī)定的冠脈血管圖像分段評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)和Gensini 積分系統(tǒng)對(duì)冠狀動(dòng)脈病變嚴(yán)重程度進(jìn)行定量分析；用Real-time PCR法檢測(cè)miRNA-155-5p的水平。結(jié)果：與健康對(duì)照組比較，UAP組、STEMI組、NSTEMI組血液中miR-155-5p 的相對(duì)表達(dá)量顯著下降(P<0.05)。采用Spearman 秩相關(guān)檢驗(yàn)，miRNA-155-5p的表達(dá)與Gensini 評(píng)分成負(fù)相關(guān)(r=-0.678，P=0.000)。 結(jié)論：ACS患者外周血中miRNA-155-5p的水平明顯低于正常對(duì)照組，miRNA-155-5p的表達(dá)與冠脈病變嚴(yán)重程度呈負(fù)相關(guān)。

主題詞心絞痛，不穩(wěn)定性/診斷心絞痛，不穩(wěn)定性/血液@microRNA-155-5p

最新研究證實(shí)：急性炎癥反應(yīng)可以導(dǎo)致粥樣斑塊不穩(wěn)定，致使其破裂，從而導(dǎo)致血栓形成，是誘發(fā)急性冠脈綜合征(Acute coronary syndrome，ACS)的重要原因[1～3]。MicroRNA-155(miRNA-155)是一個(gè)典型的多功能microRNA，其參與調(diào)控B 、T 淋巴細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞的分化，從而對(duì)機(jī)體的免疫功能造成影響。MiRNA-155包括miRNA-155-5p和miRNA-155-3p兩個(gè)亞型。近年來的研究已證實(shí)：miRNA-155-5p在免疫反應(yīng)、炎癥、腫瘤發(fā)生等過程中發(fā)揮了重要的作用[4]，但尚缺乏在冠心病尤其是ACS方面的研究結(jié)果。本研究通過觀察ACS患者外周血中miRNA-155-5p水平，以探討與冠狀動(dòng)脈病變程度的關(guān)系。

對(duì)象與方法

1研究對(duì)象選擇2014 年7月至2015 年7 月在陜西省人民醫(yī)院心血管內(nèi)三科住院并經(jīng)冠脈造影檢查證實(shí)的ACS患者45例，同期冠脈造影正常的人群15 例作為對(duì)照組。診斷參照美國(guó)心臟病學(xué)會(huì)/美國(guó)心臟協(xié)會(huì)ACS 診斷標(biāo)準(zhǔn)，同時(shí)行冠狀動(dòng)脈造影術(shù)檢查提示至少有1 支冠狀動(dòng)脈狹窄程度≥70%。按照臨床癥狀及心電圖改變，將45例ACS患者分為不穩(wěn)定型心絞痛組(UAP)、非ST段抬高型心肌梗死組(NSTEMI)、ST段抬高型心肌梗死組(STEMI)各15例。所有研究對(duì)象均排除嚴(yán)重腎臟疾病、嚴(yán)重肝臟疾病、自身免疫性疾病、惡性腫瘤、感染性疾病、外周動(dòng)脈粥樣硬化性疾病、腦血管意外、器官移植術(shù)后及其他炎性疾病，并在半年內(nèi)未發(fā)生過心梗者。

2研究方法入選患者于入院次日清晨空腹采靜脈血，酶法檢測(cè)空腹血糖(FPG)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C )、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)。將采取的血液加入含有EDTA抗凝劑的抗凝管中混合搖勻、保存?zhèn)溆?。采用TaKaRa公司RNAiso Blood試劑盒提取總RNA。采用TaKaRa公司反轉(zhuǎn)錄試劑盒進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，引物序列為：CTTAATGCTAATCGTGATAGGGGT。按照TaKaRa公司SYBR Premix Ex Taq試劑盒要求，在美國(guó)Applied Biosystems公司的7500 Real Time PCR儀器進(jìn)行實(shí)時(shí)相對(duì)定量PCR 檢測(cè)，結(jié)果采用 Life Tech v20.6軟件分析。以U6作為參照基因，采用2-ΔΔCT方法進(jìn)行相對(duì)定量分析，比較各組基因的表達(dá)量。依據(jù)1984年美國(guó)心臟病協(xié)會(huì)規(guī)定的冠脈血管圖像分段評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)和Gensini冠脈評(píng)分系統(tǒng)將入選病例的冠脈造影結(jié)果進(jìn)行評(píng)分[5]。病變部位的系數(shù)與狹窄程度的計(jì)分相乘，各個(gè)乘積相加的總和即為每位患者的Gensini評(píng)分。

結(jié)果

1四組患者一般資料比較見附表。健康對(duì)照組年齡、性別、收縮壓、舒張壓與UAP組、STEMI組、NSTEMI組之間比較無顯著性差異(P>0.05)； UAP組、STEMI組、NSTEMI組的TC、TG、LDL-C水平明顯高于對(duì)照組(P<0.05)；而HDL-C明顯低于對(duì)照組(P<0.05)。

附表　 四組患者一般資料比較±s)

注：*與健康對(duì)照組相比，P<0.05

2miR-155-5p 在ACS各組和健康對(duì)照組血液中的表達(dá)差異情況見圖1。通過Real-time PCR法檢測(cè)miR-155-5p 在UAP組、STEMI組、NSTEMI組和健康對(duì)照組血液中的相對(duì)表達(dá)水平，結(jié)果顯示：UAP組、STEMI組、NSTEMI組血液中miR-155-5p的相對(duì)表達(dá)量顯著低于健康對(duì)照組(P<0.05)。

