拉米夫定聯(lián)合阿德福韋對(duì)乙型肝炎患者免疫應(yīng)答與漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞功能變化的研究

陳曉春，黃昌靖

(1.浙江省衢州市人民醫(yī)院 感染科，浙江 衢州 324000，2.湖北工業(yè)大學(xué) 生物工程學(xué)院，湖北 武漢 430070)

拉米夫定聯(lián)合阿德福韋對(duì)乙型肝炎患者免疫應(yīng)答與漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞功能變化的研究

陳曉春1Δ，黃昌靖2

(1.浙江省衢州市人民醫(yī)院 感染科，浙江 衢州 324000，2.湖北工業(yè)大學(xué) 生物工程學(xué)院，湖北 武漢 430070)

目的 探討拉米夫定聯(lián)合阿德福韋對(duì)乙型肝炎患者免疫應(yīng)答與漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞功能變化的影響。方法 收集48例慢性乙型肝炎患者，隨機(jī)分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，每組各24例，在常規(guī)治療基礎(chǔ)上，對(duì)照組患者給予拉米夫定治療，實(shí)驗(yàn)組在對(duì)照組基礎(chǔ)上給予阿德福韋治療，治療結(jié)束后，對(duì)所有患者的血清AST、ALT、IFN-α水平及外周血CD4+、CD8+T細(xì)胞、CD4+/CD8+、pDCs水平進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果 治療后，與對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)組患者的外周血CD4+T細(xì)胞及CD4+/CD8+水平較高(P<0.05)；實(shí)驗(yàn)組患者的血清IFN-α及外周血pDCs水平較高(P<0.05)；實(shí)驗(yàn)組患者的血清AST、ALT水平較低(P<0.05)。結(jié)論 拉米夫定聯(lián)合阿德福韋能夠顯著提高乙型肝炎患者的免疫應(yīng)答以及漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞功能，改善肝功能。

拉米夫定；阿德福韋；乙型肝炎；免疫應(yīng)答；漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞功能

乙型肝炎由乙肝病毒(hepatitis B virus，HBV))引起的、以肝臟炎性病變?yōu)橹鞑⒖梢鸲嗥鞴贀p害的一種傳染病[1]。本病屬于世界流行性傳染病，資料顯示，全球約有20億人已感染HBV，其中3.5億～4億人患有慢性肝臟感染，每年約有600萬人死于急性或慢性乙型肝炎[2]。而我國(guó)是乙型肝炎的高發(fā)區(qū)，目前有2000多萬慢性乙肝(chronic hepatitis B，CHB)患者，每年因乙肝相關(guān)疾病死亡的約有23.7萬人，其中有15.6萬人死于肝癌[3]，并且發(fā)病率呈逐年上升的趨勢(shì)。CHB具有傳染性，控制不良容易反復(fù)發(fā)作，進(jìn)展為肝硬化，甚至肝癌，嚴(yán)重威脅患者生命。因此，早期合理有效的治療尤為重要。對(duì)于慢性乙型肝炎，臨床上尚無特異性的治療手段，主要使用拉米夫定、干擾素-α進(jìn)行抗病毒治療，但是，拉米夫定長(zhǎng)期應(yīng)用容易出現(xiàn)病毒變異和臨床抗藥性[4]，干擾素的近期治療效果也不甚理想。阿德福韋屬于新型的核苷類抗病毒藥物，有研究顯示，阿德福韋對(duì)HBV野毒株和對(duì)拉米夫定耐藥的突變株均具有顯著的治療作用[5]。因此，本研究通過觀察治療前后患者血清谷草轉(zhuǎn)氨酶(aspartate aminotransferase，AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(Alanine transaminase，ALT)、干擾素-α(interferon-α，IFN-α)水平及外周血輔助性T細(xì)胞CD4(monoclonal antibody to CD4，CD4+)、輔助性T細(xì)胞CD8(monoclonal antibody to CD8， CD8+T)細(xì)胞、CD4+/CD8+、漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞(Plasma cell like dendritic cells，pDCs)水平的變化，探討拉米夫定聯(lián)合阿德福韋對(duì)患者免疫應(yīng)答與漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞功能的影響。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集浙江省衢州市人民醫(yī)院感染科2013年12月～2014年12月的確診為慢性乙型肝炎的患者48例，隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組患者24例，男性15例，女性9例，年齡22～70歲，平均年齡(39.6±12.1)歲，平均病程(8.5±4.2)月。對(duì)照組患者24例，男性16例，女性8例，年齡24～68歲，平均年齡(38.7±11.6)歲，平均病程(8.9±4.1)月。2組患者的性別組成、年齡分布、平均病程等一般臨床資料差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性，本實(shí)驗(yàn)經(jīng)本院倫理協(xié)會(huì)批準(zhǔn)，患者簽署知情同意書。診斷及排除標(biāo)準(zhǔn)：診斷依據(jù)根據(jù)2010年中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)分會(huì)制訂的《慢性乙型肝炎防治指南(2010年版)》關(guān)于慢性慢性乙型肝炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]，并經(jīng)實(shí)驗(yàn)室檢查確診；排除標(biāo)準(zhǔn)：①乙肝病毒表面抗原(HbeAg)陰性；②合并其他慢性肝病、丙型肝炎、丁型肝炎、自身免疫性肝病等；③合并惡性腫瘤；④合并心力衰竭、腎功能不全等；⑤近期服用抗病毒藥物；⑥對(duì)研究中所涉及藥物過敏的患者。

