白花蛇舌草的體外抗腫瘤活性研究

鄧鳳蕓

【摘 要】 目的：應(yīng)用白花蛇舌草提取物進(jìn)行體外結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞株、結(jié)腸癌HCTI16細(xì)胞株的抑制實(shí)驗(yàn)，觀察白花蛇舌草提取物的抗腫瘤活性。方法：通過體外培養(yǎng)的方法培養(yǎng)人結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞株和結(jié)腸癌HCTI16細(xì)胞株，對比分析不同濃度白花蛇舌草提取物對細(xì)胞株的影響。結(jié)果：白花蛇舌草提取物對HT-29、HCTI16細(xì)胞株的影響為：3mg/ml濃度時(shí)抑制率分別為（25.64±1.36）%、（27.36±1.87）%；5mg/ml濃度時(shí)抑制率（37.25±2.01）%、（39.01±1.65）%；7mg/ml濃度時(shí)抑制率（49.87±1.68）%、（51.22±2.33）%，其抑制率均優(yōu)于對照組（P<0.05）。結(jié)論：白花蛇舌草提取物可有效抑制結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞株以及結(jié)腸癌HCTI16細(xì)胞株的增值，具有顯著的抗腫瘤效果。

【關(guān)鍵詞】 白花蛇舌草；提取物；結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞株；結(jié)腸癌HCTI16細(xì)胞株；凋亡作用

【中圖分類號】R285.5 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號】1007-8517（2016）11-0007-01

腫瘤在患病人群中的致殘率及致死率居高不下，是較為難治的一類疾病。西醫(yī)對于腫瘤的治療常采用切除手術(shù)治療以及放化療治療等，但治療費(fèi)用昂貴，且對機(jī)體損害極大[1]。中醫(yī)藥及其提取物屬于天然藥材，具有極高的生物活性，且中藥臨床應(yīng)用的不良反應(yīng)相對較小。為了觀察白花蛇舌草提取物的抗腫瘤活性，本研究通過體外實(shí)驗(yàn)的方法觀察其對結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞株以及結(jié)腸癌HCTI16細(xì)胞株的抑制率。

1 儀器與材料

1.1 儀器 低溫離心機(jī)（SIGMA公司生產(chǎn)，型號2-16PK）、酶標(biāo)儀（上海賽默飛世爾公司生產(chǎn)，型號MK3）、顯微鏡（日本尼康公司生產(chǎn)，型號ECLIPSE TS-100）。

1.2 材料 白花蛇舌草由醫(yī)院藥房提供。RPMI1640培養(yǎng)基（上海博生生物科技有限公司生產(chǎn)，LM-R1641/500）；噻唑藍(lán)（MTT）干粉（北京索萊寶科技有限公司生產(chǎn)，M8180-1）；（上海國源生物技術(shù)有限公司，9002-07-7）、胎牛血清（上海玉博生物科技有限公司，16000-044）。結(jié)腸癌HT-29、HCTI16細(xì)胞株由本市醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所贈(zèng)。

2 方法

2.1 藥液的制備 白花蛇舌草應(yīng)用85%乙醇進(jìn)行回流提取兩次，過濾，回收乙醇，將過濾液濃縮至1.05的相對密度，然后進(jìn)行噴霧干燥得白花蛇舌草粉末提取物。將提取物溶于40%DMSO中，制備成0.4g/ml的溶液，備用。

2.2 方法 在含有胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中分別加入結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞株、結(jié)腸癌HCTI16細(xì)胞株，分別置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中進(jìn)行體外培養(yǎng)。培養(yǎng)后取對數(shù)生長期的結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞株及結(jié)腸癌HCTI16細(xì)胞株，應(yīng)用胰蛋白酶進(jìn)行消化處理，制成細(xì)胞懸浮液進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。將細(xì)胞懸液的細(xì)胞計(jì)數(shù)密度限定在1×105個(gè)/ml，分別加入0mg/ml、3mg/ml、5mg/ml、7mg/ml的白花蛇舌草溶液，于96孔培養(yǎng)板進(jìn)行接種24h培養(yǎng)。再加入0.5mg/ml的MTT溶液37℃下進(jìn)行4h的孵育，后加入DMSO進(jìn)行混勻震蕩。

2.3 指標(biāo)的測定 室溫下靜置后進(jìn)行吸光度值測定，計(jì)算不同濃度下的平均抑制率。結(jié)腸癌細(xì)胞株的抑制率=（對照組吸光度值-觀察組吸光度值）/對照組吸光度值×100%。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)采用SPSS18.0軟件統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用（x±s）表示，并用t檢驗(yàn)，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

由表1可知，不同濃度的白花蛇舌草提取物對結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞株、結(jié)腸癌HCTI16細(xì)胞株的抑制率均顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

4 討論

腫瘤屬于中醫(yī)“積聚”的范疇，是由于機(jī)體受到外界邪毒入侵，體內(nèi)正氣虧虛，導(dǎo)致正虧邪實(shí)而誘發(fā)腫瘤的發(fā)生。腫瘤發(fā)生早期主要為風(fēng)濕熱毒邪入侵機(jī)體，導(dǎo)致機(jī)體邪實(shí)癥狀[2]。隨著腫瘤的不斷發(fā)生發(fā)展，機(jī)體正氣耗損，從而出現(xiàn)較為顯著的虛證癥狀。另外，飲食結(jié)構(gòu)因素及自身情志失暢等，可使邪毒入侵所致的臟腑損傷以及氣滯血瘀狀態(tài)加重，導(dǎo)致腫瘤的不斷進(jìn)展。中藥有效成分的提取分離在中藥產(chǎn)業(yè)中得到廣泛關(guān)注，通過藥物有效成分的提取純化，可在不同程度上提升藥物的臨床藥效。