3冠脈病變嚴(yán)重程度Gensini評(píng)分與血液中miR-155-5p表達(dá)水平的關(guān)系見圖2。評(píng)估冠脈病變的嚴(yán)重程度根據(jù)冠狀動(dòng)脈造影結(jié)果采用 Gensini 評(píng)分方法，以 Gensini評(píng)分+1的自然對(duì)數(shù)(LN)為自變量，以血液中miR-155-5p 的相對(duì)表達(dá)水平為因變量，對(duì)冠脈病變嚴(yán)重程度及血液中 miR-155-5p的表達(dá)水平進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果顯示：Gensini 評(píng)分+1的自然對(duì)數(shù)與血液中 miR-155-5p 的表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)(r=-0.678，P=0.000)。

圖1 miR-155-5p 在UAP、STEMI、NSTEMI和健康對(duì)照組血液中的表達(dá)差異

(注：*與對(duì)照相比，P<0.05)

圖2Gensini評(píng)分與血液中miR-155-5p 的表達(dá)水平的相關(guān)性關(guān)系

討論

冠心病(Coronary Heart Disease，CHD)是嚴(yán)重威脅人類健康的重大疾病，而ACS是其中生活質(zhì)量最低、臨床癥狀最重、預(yù)后最差的類型，給社會(huì)帶來了沉重的疾病負(fù)擔(dān), 因此對(duì)它的預(yù)防和治療始終是醫(yī)學(xué)界關(guān)注的重點(diǎn)。急性炎癥反應(yīng)可以導(dǎo)致粥樣斑塊不穩(wěn)定，致使其破裂，從而導(dǎo)致血栓形成，是誘發(fā)ACS發(fā)生的重要原因。

MiRNAs 被確定在心血管領(lǐng)域中是潛在的特異性標(biāo)志物。最近的研究顯示炎癥與miRNAs具有相關(guān)性[6]。miRNA-155屬于miRNAs家族中的一員,是一種多功能的miRNA。已有資料表明：miRNA-155 在自身免疫性疾病、腫瘤發(fā)生等過程中發(fā)揮了重要的作用[7]，尚缺乏其在CHD尤其是ACS方面的研究。目前越來越多的研究發(fā)現(xiàn)：miRNA-155可以影響固有免疫和獲得性免疫過程，在T/B細(xì)胞的分化發(fā)育中發(fā)揮十分重要的作用，同時(shí)對(duì)免疫細(xì)胞進(jìn)行監(jiān)管[8]。miRNA-155可以通過抑制樹突狀細(xì)胞表面重要分子的表達(dá)，如T細(xì)胞活化及抗原遞呈、并組成T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答抑制性通路[9]。在單核巨噬細(xì)胞，一些促炎因子可上調(diào)miRNA-155 的表達(dá)，參與了巨噬細(xì)胞泡沫化的形成[10]。進(jìn)一步研究表明：miR-155-5p 可對(duì)氧化低密度脂蛋白產(chǎn)生的炎癥反應(yīng)起到負(fù)反饋調(diào)節(jié)作用。以上研究均提示miR-155-5p可能在ACS的發(fā)生發(fā)展中扮演著重要的角色。

本研究顯示：在UAP組、STEMI組、NSTEMI組血液中miR-155-5p 的相對(duì)表達(dá)量顯著低于健康對(duì)照組。Gensini評(píng)分是一種評(píng)估冠脈病變嚴(yán)重程度的方法，其評(píng)分越高說明冠脈病變?cè)絿?yán)重。本研究顯示：Gensini 評(píng)分與血液中 miR-155-5p 的表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)，說明冠脈病變程度越嚴(yán)重，miR-155-5p 的表達(dá)水平也就越低，提示miR-155-5p參與了ACS的發(fā)生與發(fā)展，并且有可能是ACS的一種保護(hù)因子。但miR-155-5p如何通過調(diào)控炎癥反應(yīng)參與ACS的發(fā)生發(fā)展尚需進(jìn)一步研究。

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(收稿：2016-02-28)

通訊作者▲

【中圖分類號(hào)】R541.4

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

doi：10.3969/j.issn.1000-7377.2016.05.02

The correlation of peripheral blood levels of microRNA-155-5p and the severity of coronary artery disease in the patients with acute coronary syndrome

The Third Department of Cardiovascular Diseases, Shaanxi Provincial People’s Hospital(Xi’an 710061)Yang YujuanZhang WeijingXing Kunet al

ABSTRACTObjective: To explore the correlation of peripheral blood levels of microRNA-155-5p and the severity of coronary artery disease in the patients with acute coronary syndrome. Methods: A total of 45 ACS patients were divided into unstable angina groups (UAP), non ST segment elevation myocardial infarction groups (NSTEMI) and ST elevation myocardial infarction (STEMI) groups. Another 15 healthy individuals served as controls. According to results of coronary angiography, Gensini score was calculated to quantize the severity of coronary arterial stenosis. Real-time PCR assay was used to detect the concentration of microRNA-155-5p in peripheral blood of the ACS patients. Results: Compared with the control groups, the level of miRNA-155-5p in unstable angina groups, non ST segment elevation myocardial infarction groups and ST elevation myocardial infarction groups were significantly decreased (P <0.05). Spearman rank correlation test showed that the Gensini score of ACS patients was positively correlated with microRNA-155-5p (r=-0.678，P=0.000). Conclusion: The level of miRNA-155-5p in peripheral blood of patients with ACS is significantly lower than that in control group and was negatively correlated with the severity of coronary arterial stenosis in ACS groups.

KEY WORDSAngina,unstable/diagnosisAngina,unstable/blood@ miRNA-155-5p

*陜西省自然科學(xué)基礎(chǔ)研究計(jì)劃項(xiàng)目(2014JM4185)

△西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院心內(nèi)科