GSTM1、GSTT1基因多態(tài)性與白血病易感性的分析*

李　娟，朱俊芳，張　煒，馬海珍

(蘭州大學(xué)第一醫(yī)院：1.中心實(shí)驗(yàn)室；2.血液科　730000)

·論著·

GSTM1、GSTT1基因多態(tài)性與白血病易感性的分析*

李娟1，朱俊芳1，張煒1，馬海珍2△

(蘭州大學(xué)第一醫(yī)院：1.中心實(shí)驗(yàn)室；2.血液科730000)

目的分析GSTM1缺失基因型與白血病遺傳易感性的關(guān)系。方法131例白血病患者納入病例組，200例體檢健康者納入對(duì)照組。采用巢式PCR檢測(cè)GSTM1、GSTT1基因型。應(yīng)用χ2檢驗(yàn)和精確概率法比較各基因型頻率在病例組與對(duì)照組之間的差異，用比值比(OR)及其95%的可信區(qū)間(CI)表示各基因型發(fā)生白血病的風(fēng)險(xiǎn)度。結(jié)果病例組GSTM1缺失基因型頻率與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000 1，其OR值為2.152，95%CI為2.301～5.985)；在病例組與對(duì)照組中均未檢測(cè)到GSTT1缺失基因型；CML、AML與ALL組間進(jìn)行GSTM1缺失基因型頻率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論GSTM1缺失基因型可能是白血病的重要危險(xiǎn)因素。

白血?。籊STM1；GSTT1；谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶

白血病是一類起源于造血干細(xì)胞的惡性克隆性疾病，國(guó)內(nèi)外研究表明，遺傳因素、環(huán)境因素交互作用與白血病的發(fā)生及疾病的進(jìn)展有關(guān)。代謝酶遺傳多態(tài)性在對(duì)環(huán)境致癌物致突變過(guò)程中起著關(guān)鍵作用，日益受到學(xué)者們的關(guān)注。人體的Ⅱ相代謝酶谷胱甘肽 S-轉(zhuǎn)移酶超家族 (GSTs)可催化異生物素的Ⅰ相代謝產(chǎn)物與谷胱甘肽(GSH)結(jié)合，使其毒性降低，且易于排出體外，在細(xì)胞代謝解毒過(guò)程中起著重要作用[1]。研究證實(shí)GSTM1、GSTT1基因多態(tài)性與肺癌、消化道腫瘤的易感性存在著一定的關(guān)系[2-5]。本研究就GSTM1、GSTT1基因多態(tài)性與白血病易感性的關(guān)系進(jìn)行了探討。

1資料與方法

1.1一般資料收集2010 年6月至2012年5月蘭州大學(xué)第一醫(yī)院住院初診的131例白血病患者納入病例組，其中男73例，女58例，男女比例為1.26∶1.00。其中慢性髓細(xì)胞白血病(CML)組患者32例，男22例，女10例，年齡20～69歲，中位年齡45歲，男女比例為2.2∶1.0；急性髓細(xì)胞白血病(AML)組患者70例，男34例，女36例，男女比例為0.94∶1.00；急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)組患者29例，男16例，女13例，男女比例為1.23∶1.00。另選擇同期本院體檢中心體檢健康者200例納入對(duì)照組，其中男134例，女66例，年齡17～81歲，中位年齡40歲。病例組與對(duì)照組性別差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=3.544,P=0.06),具有可比性。

1.2檢測(cè)方法

1.2.1白血病診斷及療效判斷標(biāo)準(zhǔn)白血病診斷及誘導(dǎo)治療后第一療程的完全緩解(CR1)，以《血液病診斷及療效準(zhǔn)》作為診斷和療效判斷標(biāo)準(zhǔn)。

1.2.2基因組DNA提取采集白血病患者乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-Na2)抗凝骨髓2 mL，用常規(guī)酚氯仿法提取骨髓細(xì)胞基因組DNA并測(cè)定DNA的水平和純度，低溫保存。

1.2.3GSTM1及GSTT1多態(tài)基因型的確定采用巢式PCR檢測(cè)GSTM1和GSTT1基因的純合缺失。引物序列參照文獻(xiàn)[6],由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成。GSTM1基因上、下游引物序列為：F5′-GAA CTC CCT GAA AAG CTA AAG C-3′；R5′-GTT GGG CTC AAA TAT ACG GTG G-3′。GSTT1基因上、下游引物序列為：F5′-TTC CTT ACT GGT CCT CAC ATC TC-3′；R5′-TCA CCG GAT CAT GGC CAG CA-3′。該反應(yīng)以-globin為陽(yáng)性內(nèi)對(duì)照，其上、下游引物序列為：F5′-CAA CTT CAT CCA CGT TCA CC-3′；R5′-GAA GAG CCA AGG ACA GGT AC-3′。PCR反應(yīng)條件,94 ℃預(yù)變性4 min后進(jìn)入熱循環(huán)，94 ℃ 1 min，55 ℃ 45 s，72 ℃ 1 min，72 ℃ 10 min，共35個(gè)循環(huán)。GSTM1和GSTT1基因型結(jié)果分析：GSTM1 PCR產(chǎn)物為219 bp；GSTT1 PCR產(chǎn)物為480 bp；-globin PCR產(chǎn)物為268 bp。2%瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行結(jié)果判讀GSTM1缺失基因型為268、480 bp；GSTT1缺失基因型為268、219 bp；GSTM1及GSTM1聯(lián)合缺失基因型為268 bp。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS16.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料以例數(shù)及百分率表示，采用χ2檢驗(yàn)和精確概率法比較各基因型頻率在病例組與對(duì)照組之間的差異，用比值比(OR)及其95%的置信區(qū)間(CI)表示各基因型發(fā)生白血病的風(fēng)險(xiǎn)度。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1病例組與對(duì)照組基因型分布比較對(duì)照組中200例健康者中115例(57.5%)為GSTM1未缺失基因型，85例(42.5%)為GSTM1缺失基因型；病例組中131例白血病患者35例(26.7%)為GSTM1未缺失基因型，96例(73.3%)為GSTM1缺失基因型，兩組基因型頻率分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=30.27，P=0.000 1)，兩組GSTM1基因型的分布頻率見(jiàn)表1。

