一株野鳥源H3N8亞型流感病毒分離株的全基因組序列分析

蘭 玲，王 濤，王 晶，程子兵，鄧國(guó)華，陳化蘭

（1. 新疆動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，新疆烏魯木齊，830011；2. 塔城市動(dòng)物疫控中心，新疆塔城 834300；3.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所/獸醫(yī)生物技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/農(nóng)業(yè)部動(dòng)物流感重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，黑龍江哈爾濱 150001）

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一株野鳥源H3N8亞型流感病毒分離株的全基因組序列分析

蘭 玲1，王 濤1，王 晶3，程子兵2，鄧國(guó)華3，陳化蘭3

（1. 新疆動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，新疆烏魯木齊，830011；2. 塔城市動(dòng)物疫控中心，新疆塔城 834300；3.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所/獸醫(yī)生物技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/農(nóng)業(yè)部動(dòng)物流感重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，黑龍江哈爾濱 150001）

摘 要：本研究對(duì)2014年從新疆額敏縣分離到的一株野鳥源H3N8亞型流感病毒A/wild bird/Xinjiang/S3525/2014 （H3N8）進(jìn)行了全基因序列和進(jìn)化分析。序列分析顯示，HA裂解位點(diǎn)序列為339PEKQTR-GLFG348，為典型的低致病性禽流感病毒特征，NA基因具有6個(gè)潛在的糖基化位點(diǎn)，與病毒株A/mallard/Czech Republic/14333-1K/2011（H3N8）核苷酸高度同源（97.7%）。該毒株的內(nèi)部基因來(lái)源較復(fù)雜，其PB1、NP基因分別與A/ruddy shell duck/Mongolia/921C2/2009（H7N1）和A/wild duck /Korea /MHC39-26/2011（H7N9）的同源性最高，其余內(nèi)部基因與H2、H3、H6、H7等亞型禽流感病毒分離株同源性最高，呈現(xiàn)明顯的異源性。除PB2基因外，其余基因片段均來(lái)源于野鳥源禽流感病毒。

關(guān)鍵詞：流感病毒；H3N8亞型；基因組分析

野鳥作為禽流感病毒（AIV）的天然宿主、攜帶者及傳播者，已從中分離到H1～H16、N1～N9[1]多種亞型病毒。在野鳥中分離到的H3亞型病毒并不少見。2008年郭亮等[2]在三江國(guó)家級(jí)自然保護(hù)區(qū)的野鳥中分離到H3N8亞型流感病毒，2006—2010年從洞庭湖采集的47只野鳥中也分離到一株H3亞型流感病毒[3]。H3亞型流感病毒具有較廣泛的感染宿主譜，能夠感染禽類、哺乳動(dòng)物[4-5]，且是人流感病毒的一個(gè)主要亞型，還可引起馬流感，偶爾暴發(fā)的豬流感也與H3亞型有緊密聯(lián)系[6]，因此加強(qiáng)對(duì)H3亞型流感病毒的研究有著重要意義。

本研究在額敏縣額瑪勒郭羅蒙古族鄉(xiāng)水庫(kù)采集野禽糞便180份，其中在1份糞便樣品中分離到一株野鳥源H3N8亞型流感病毒，并對(duì)其進(jìn)行了全基因組測(cè)序，從分子生物學(xué)水平分析其來(lái)源，旨在為該地區(qū)禽流感病毒的變異監(jiān)測(cè)和分子流行病學(xué)分析提供必要的科學(xué)基礎(chǔ)。

1　材料和方法

1.1病毒株及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

A/wild bird/ Xinjiang/S3525/2014（H3N8）病毒分離株，來(lái)自2014年新疆額敏縣水庫(kù)，由國(guó)家禽流感參考實(shí)驗(yàn)室分離保存，以下簡(jiǎn)稱XJ/525/14。10日齡SPF雞胚，購(gòu)自哈爾濱獸醫(yī)研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

1.2主要試劑

RNA提取試劑Trizol LS，購(gòu)自Invitrogen公司；DNA聚合酶和Marker 2000，均購(gòu)自TakaRa有限公司；膠回收試劑盒，購(gòu)自上海華舜生物工程公司；反轉(zhuǎn)錄酶（MLV）試劑盒，購(gòu)自Invitrogen公司。

