24 h快速眼動(dòng)睡眠剝奪大鼠血清的蛋白質(zhì)組學(xué)初步研究

郭興道，郜苗苗，李婷婷，張癸榮

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24 h快速眼動(dòng)睡眠剝奪大鼠血清的蛋白質(zhì)組學(xué)初步研究

郭興道1，2，郜苗苗1，李婷婷1，2，張癸榮1

目的探討睡眠剝奪大鼠血清蛋白質(zhì)組中差異表達(dá)蛋白質(zhì)及其意義。方法采用改良多平臺(tái)水環(huán)境法建立24 h快速眼動(dòng)睡眠剝奪大鼠模型。采用隨機(jī)數(shù)字表法將大鼠均分為模型（M）組、模型對(duì)照（MC）組、空白對(duì)照（BC）組，每組8只大鼠。觀察大鼠體質(zhì)量變化，采用Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)檢測(cè)睡眠剝奪對(duì)大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響，并用雙向電泳技術(shù)篩選血清差異蛋白，LC-MS/MS技術(shù)鑒定差異蛋白。結(jié)果BC組和MC組大鼠建模前后體質(zhì)量差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。M組大鼠毛發(fā)光澤下降，精神稍差，較亢奮，體質(zhì)量在睡眠剝奪后顯著降低。24 h快速眼動(dòng)睡眠剝奪對(duì)大鼠學(xué)習(xí)記憶能力無(wú)顯著性影響。各組之間蛋白質(zhì)點(diǎn)數(shù)目差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。質(zhì)譜鑒定出4種表達(dá)下降的蛋白，分別為Serotransferrin；Glutathione peroxidase 3；Ig kappa chain C region，B allele；Collagen alpha-2（I）chain。結(jié)論短期睡眠剝奪對(duì)機(jī)體的損傷可能與鐵離子代謝、氧化應(yīng)激和免疫功能等有關(guān)。

睡眠剝奪；血清；記憶；學(xué)習(xí)；蛋白質(zhì)組學(xué)；大鼠，Wistar

睡眠不足或睡眠質(zhì)量低下造成的睡眠紊亂及帶來(lái)的一系列不良后果即睡眠剝奪（sleep deprivation，SD）綜合征。由于疾病、噪聲和人工照明、工作壓力等諸多因素，SD正成為當(dāng)代社會(huì)的普遍現(xiàn)象。SD能夠引起機(jī)體損傷，如學(xué)習(xí)記憶能力下降［1］、警覺(jué)性降低［2］、免疫力下降［3］、心臟損傷［4］、胃腸疾?。?］等。然而，由于SD對(duì)機(jī)體的影響極其復(fù)雜，其對(duì)機(jī)體損傷的原因和發(fā)生機(jī)制尚不清楚。蛋白質(zhì)組學(xué)通過(guò)大規(guī)模、高通量、系統(tǒng)化地研究整個(gè)基因組在不同時(shí)空編碼的全部蛋白質(zhì)的組成、表達(dá)、結(jié)構(gòu)、功能及相互之間的作用和活動(dòng)規(guī)律［6-7］，從而在蛋白質(zhì)整體水平上揭示生命活動(dòng)的基本規(guī)律，并為相關(guān)疾病病理生理機(jī)制提供理論依據(jù)，也為疾病的診斷和治療提供新的蛋白靶點(diǎn)。血清蛋白質(zhì)是血液的重要組成部分，其在維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定、物質(zhì)運(yùn)輸及免疫防御等方面具有重要作用，對(duì)其進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)研究在醫(yī)學(xué)、生物學(xué)等多個(gè)領(lǐng)域具有重要意義。因此，本研究應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)方法，對(duì)24 h快速眼動(dòng)睡眠剝奪（rapid eye movement sleep deprivation，REM SD）大鼠的血清蛋白表達(dá)變化情況進(jìn)行初步研究，為進(jìn)一步SD研究奠定基礎(chǔ)。