中藥及其提取物在抗腫瘤的應(yīng)用研究較為廣泛，其作用機(jī)制復(fù)雜，主要體現(xiàn)在誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡、抑制腫瘤血管生成、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞分化以及逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞耐藥性等幾個(gè)方面。目前，抗腫瘤治療較為理想的機(jī)制即為誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡[3]，而細(xì)胞凋亡的自我破壞機(jī)制由基因決定。中藥及其提取物可使腫瘤細(xì)胞自身的基因受到直接性的損傷，從而使其處于病理狀態(tài)。[JP+1]腫瘤細(xì)胞的周期性分裂受到阻礙，基因表達(dá)受到抑制，腫瘤細(xì)胞停止擴(kuò)增，發(fā)生程序性凋亡，從而起到抗腫瘤的作用。另外，隨著腫瘤的不斷生長，其可刺激新生腫瘤血管的出現(xiàn)，并不斷為腫瘤的生長提供營養(yǎng)供給。但腫瘤細(xì)胞內(nèi)血管多未成熟，且其血管分支雜亂，極易發(fā)生破裂滲漏而為腫瘤的轉(zhuǎn)移提供重要條件。

中藥及其提取物可使腫瘤血管的VEGF等生成因子的信號傳導(dǎo)途徑受到抑制，從而阻礙腫瘤血管生成因子的表達(dá)，還可促使血小板因子4等腫瘤血管生成抑制因子的表達(dá)[4]。機(jī)體內(nèi)腫瘤細(xì)胞存在異型性特征，從一定程度上證實(shí)腫瘤細(xì)胞存在不同階段的分化現(xiàn)象，腫瘤干細(xì)胞是腫瘤細(xì)胞分化發(fā)生以及發(fā)展的源動(dòng)力。中藥及其提取物可促使腫瘤干細(xì)胞恢復(fù)正常調(diào)節(jié)分化機(jī)制，不斷分化為正常細(xì)胞或者終末細(xì)胞，降低腫瘤細(xì)胞的惡性水平或使其自我更新能力喪失，從而達(dá)到抗腫瘤的效果。此外，多數(shù)腫瘤細(xì)胞存在不同程度的多重耐藥性，降低了腫瘤化療治療的療效。腫瘤多重耐藥的主要因素為其P-糖蛋白的相關(guān)表達(dá)，中藥及其

提取物可使P-糖蛋白在腫瘤細(xì)胞膜上的表達(dá)水平下調(diào)，從而使P-糖蛋白的活性受到抑制，降低腫瘤細(xì)胞的耐藥性，提升化療抗腫瘤的療效[5]。

白花蛇舌草屬于茜草科耳草植物，具有利尿消腫、清熱解毒的功效，目前廣泛應(yīng)用于治療肺癌、肝癌、白血病、胃腸道癌等疾病的治療，并且取得良好的治療效果。隨著研究深入，發(fā)現(xiàn)白花蛇舌草的核苷類成分具有較強(qiáng)的抗腫瘤活性。楊鵬等[6]通過24孔培養(yǎng)法及MTT法觀察白花蛇舌草核苷對人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株A549及人紅白血病細(xì)胞株K562的抑制作用，結(jié)果兩種細(xì)胞株抑制的最低濃度為100μg/ml及50μg/ml，證明白花蛇舌草核苷有抗腫瘤活性。

本文探討白花蛇舌草提取物對結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞株以及結(jié)腸癌HCTI16細(xì)胞株的抑制效果發(fā)現(xiàn)，隨著白花蛇舌草提取物濃度的上升，其腫瘤抑制率呈不斷上升態(tài)勢，抑制率與對照組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。曾永長等[7]采用白花蛇舌草提取物（HDNF）對直結(jié)腸癌細(xì)胞HCT-116、肺癌細(xì)胞A549以及肝癌細(xì)胞HepG2進(jìn)行體外抗腫瘤試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)中高劑量白花蛇舌草提取物的抑瘤作用顯著。但研究存在癌細(xì)胞株涉及范圍窄等缺陷性，應(yīng)進(jìn)一步進(jìn)行研究擴(kuò)充，為中藥及其提取物的臨床抗腫瘤治療提供科學(xué)可靠的依據(jù)。

綜上所述，中藥及其提取物的抗腫瘤已經(jīng)得到多數(shù)學(xué)者的廣泛認(rèn)可，臨床上也取得一定的成效。說明中藥及其提取物應(yīng)用于臨床抗腫瘤治療中的前景廣闊，值得臨床推廣應(yīng)用。

參考文獻(xiàn)

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[7]曾永長，梁少瑜，羅佳波，等.白花蛇舌草提取物（HDNF）體內(nèi)外抗腫瘤實(shí)驗(yàn)研究[J].中藥材，2011，34（4）：594-597.

（收稿日期：2016.04.06）