1.3病毒的純化增殖

將分離株按10倍倍比稀釋，然后將各稀釋度經(jīng)尿囊腔接種2枚10日齡SPF雞胚，37 ℃培養(yǎng)，48 h后收集尿囊液測(cè)其血凝價(jià)，收取有血凝價(jià)且最高稀釋度的尿囊液，用10日齡SPF雞胚純化3代，進(jìn)行病毒擴(kuò)增后-80 ℃保存。

1.4全基因組序列分析

1.4.1RNA提取與PCR擴(kuò)增。采用LS TRIzol試劑盒，按說(shuō)明書進(jìn)行病毒RNA提??；根據(jù)Gen-Bank中H3亞型流感病毒各基因片段序列選擇同源性最高的區(qū)域，設(shè)計(jì)PCR引物進(jìn)行目的片段的擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物按照膠回收試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行純化。

1.4.2序列測(cè)定與分析。用BigDye Terminator測(cè)序試劑盒，按照說(shuō)明書進(jìn)行測(cè)序產(chǎn)物純化，然后在ABI測(cè)序儀中測(cè)序；利用DNAStar軟件中Seqman拼接序列，應(yīng)用MegAlign（By Clustal V Method）進(jìn)行同源性比較和進(jìn)化分析，用MEGA5（construct/ Test maximum likelihood Tree）繪制各基因片段的進(jìn)化樹。

2　遺傳及進(jìn)化分析結(jié)果

對(duì)該野鳥源H3N8亞型AIV進(jìn)行全基因組遺傳演化分析發(fā)現(xiàn)，與此毒株表面基因同源性較高的均為野鳥源毒株，且均來(lái)源于不同國(guó)家。其內(nèi)部基因除PB2基因外，全部來(lái)源于蒙古國(guó)、美國(guó)等國(guó)家的野鳥源AIV，表明野鳥可通過(guò)遷徙攜帶并傳播該病毒[8]。而PB2基因與貴州鴨源PB2基因同源性最高，說(shuō)明野鳥源AIV有可能在與水禽共同的生活環(huán)境中，同水禽發(fā)生了內(nèi)部基因交換。將A/wild bird/XinJiang/S3525/2014 （H3N8）的8個(gè)基因節(jié)段分別克隆測(cè)序，列出與GenBank中核苷酸序列同源性最高的毒株，見表1。

表1　XJ/525/14分離株的各基因片段BLAST分析結(jié)果

2.1HA基因序列及進(jìn)化分析。XJ/525/14分離株的HA基因全長(zhǎng)1701bp，編碼566個(gè)氨基酸，HA裂解位點(diǎn)氨基酸序列均為339PSIEPK↓GLF347，具有低致病性AIV（LPAIV）特征。潛在糖基化位點(diǎn)分別為24NST26、38NGT40、54NAT56、181NVT183，301NGS303，499NGT501。HA可能的受體結(jié)合位點(diǎn)分別為114Y、169W、199H、206E、210L、211Y、242Q、244G，表明其具有禽源毒株特征。XJ/525/14HA基因?qū)儆跉W亞分支（圖1），與A/gadwall/Altai/1324/2007（H3N8）同源性最高（98.1%），提示可能具有同一來(lái)源。與此毒株HA基因同源性較高的還有蒙古國(guó)的野鳥源毒株。

2.2NA基因序列及進(jìn)化分析。XJ/525/14病毒株的NA基因全長(zhǎng)1413 bp，共編碼470個(gè)氨基酸，無(wú)頸部缺失，屬于歐亞分支，與2013年感染人的H10N8的NA基因不處于同一分支，親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。序列分析結(jié)果顯示，NA基因有6個(gè)潛在的糖基化位點(diǎn)，分別位于46NET48、54NET56、84NNT86、144NGT146、293NWT295、398NWS400，與病毒株A/mallard/Czech Republic/14333-1K/2011（H3N8）核苷酸高度同源（97.7%）。與其處在同一分支的同源性較高的片段并不僅局限于H3亞型的AIV，還有H12、H6、H1亞型AIV的N8NA基因。