表1　病例組與對(duì)照組GSTM1位點(diǎn)基因型分布

2.2各組基因型分布比較70例AML患者20例(28.6%)為GSTM1未缺失基因型，50例(71.4%)為GSTM1缺失基因型，對(duì)照組與AML組基因型頻率分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=20.962，P=0.000 1)；29例ALL患者中6例(20.7%)為GSTM1未缺失基因型，23例(79.3%)為GSTM1缺失基因型，對(duì)照組與AML組基因型頻率分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=13.771，P=0.000 2)；32例CML患者中9例(28.1%)為GSTM1未缺失基因型，23例(71.9%)為GSTM1缺失基因型，對(duì)照組與AML組基因型頻率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=9.567，P=0.002 0)。CML、AML、ALL組與對(duì)照組中GSTM1基因型的分布頻率見(jiàn)表2。

表2　各組GSTM位點(diǎn)多態(tài)基因型分布頻率比較[n(%)]

2.33類白血病患者基因型分布比較CML組分別與AML、ALL組基因型頻率分布比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.002，P=0.963;χ2=0.454，P=0.500)。

3討論

本研究結(jié)果顯示，對(duì)照組中GSTM1缺失基因型頻率為42.5%，與國(guó)內(nèi)報(bào)道上海地區(qū)健康人群GSTM1的缺失率為49.1%相一致[7]。131例白血病病例中96例(73.3%)為GSTM1缺失基因型，病例組GSTM1缺失基因型明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=30.27，P=0.000 1，OR=2.152，95%CI：2.301～5.985)，本研究結(jié)果也顯示攜帶GSTM1缺失基因型的個(gè)體發(fā)生白血病的危險(xiǎn)性比攜帶GSTM1未缺失基因型的個(gè)體增加2.152倍。對(duì)病例組進(jìn)行了進(jìn)一步的分層研究，結(jié)果顯示AML、ALL、CML組分別與對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，OR值分別為3.908、5.186、3.458。表明GSTM1缺失基因型可能是白血病的重要危險(xiǎn)因素。國(guó)內(nèi)一項(xiàng)對(duì)苯引起的白血病研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，苯白血病患者中GSTM1缺失基因型的頻率(73.53%)明顯高于對(duì)照組(46.88%)，且是苯白血病的易感因素之一(OR=3.15,95%CI：0.56～17.62)[8]，與本研究結(jié)果相一致。本研究將CML組分別與AML、ALL組基因型頻率分布比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，表明GSTM1缺失基因型與白血病分型無(wú)相關(guān)性。本研究結(jié)果與袁慧等[9]報(bào)道的谷胱甘肽轉(zhuǎn)硫酶基因與急性白血病易感性的Meta分析的結(jié)果相一致。

谷胱甘肽轉(zhuǎn)硫酶是重要的Ⅱ相代謝酶，可結(jié)合各種親電子化合物，包括環(huán)境致癌物及其中間產(chǎn)物，使其水溶性增加，起到解毒的作用。具有GSTM1缺失基因型的個(gè)體體內(nèi)缺乏酶活性，對(duì)外來(lái)毒物的解毒功能降低，可能成為白血病的重要遺傳學(xué)危險(xiǎn)因素之一。由于本研究樣本量較小，不能排除偏倚和混雜因素的影響，期望更多學(xué)者關(guān)注谷胱甘肽轉(zhuǎn)硫酶基因與白血病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的研究，通過(guò)大樣本的驗(yàn)證，為白血病的防治提供科學(xué)依據(jù)。

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Analysis on the association between leukemia susceptibility and gene polymorphism of GSTM1，GSTT1*

LIJuan1，ZHUJunfang1，ZHANGWei1，MAHaizhen2△

(1.CentreforMolecularBiology；2.DepartmentofHematology，theFristHospitalofLanzhouUniversity，Lanzhou,Gansu730000,China)

ObjectiveTo investigate the relationship between leukemia susceptibility and gene polymorphism of GSTM1，GSTT1.MethodsA total of 131 leukemia patients were recruited into group of patients,and 200 healthy person were recruited into control group.GSTM1 and GSTT1 genotypes were determined by multiplex polymerase chain reaction.Chi-square test and Fisher′s exact test was used to compare the differences between the group of patients and control group.ResultsGSTM1 null genotype frequency in group of patients was slightly higher than that of the control group(P=0.000 1，OR=2.152，95%CI=2.301-5.985),There was no GSTT1 null genotype detected in group of patients and control group.Moreover,GSTM1 null genotype frequency showed a similar trend between CML,AML and ALL.ConclusionGSTM1 null genotype might be a risk factor of leukemia.

leukemia;GSTM1;GSTT1;glutathione S-transferase

2016-01-21修回日期：2016-03-14)

甘肅省蘭州市科技局自然科學(xué)基金項(xiàng)目(2011-2-46)。

李娟，女，副主任檢驗(yàn)師，主要從事罕見(jiàn)病及腫瘤遺傳學(xué)的研究。△

，E-mail：mahaizhen-2008@163.com。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.12.007

A

1673-4130(2016)12-1610-02