1材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物24只健康雄性Wistar大鼠，SPF級(jí)，體質(zhì)量（160±10）g，周齡6～8周，購(gòu)自軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心［scxk-（軍）2012-0004］，飼養(yǎng)于總后衛(wèi)生部藥品儀器檢驗(yàn)所動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室［syxk-（軍）20120008］，自由進(jìn)食飲水，飼養(yǎng)溫度18～24℃，濕度45%～55%，12 h交替照明。

1.2主要試劑三氯乙酸、丙酮、硫酸銨均為國(guó)藥集團(tuán)產(chǎn)品，兩性電解質(zhì)為軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院產(chǎn)品，Bradford考馬斯亮藍(lán)蛋白定量試劑盒為北京索來(lái)寶產(chǎn)品，尿素、硫脲、CHAPS、考馬斯亮藍(lán)G-250、三羥甲基氨基甲烷、丙烯酰胺、甲叉雙丙烯酰胺、十二烷基硫酸鈉、四甲基乙二胺和過(guò)硫酸銨為AMRESCO產(chǎn)品，cocktail蛋白酶抑制劑為roche產(chǎn)品，DTT為merck產(chǎn)品，預(yù)染蛋白Marker為thermo產(chǎn)品，固相pH梯度干膠條（pH 4～10，17 cm）、低熔點(diǎn)瓊脂糖溶液和礦物油為Bio-Rad產(chǎn)品，Trypsin Gold酶為promega產(chǎn)品，Milli-Q水由Millipower儀制得。

1.3主要儀器離心機(jī)（thermo），等電聚焦電泳儀、垂直電泳系統(tǒng)（Bio-Rad），液相色譜儀（Agilent），MicrOTOF-QⅡTMLC-MS/MS（Bruker）。

1.4動(dòng)物分組與模型建立采用隨機(jī)數(shù)字表法將大鼠均分為3組，分別為模型（M）組、模型對(duì)照（MC）組、空白對(duì)照（BC）組，每組8只。建模前，將M組和MC組大鼠放在水環(huán)境上適應(yīng)1周，每天適應(yīng)1 h。采用改良多平臺(tái)水環(huán)境法（MMPM）制備REM SD模型，水溫保持在22℃左右，水面距平臺(tái)約1.0 cm，將大鼠放于睡眠剝奪箱內(nèi)平臺(tái)上。為排除水環(huán)境造成的影響，設(shè)MC組，采用與M組大小一樣的鼠箱，但在其底部并不放置平臺(tái)，而是放置一面細(xì)密鐵絲網(wǎng)，將大鼠放在網(wǎng)上，網(wǎng)下置水距離網(wǎng)格1 cm，以形成與M組相似的環(huán)境，其他環(huán)境與M組相同。BC組則于籠中正常飼養(yǎng)。建模期間12 h光照/12 h黑暗（8：00—20：00），大鼠自由飲食和飲水。建模前后稱量大鼠體質(zhì)量。

1.5水迷宮實(shí)驗(yàn)首先進(jìn)行適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)，持續(xù)2 d，每日1次，時(shí)間8：00—11：30，將大鼠置于水迷宮中（無(wú)平臺(tái)）自由游泳90 s。第1天入水點(diǎn)為S（南），第2天入水點(diǎn)為N（北）。大鼠適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)完成后，開(kāi)始定位航行實(shí)驗(yàn)（place navigation test，PNT），連續(xù)5 d，每天訓(xùn)練4次，時(shí)間8：00—14：30。直徑12 cm的黑色平臺(tái)調(diào)整為高出池底23.5 cm，放置于SW（西南）象限的中央，加水使水面高出平臺(tái)約1.5 cm。同一天的4次訓(xùn)練入水點(diǎn)均不同，從N、E（東）、NW（西北）、SE（東南）4個(gè)點(diǎn)中隨機(jī)選擇，同次訓(xùn)練時(shí)所有大鼠入水點(diǎn)相同。訓(xùn)練時(shí)，將大鼠從某個(gè)入水點(diǎn)面向池內(nèi)壁放入水中，允許大鼠自由游泳90 s，如在90 s內(nèi)大鼠能找到隱藏于水下的平臺(tái)，則記錄從入水至到達(dá)平臺(tái)的時(shí)間為潛伏期，允許其在平臺(tái)上停留15 s，觀察四周的空間線索，然后用毛巾擦干放回籠中。如超過(guò)90 s仍未找到平臺(tái)，則引導(dǎo)其到平臺(tái)上，伏期記錄為90 s，同樣允許其在平臺(tái)上停留15 s，然后擦干放回籠中。使用攝像頭跟蹤記錄大鼠在水迷宮內(nèi)的運(yùn)動(dòng)軌跡，通過(guò)計(jì)算機(jī)分析得出相應(yīng)的潛伏期。大鼠完成連續(xù)5 d的空間學(xué)習(xí)訓(xùn)練后，建立24 h REM SD模型，建模后再進(jìn)行一次PNT實(shí)驗(yàn)。最后進(jìn)行空間探索實(shí)驗(yàn)（Spatial probe test），撤去平臺(tái)，將大鼠從平臺(tái)對(duì)側(cè)放入水中，測(cè)量大鼠于平臺(tái)所在目標(biāo)象限（goal quadrant）中游泳時(shí)間所占水中總時(shí)間百分比。