圖1　XJ/525/14病毒分離株的表面基因進(jìn)化樹

2.3內(nèi)部基因序列及進(jìn)化分析。內(nèi)部基因序列及進(jìn)化分析顯示，病毒分離株XJ/525/14的內(nèi)部基因均屬于歐亞系，其中NP基因與A/wild duck /Korea /MHC39-26/2011（H7N9）的同源性最高（99.4%）；PB1基因與A/ruddy shelduck/Mongolia/921C2/2009（H7N1）同源性為98.4%；NS基因與A/common shelduck/Mongolia/2157/2011（H3N3）、PA基因與A/Northern Shoveler/Georgia/1/2010（H2N3）均高度同源；M基因與A/European teal/Chany/63/2011（H3N8）的同源性為99.7%。這都表明此病毒與其它亞型病毒發(fā)生了重組。這些基因片段均來(lái)源于野鳥，表明與野鳥毒株有著共同的祖先。特別是PB2基因與A/duck/Guizhou/1560/2007（H6N8）的同源性最高（98.9%），表明其PB2基因已有可能通過(guò)與水禽共同生活，與水禽發(fā)生了內(nèi)部基因交換。序列分析顯示，XJ/525/14病毒株內(nèi)部基因PB2（E158G、E627K、D701N）、PB1（K198I、M317K、Y436H）、PA（T97I、T515A）以及M2（S31N）、NS（D92E）基因片段未發(fā)生使其毒力增強(qiáng)的相關(guān)突變[7]，但值得注意的是NS基因片段中出現(xiàn)的149為氨基酸的突變，即V149A，能否使其毒力增強(qiáng)，還有待進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。H3N8分離株的內(nèi)部基因片段與H2、H3、H6、H7等多種亞型的LPAIV同源性較高，表明該毒株為不同亞型AIV的重組毒株。不同亞型LPAIV毒株基因片段的交換和重組現(xiàn)象非常普遍，LPAIV通過(guò)在宿主體內(nèi)與高致病性禽流感病毒（HPAIV）發(fā)生基因重排，有可能產(chǎn)生新的HPAIV[9]，因此LPAIV的危害不容小覷。

3　討論

研究表明在與野鳥密切接觸的水禽中，H3亞型AIV普遍存在，且其多個(gè)基因片段與野鳥源AIV同源性較高[10]。在野鳥體內(nèi)，H3亞型是普遍存在的流感亞型，其基因節(jié)段可為不同時(shí)期、不同地區(qū)、不同亞型的流感病毒重組提供條件，導(dǎo)致新的流感暴發(fā)。新疆塔城地區(qū)地處全球候鳥中東非-西亞遷徙路線，額敏河橫貫塔城地區(qū)額敏縣全境，是塔額盆地最大的水系。額敏河流域的野生禽類約有40余種，因此在該地開展野鳥禽流感監(jiān)測(cè)，便于幫助了解家禽AIV的感染情況，對(duì)禽流感的早期預(yù)警及綜合防控具有重要意義。

參考文獻(xiàn)：

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[9] 王金良，李旭勇，范俊，等. H9N2亞型禽流感病毒的序列分析及對(duì)哺乳動(dòng)物致病力研究[J]. 中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2013 （8）：663-665.

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（責(zé)任編輯：朱迪國(guó)）

編者按 ：為提高動(dòng)物衛(wèi)生執(zhí)法人員動(dòng)物衛(wèi)生法學(xué)理論水平和執(zhí)法辦案能力，貫徹《全國(guó)官方獸醫(yī)培訓(xùn)規(guī)劃（2010—2014年）》提出的“創(chuàng)新方法，形式多樣”的培訓(xùn)原則，本刊在“培訓(xùn)園地”欄目開設(shè)了“習(xí)題與答案”，特委托青島東方動(dòng)物衛(wèi)生法學(xué)研究咨詢中心就動(dòng)物衛(wèi)生法學(xué)理論知識(shí)及執(zhí)法實(shí)踐中的熱點(diǎn)問(wèn)題編寫成習(xí)題，并以當(dāng)期刊問(wèn)題下期刊答案的形式，供執(zhí)法人員自學(xué)。執(zhí)法人員可以自選習(xí)題進(jìn)行作答，凡將答案反饋的，《中國(guó)動(dòng)物檢疫》編輯部和青島東方動(dòng)物衛(wèi)生法學(xué)研究咨詢中心共同出具學(xué)時(shí)證明（請(qǐng)將答案郵寄至《中國(guó)動(dòng)物檢疫》編輯部）。

【第三期習(xí)題與答案】

1. 簡(jiǎn)述《行政處罰決定書》中的處罰依據(jù)和處罰決定內(nèi)容。（本習(xí)題0.4學(xué)時(shí)）

答：《行政處罰決定書》中的處罰依據(jù)是指作出處罰決定的法律依據(jù)，即對(duì)違法行為進(jìn)行制裁的法律依據(jù)。作出處罰決定所依據(jù)的法律、法規(guī)、規(guī)章應(yīng)當(dāng)寫明全稱，列明適用的條、款、項(xiàng)、目并引用法條原文。《行政處罰決定書》中的處罰決定內(nèi)容是指給予當(dāng)事人的法律責(zé)任種類。對(duì)于給予沒收違法所得和罰款的處罰種類還應(yīng)當(dāng)寫明數(shù)額，并使用阿拉伯?dāng)?shù)字表示。處罰決定內(nèi)容中給予當(dāng)事人的法律責(zé)任種類，必須與所適用的處罰依據(jù)相對(duì)應(yīng)，適用的處罰依據(jù)中未設(shè)定其他處罰種類的，執(zhí)法人員不得隨意增加。如，《動(dòng)物防疫法》第七十八條對(duì)經(jīng)營(yíng)未附檢疫證明的違法行為，只設(shè)定了一個(gè)處罰種類，即罰款，執(zhí)法人員在適用該條對(duì)該行為實(shí)施處罰時(shí)，不得增加“警告”或“沒收違法所得”等任何處罰種類的內(nèi)容。

2. 簡(jiǎn)述《行政處罰決定書》中寫書救濟(jì)途徑和期限時(shí)需要注意的三個(gè)問(wèn)題。（本習(xí)題0.6學(xué)時(shí)）

答：在制作《行政處罰決定書》時(shí)，寫書救濟(jì)途徑和期限需要注意以下三個(gè)問(wèn)題。一是當(dāng)事人對(duì)動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督機(jī)構(gòu)作出的行政處罰決定不服的，應(yīng)當(dāng)告知當(dāng)事人向該動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督機(jī)構(gòu)的主管部門進(jìn)行復(fù)議，即同級(jí)人民政府獸醫(yī)主管部門，書寫時(shí)，應(yīng)當(dāng)明確獸醫(yī)主管部門的具體稱謂。二是必須要明確告知救濟(jì)期限?！缎姓?fù)議法》對(duì)當(dāng)事人的復(fù)議時(shí)效作出了嚴(yán)格的規(guī)定，即復(fù)議時(shí)效為60天。需要特別說(shuō)明的是，新修訂的《行政訴訟法》自2015年5月1日起施行，該法將當(dāng)事人的訴訟時(shí)效由“三個(gè)月改為了六個(gè)月”，制作《行政處罰決定書》時(shí)，要將文書中印刷的當(dāng)事人訴訟時(shí)效由“三個(gè)月改為六個(gè)月”。三是告知當(dāng)事人向有管轄權(quán)的人民法院提起訴訟。根據(jù)《行政訴訟法》和最高人民法院相關(guān)司法解釋的規(guī)定，一般情況下，當(dāng)事人對(duì)動(dòng)物衛(wèi)生行政主體作出的行政處罰決定不服提起訴訟的，由基層人民法院管轄，即由作出行政處罰決定的獸醫(yī)主管部門或動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督機(jī)構(gòu)所在地的縣級(jí)人民法院管轄。目前，最高人民法院正在全國(guó)范圍內(nèi)開展行政案件相對(duì)集中管轄試點(diǎn)工作，獸醫(yī)主管部門和動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督機(jī)構(gòu)應(yīng)當(dāng)加強(qiáng)與所在地法院的溝通，如果所在地已經(jīng)實(shí)施行政案件集中管轄試點(diǎn)的，應(yīng)當(dāng)明確告知當(dāng)事人向集中管轄法院提起訴訟。