1.6血清收集水迷宮實(shí)驗(yàn)完成后，乙醚麻醉大鼠，并立即斷頭處死取血。血液于4℃靜置1 h后，3 000 r/min離心45 min。取上清液再次3 000 r/min，離心10 min。收集血清，并分別將各組的8只大鼠血清等體積混勻，分裝，儲(chǔ)存于-80℃?zhèn)溆谩?/p>

1.7血清中高豐度蛋白的去除每20 μL血清加入80 μL 含10%TCA的丙酮溶液（V：V），混勻并于-20℃條件下靜置90 min后，在4℃，15 000×g條件下離心20 min。棄去上清，加入1.5 mL預(yù)冷的丙酮清洗血清蛋白沉淀，充分混勻后，在冰中靜置15 min，之后再次4℃，15 000×g離心20 min，棄去上清，再重復(fù)此步驟3次。最后凍干蛋白，用100 μL含cocktail蛋白酶抑制劑的裂解液（7 mol/L尿素、2 mol/L硫脲、4%CHAPS、20 mmol/L TRIS、60 mmol/L DTT、0.2%兩性電解質(zhì)）超聲溶解凍干蛋白，分裝并保存于-80℃。

1.8蛋白濃度測(cè)定按照Bradford考馬斯亮藍(lán)蛋白定量試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。

1.9雙向電泳取1 mg蛋白與適量水化液混勻至350 μL，加至電泳槽內(nèi)，50 V條件下水化16 h，升壓程序依次為250 V線性升壓0.5 h，1 000 V快速升壓1 h，10 000 V線性升壓5 h，10 000 V至總伏小時(shí)數(shù)為70 000 Vh，1 000 V快速降壓36 h。等電聚焦結(jié)束之后，進(jìn)行膠條平衡，然后以150 V 1 h，250 V 4 h進(jìn)行分離膠濃度為12%的SDS-PAGE電泳。固定液（40%乙醇，10%冰醋酸）固定30 min，“blue silver”膠體考馬斯亮藍(lán)G-250染色過(guò)夜，Milli-Q水脫色至背景無(wú)色，Umax Power Look 2100 XL掃描儀在300 dpi，256色階條件下掃描。PD Quest 8.0軟件篩選出表達(dá)變化倍數(shù)大于2倍或小于0.5倍的蛋白點(diǎn)。

1.10差異蛋白鑒定和數(shù)據(jù)庫(kù)檢索切取差異蛋白點(diǎn)，置于0.6 mL的EP管中，進(jìn)行消化酶解，樣品采用LC-MS/MS質(zhì)譜分析，并用Mascot檢索swissprot數(shù)據(jù)庫(kù)，對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行鑒定。