【本期習(xí)題】

（習(xí)題的參考材料見本期“培訓(xùn)園地”文章）

1. 簡(jiǎn)述當(dāng)場(chǎng)收繳罰款的情形及程序。（本習(xí)題0.5學(xué)時(shí)）

2. 簡(jiǎn)述申請(qǐng)人民法院強(qiáng)制執(zhí)行的條件、期間和應(yīng)當(dāng)提供的材料。（本習(xí)題0.5學(xué)時(shí)）

答疑解惑

編者按：為提高動(dòng)物衛(wèi)生執(zhí)法人員動(dòng)物衛(wèi)生法學(xué)理論水平和執(zhí)法辦案能力，本刊在“培訓(xùn)園地”欄目開設(shè) 了“答疑解惑”板塊，選取讀者來(lái)信中對(duì)動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督執(zhí)法具有指導(dǎo)意義的問(wèn)題，委托青島東方動(dòng)物衛(wèi)生法學(xué)研究咨詢中心解答。每期刊登6個(gè)問(wèn)題，當(dāng)期解答3個(gè)，其余的下期解答。讀者咨詢問(wèn)題或投稿解答的答案正確的，每個(gè)問(wèn)題計(jì)0.1培訓(xùn)學(xué)時(shí)（須于次月底前投稿，如第7期雜志刊登的問(wèn)題，8月30日前投稿解答）。讀者咨詢問(wèn)題或者投稿解答問(wèn)題的，請(qǐng)將答案或所咨詢問(wèn)題郵寄至《中國(guó)動(dòng)物檢疫》編輯部。

【問(wèn)與答】1

1.執(zhí)業(yè)獸醫(yī)可以依托獸藥經(jīng)營(yíng)企業(yè)注冊(cè)嗎？

答：根據(jù)《執(zhí)業(yè)獸醫(yī)管理辦法》第四十條的規(guī)定，執(zhí)業(yè)獸醫(yī)不得依托獸藥經(jīng)營(yíng)企業(yè)注冊(cè)或者備案。對(duì)此，《農(nóng)業(yè)部辦公廳關(guān)于執(zhí)業(yè)獸醫(yī)注冊(cè)等有關(guān)問(wèn)題的函》（農(nóng)辦醫(yī)函〔2014〕19號(hào)）進(jìn)一步予以明確。

2.執(zhí)業(yè)助理獸醫(yī)師可以在執(zhí)業(yè)獸醫(yī)師的指導(dǎo)下協(xié)助開展動(dòng)物胸腔手術(shù)嗎？

答：可以。根據(jù)《執(zhí)業(yè)獸醫(yī)管理辦法》第二十三條的規(guī)定，執(zhí)業(yè)助理獸醫(yī)師可以在執(zhí)業(yè)獸醫(yī)師的指導(dǎo)下協(xié)助開展動(dòng)物顱腔、胸腔和腹腔手術(shù)等活動(dòng)。對(duì)此，《農(nóng)業(yè)部辦公廳關(guān)于執(zhí)業(yè)獸醫(yī)注冊(cè)等有關(guān)問(wèn)題的函》（農(nóng)辦醫(yī)函〔2014〕19號(hào)）進(jìn)一步予以明確。

3.持有《獸藥經(jīng)營(yíng)許可證》經(jīng)營(yíng)者的哪些違法行為，屬于《獸藥管理?xiàng)l例》第五十六條規(guī)定的“情節(jié)嚴(yán)重”的情形？

答：根據(jù)2015年農(nóng)業(yè)部公告第2071號(hào)的規(guī)定，獸藥經(jīng)營(yíng)者未審核并保存獸藥批準(zhǔn)證明文件材料，經(jīng)營(yíng)假獸藥貨值金額2萬(wàn)元以上的違法行為，屬于《獸藥管理?xiàng)l例》第五十六條規(guī)定的“情節(jié)嚴(yán)重”的情形。

【請(qǐng)解答】

1.《動(dòng)物防疫法》法律責(zé)任章節(jié)中，有七個(gè)法條規(guī)定了“責(zé)令改正”，這里規(guī)定的“責(zé)令改正”是行政處罰種類嗎？