1.11統(tǒng)計(jì)學(xué)方法用SPSS 21.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，各組研究資料用x ±s表示，大鼠體質(zhì)量和水迷宮實(shí)驗(yàn)中定位航行實(shí)驗(yàn)采用配對(duì)t檢驗(yàn)；其他采用單因素方差分析，結(jié)合Post-hoc檢驗(yàn)；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1大鼠體質(zhì)量情況比較與BC組和MC組大鼠相比，M組大鼠表現(xiàn)亢奮，毛發(fā)光澤有所下降。在SD前后，BC組大鼠體質(zhì)量為（234.21±8.45）g、（242.65± 14.03）g，MC組為（234.00±10.93）g、（238.94±15.35）g，M組為（236.06±8.09）g、（227.00±8.36）g；BC組和MC組大鼠建模前后體質(zhì)量差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（n= 8，t分別為1.878和0.715，均P＞0.05）；M組大鼠體質(zhì)量在SD后顯著降低（n=8，t=7.010，P＜0.05）。

2.2學(xué)習(xí)記憶能力考察M、MC和BC組大鼠建模前后相比，在定位航行實(shí)驗(yàn)中潛伏期差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t分別為0.255、0.770、0.289，P＞0.05）；在空間探索實(shí)驗(yàn)中，M、MC和BC組大鼠于平臺(tái)所在目標(biāo)象限中游泳時(shí)間所占總時(shí)間百分比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=0.201，P＞0.05），見(jiàn)圖1。

A：潛伏期；B：空間探索實(shí)驗(yàn)大鼠于平臺(tái)所在目標(biāo)象限中游泳時(shí)間占總時(shí)間百分比Fig.1 The effect of sleep deprivation on learningand memory in rats圖1　睡眠剝奪對(duì)大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響

2.3雙向電泳圖像分析

2.3.1大鼠血清蛋白雙向電泳蛋白點(diǎn)數(shù)分析BC組、MC組和M組蛋白點(diǎn)數(shù)、各組與主膠匹配的蛋白點(diǎn)數(shù)、各組匹配的蛋白點(diǎn)數(shù)占所在凝膠蛋白點(diǎn)數(shù)的百分比（匹配率1）以及各組匹配的蛋白點(diǎn)數(shù)占主膠中蛋白點(diǎn)數(shù)百分比（匹配率2）差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。此外蛋白分子質(zhì)量主要分布在10～95 ku之間，等電點(diǎn)主要分布在4.5～6.5之間，見(jiàn)表1、圖2。

Tab. 1 Comparison of 2-DE maps of rat serum between three groups表1　各組大鼠血清雙向電泳圖譜的比較

Tab. 1 Comparison of 2-DE maps of rat serum between three groups表1　各組大鼠血清雙向電泳圖譜的比較

均P＞0.05

組別BC組MC組M組F蛋白質(zhì)點(diǎn)數(shù)306.67±5.13 301.67±10.69 311.00±3.46 1.287匹配的蛋白質(zhì)點(diǎn)數(shù)284.33±2.52 285.33±3.51 280.00±3.61 2.283匹配率1 （%）92.33±0.58 94.00±4.58 89.33±1.15 2.221匹配率2 （%）80.33±0.58 81.00±1.00 79.00±1.00 4.000

2.3.2差異表達(dá)蛋白的篩選與鑒定與BC組和MC組相比，M組均表達(dá)變化2倍以上或0.5倍以下的差異蛋白點(diǎn)共有6個(gè)，見(jiàn)表2，并對(duì)其進(jìn)行LC-MS/ MS質(zhì)譜測(cè)定和數(shù)據(jù)庫(kù)檢索。4種蛋白表達(dá)均下降，分別為Serotransferrin；Glutathione peroxidase 3；Ig kappa chain C region，B allele；Collagen alpha-2（I）chain，見(jiàn)圖2、表2。

A：BC組；B：MC組；C：M組Fig. 2 2-DE maps of serum sample圖2　血清2-DE圖譜

3　討論

由于當(dāng)代社會(huì)快速發(fā)展，各種主客觀因素如噪聲、疾病和工作等，使得SD的發(fā)生成為常態(tài)，且其對(duì)人們生活的不良影響正日益突顯。SD作為強(qiáng)烈的應(yīng)激源，可誘導(dǎo)腦組織發(fā)生氧化應(yīng)激和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激乃至細(xì)胞凋亡以及引起血腦屏障和血-腦脊液屏障的通透性發(fā)生改變或損傷［8-9］，這使得SD后腦組織中的特有蛋白如MBP［10］在血清中發(fā)生變化。此外，SD會(huì)引起機(jī)體交感迷走神經(jīng)失衡，導(dǎo)致交感神經(jīng)過(guò)度興奮，血清中各種細(xì)胞因子、激素水平出現(xiàn)異常，進(jìn)而加劇SD對(duì)機(jī)體的一系列損傷［11］。研究表明，短期SD即可導(dǎo)致學(xué)習(xí)記憶能力發(fā)生改變［12］。因此，本文對(duì)短期24 h SD模型大鼠進(jìn)行血清蛋白質(zhì)組學(xué)初步研究，以篩選SD損傷機(jī)體的標(biāo)志物或藥物作用靶標(biāo)。

Tab.2 Identification of differentially expressed proteins表2　差異表達(dá)蛋白的鑒定

改良多平臺(tái)水環(huán)境法主要利用大鼠畏水原理，將大鼠置于四周環(huán)水的小平臺(tái)上，使大鼠進(jìn)入REM睡眠后因肌張力降低接觸水面而保持覺(jué)醒狀態(tài)。MMPM法能幾乎完全剝奪REM睡眠［13-14］；且與其他水環(huán)境法相比，能有效降低各種干擾因素，如體力疲勞、活動(dòng)限制、反復(fù)落水，群體穩(wěn)定性等［15］。因此，本實(shí)驗(yàn)采用MMPM法建立了REM SD模型。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與MC組、BC組相比，M組大鼠較亢奮，毛發(fā)較散亂且光澤有所下降，體質(zhì)量下降，而學(xué)習(xí)記憶能力無(wú)顯著變化。結(jié)果表明，水環(huán)境對(duì)大鼠一般情況和空間學(xué)習(xí)記憶能力無(wú)顯著不良影響；24 h REM SD可使大鼠體質(zhì)量減輕，但對(duì)大鼠學(xué)習(xí)記憶能力無(wú)顯著影響。已有研究表明，SD能夠引起大鼠體質(zhì)量下降［16-18］。本實(shí)驗(yàn)未觀察到大鼠學(xué)習(xí)記憶能力發(fā)生顯著變化，可能由于大鼠進(jìn)行了5 d的定位航行學(xué)習(xí)訓(xùn)練，加強(qiáng)了大鼠學(xué)習(xí)程度并鞏固了大鼠空間記憶，因而在本實(shí)驗(yàn)中24 h REM SD模型對(duì)大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響并不顯著，這與王貴平［19］研究結(jié)果基本相同。