2.在畜禽專業(yè)合作社注冊(cè)的執(zhí)業(yè)獸醫(yī)，可以對(duì)外開展獸醫(yī)執(zhí)業(yè)活動(dòng)嗎？

3.對(duì)銷售非生豬定點(diǎn)屠宰廠（場(chǎng)）生豬產(chǎn)品的違法行為，由哪個(gè)部門進(jìn)行監(jiān)管？

1 2016年第3期解答的問(wèn)題：發(fā)布獸藥廣告不得含有哪些內(nèi)容？2.在屠宰加工環(huán)節(jié)，獸醫(yī)主管部門可以對(duì)銷售含有“瘦肉精”動(dòng)物產(chǎn)品的違法行為，適用《獸藥管理?xiàng)l例》實(shí)施行政處罰嗎？3.個(gè)人無(wú)證經(jīng)營(yíng)獸藥的，可以按照《獸藥管理?xiàng)l例》的規(guī)定實(shí)施行政處罰嗎？具體內(nèi)容見《中國(guó)動(dòng)物檢疫》2016年第3期第92頁(yè)。

北京市開展亞洲I型口蹄疫病毒材料專項(xiàng)檢查

北京動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督網(wǎng)按照北京市農(nóng)業(yè)局《關(guān)于開展亞洲I型口蹄疫病毒材料調(diào)查和處置有關(guān)工作的通知》，北京市針對(duì)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室及有關(guān)單位開展了亞洲I型口蹄疫病毒材料專項(xiàng)排查工作。執(zhí)法人員重點(diǎn)檢查了亞洲I型口蹄疫病毒材料的保藏情況并傳達(dá)了有關(guān)文件精神，同時(shí)對(duì)菌（毒）種和易燃易爆化學(xué)品的保藏和使用管理進(jìn)行檢查，要求各獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室及有關(guān)單位切實(shí)加強(qiáng)生物安全管理，科學(xué)、規(guī)范開展菌（毒）種研究。

中圖分類號(hào)：S855.3

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B

文章編號(hào)：1005-944X（2016）04-0077-04

DOI：10.3969/j.issn.1005-944X.2016.04.025

基金項(xiàng)目：國(guó)家科技攻關(guān)項(xiàng)目（KJYJ-2013-01-01）

通信作者：鄧國(guó)華

Sequence Analysis of a H3N8 Subtype Infl uenza Virus Isolated from Wild Bird

Lan Ling1，Wang Tao1，Wang Jing3，Cheng Zibing2，Deng Guohua3，Chen Hualan3
（1.Xinjiang Animal Health Inspection Institution，Urumqi，Xinjiang 830011；2.Tacheng Animal Disease Prevention and Control Center，Tacheng，Xinjiang 834300；3. State Key Laboratory of Veterinary Biotechnology，Animal Infl uenza Key Laboratory of the Ministry of Agriculture/Harbin Veterinary Research Institute，Chinese Academy of Agricultural Science，Harbin，Heilongjiang 150001）

Abstract：To study the biological characteristics of a H3N8 subtype infl uenza virus（AIV），an AIV A/wild bird/ Xinjiang /S3525/2014（H3N8）was isolated from wild bird in Xinjiang and subjected to sequencing analysis. The sequencing results showed that there was a HA cleavage site of 339PEKQTR-GLFG 348 in the isolate ，which was a typical characteristic structure of low pathogenic AIV，and six potential glycosylation sites in the NA gene，and the nucleotide sequence was highly homologous（97.7%）with virus strain A/ mallard/Czech Republic/14333-1K/2011（H3N8）. The PB1 and NP genes were highly homologous to A/ruddy shell duck/Mongolia/921C2/2009（H7N1）and A/wild duck/Korea/MHC39-26/2011（H7N9）respectively. The rest of the internal genes were highly homologous to H2、H3、H6 and H7 subtypes of AIV， showing signifi cant heterogeneity. Except PB2 gene，the remaining gene segments were derived from AIV of wild birds.

Key words：infl uenza virus subtype；H3N8 subtype；genome analysis