方法［20］，采用TCA/丙酮法處理血清后，進(jìn)行2-DE分離，對(duì)差異蛋白質(zhì)點(diǎn)進(jìn)行質(zhì)譜鑒定和數(shù)據(jù)庫(kù)檢索，結(jié)果表明共4種蛋白發(fā)生變化，分別為：Serotransferrin；Glutathione peroxidase 3；Ig kappa chain C region，B allele；Collagen alpha-2（I）chain。轉(zhuǎn)鐵蛋白主要參與鐵的運(yùn)輸與代謝［21-22］。鐵元素是多種酶和輔基的重要組成部分，其在細(xì)胞呼吸鏈電子傳遞、能量代謝、血紅素代謝、氧的運(yùn)輸、細(xì)胞信息傳遞、免疫功能等方面發(fā)揮重要作用。Kuhn等［23］研究表明SD第5天血清鐵含量顯著減少。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)24 h SD大鼠血清轉(zhuǎn)鐵蛋白表達(dá)下降，提示短期SD可能已經(jīng)導(dǎo)致機(jī)體內(nèi)鐵代謝紊亂，但其在各組織中的變化趨勢(shì)仍需做進(jìn)一步研究。Glutathione peroxidase 3屬于谷胱甘肽過(guò)氧化物酶家族成員，通過(guò)催化谷胱甘肽，減少過(guò)氧化氫、脂質(zhì)過(guò)氧化物和有機(jī)過(guò)氧化物而保護(hù)細(xì)胞免受氧化損傷。已有研究表明SD可導(dǎo)致各組織器官氧化應(yīng)激：SD后腦組織中超氧化物岐化酶（SOD）和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活性降低［24-25］；大鼠咬肌與心肌中谷胱甘肽和丙二醛增高，谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活性降低［26-27］。本研究鑒定的蛋白質(zhì)點(diǎn)Glutathione peroxidase 3表達(dá)下降，證實(shí)短期SD后大鼠即處于氧化應(yīng)激狀態(tài)。Ig kappa chain C region，B allele參與機(jī)體的免疫過(guò)程。本實(shí)驗(yàn)24 h REM SD導(dǎo)致大鼠Ig kappa chain C region，B allele表達(dá)下降，表明24 h REM SD使大鼠免疫力下降。Collagen alpha-2（I）chain在組織生長(zhǎng)和修復(fù)中起重要作用。Collagen I蛋白是心肌膠原纖維的重要組成部分。已有研究表明SD能夠引起心肌損傷［27］。在本實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)SD后血清中Collagen alpha-2（I）chain蛋白減少，提示短期SD對(duì)機(jī)體心臟損傷可能與Collagen alpha-2（I）chain蛋白表達(dá)減少有關(guān)。

綜上所述，本研究基于短期REM SD模型，采用蛋白質(zhì)組學(xué)相關(guān)技術(shù)對(duì)大鼠血清蛋白進(jìn)行研究。結(jié)果表明雖然24 h REM SD對(duì)大鼠學(xué)習(xí)記憶能力無(wú)顯著影響，但在分子水平上已引起大鼠血清蛋白發(fā)生變化，這些差異蛋白主要與鐵離子代謝、氧化應(yīng)激、免疫功能等方面有關(guān)。短期SD可能通過(guò)影響上述蛋白而引起組織細(xì)胞損傷。這為研究長(zhǎng)期SD以及更深入研究SD提供了一定的理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

（圖2見(jiàn)插頁(yè)）

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（2015-10-09收稿2015-11-30修回）

（本文編輯魏杰）

A preliminary study on serum proteomics approach in rats of 24-h rapid eye movement sleep deprivation

GUO Xingdao1，2，GAO Miaomiao1，LI Tingting1，2，ZHANG Guirong1
1 Institute for Drug and Instrument Quality Control of Health Department GLD of PLA，Beijing 100071，China；2 Hebei North University Corresponding Author E-mail：guirong_zhang@126.com

Objective To investigate the differential expressions of serum proteins by proteomics approach in rat model of sleep deprivation. Methods A rat model of 24-h rapid eye movement sleep deprivation was induced by MMPM. Twentyfour rats were randomly and averagely divided into three groups，namely，model group（M），model control group（MC）and blank control group（BC）. Changes of body mass in rats were observed. Morris water maze test was used to evaluate the effect of sleep deprivation on learning and memory ability. Serum proteins were separated by two-dimensional electrophoresis and identified by LC-MS/MS. Results There was no significant difference in rat body weight between BC group and MC group. After sleep deprivation，mental irritable，pelage dull and weight loss were found in M group，but no significant changes were found in learning and memory ability. There were no significant differences in the number of protein spots between three groups. Four proteins were down regulated：Serotransferrin，Glutathione peroxidase 3，Ig kappa chain C region，B allele and Collagen alpha-2（I）chain. Conclusion The short term sleep deprivation may be related to iron metabolism，oxidative stress and immune function in rats.

sleep deprivation；serum；memory；learning；proteomics；rats，Wistar

R338.63

A

10.11958/20150207

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（30901581）

1北京，總后勤部衛(wèi)生部藥品儀器檢驗(yàn)所（郵編100071）；2河北張家口，河北北方學(xué)院

郭興道（1988），男，碩士，主要從事藥學(xué)相關(guān)研究

E-mail：guirong_zhang@126.com