1.2 方法

1.2.1 治療方法：根據(jù)臨床用藥指南，2組患者均常規(guī)給予肝保護(hù)以及對(duì)癥治療，在此基礎(chǔ)上，對(duì)照組患者給予拉米夫定片(安徽貝克生物制藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H20103618)100 mg，1次/天口服；實(shí)驗(yàn)組患者在對(duì)照組治療的基礎(chǔ)上給予阿德福韋酯片(江蘇天士力帝益藥業(yè)有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H20080365)10 mg，1次/天口服。2組患者均治療1年。

1.2.2 血清指標(biāo)采集：治療前后，所有研究對(duì)象均采集空腹12小時(shí)后靜脈血5 mL，通過離心機(jī)分離血清，采用OLYMPUSAU5400全自動(dòng)生化分析儀，通過速率法檢測(cè)血清中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)及門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)水平；采用美國(guó)BioTek Synergy H1全功能酶標(biāo)儀，嚴(yán)格按照試劑盒說明操作，通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)血清中干擾素α(IFN-α)水平。

1.2.3 細(xì)胞學(xué)檢測(cè)：治療前后，采集所有患者空腹靜脈血3 mL，置于抗凝管中，采用貝克曼庫爾特Gallios流式細(xì)胞儀。檢測(cè)外周血中CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞、CD4+/CD8+比值及漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞(pDCs)水平

2 結(jié)果

2.1 治療前后2組患者外周血CD4+、CD8+T細(xì)胞及CD4+/CD8+水平比較 治療后2組患者的外周血CD4+T細(xì)胞及CD4+/CD8+水平與治療前比較均明顯升高，與對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)組患者的外周血CD4+T細(xì)胞及CD4+/CD8+水平明顯較高(P<0.05)；治療后2組患者的外周血CD8+T細(xì)胞水平與治療前比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表1。

表1 治療前后2組患者外周血CD4+、CD8+ T細(xì)胞及 CD4+/CD8+水平比較

*P<0.05，與同組治療前比較，compared with the same group pre-treatment；#P<0.05，與對(duì)照組治療后比較，compared with control group post-treatment

2.2 治療前后2組患者血清IFN-α及外周血pDCs水平比較 治療后2組患者的血清IFN-α及外周血pDCs水平與治療前比較均明顯升高，與對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)組患者的血清IFN-α及外周血pDCs水平明顯較高(P<0.05)。見表2。

表2 治療前后2組患者血清IFN-α及外周血pDCs水平比較±s)

*P<0.05，與同組治療前比較，compared with the same group pre-treatment；#P<0.05，與對(duì)照組治療后比較，compared with control group post-treatment

2.3 治療前后2組患者血清AST、ALT水平比較 治療后2組患者的血清AST、ALT水平與治療前比較均明顯降低，與對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)組患者的血清AST、ALT水平明顯較低(P<0.05)。見表3。

組別 例數(shù)時(shí)間ASTALT對(duì)照組24治療前98 85±11 58147 98±21 05治療后43 67±6 21?56 34±8 04?實(shí)驗(yàn)組24治療前99 73±12 48148 65±21 22治療后32 75±4 35?#47 38±6 41?#

*P<0.05，與同組治療前比較，compared with the same group pre-treatment；#P<0.05，與對(duì)照組治療后比較，compared with control group post-treatment

3 討論

近年來，隨著我國(guó)乙肝疫苗接種的不斷普遍，CHB的發(fā)病情況雖然得到一定控制，但發(fā)病率及死亡率仍不斷上升，居于各種傳染病之首，給患者帶來很大的痛苦。CHB臨床主要表現(xiàn)為畏食、乏力、腹脹、惡心、肝區(qū)疼痛等[7]，嚴(yán)重者可出現(xiàn)肝脾腫大、黃疸、肝區(qū)疼痛，引發(fā)脂肪肝、肝硬化、肝癌等嚴(yán)重并發(fā)癥，危及患者生命。本病主要通過血液、母嬰、性接觸等途徑傳播，其發(fā)病與HBV在機(jī)體內(nèi)持續(xù)復(fù)制和機(jī)體免疫清除功能障礙兩個(gè)要素有關(guān)，所以，抗病毒是CHB最主要的治療手段。抗病毒藥物種類較多，但單藥應(yīng)用臨床療效并不理想，抗病毒藥物聯(lián)合應(yīng)用目前已成為臨床研究熱點(diǎn)之一[8]。拉米夫定是雙脫氧核苷類似物，能夠競(jìng)爭(zhēng)性的抑制HBV病毒DNA鏈的合成和延長(zhǎng)，減少HBV復(fù)制，起到抗病毒的作用。拉米夫定治療CHB需要長(zhǎng)期應(yīng)用才能實(shí)現(xiàn)理想治療作用，但是，隨著用藥時(shí)間的延長(zhǎng)很容易出現(xiàn)病毒耐藥[9]。阿德福韋是新型的腺嘌呤核苷類似物，能夠與腺苷酸競(jìng)爭(zhēng)性摻入病毒DNA鏈，抑制DNA聚合酶，從而抑制病毒復(fù)制，同時(shí)可以刺激機(jī)體的免疫反應(yīng)，具有較強(qiáng)的抗病毒作用。有研究顯示[10]，拉米夫定耐藥慢性乙型肝炎患者采用阿德福韋和拉米夫定聯(lián)合治療有效。所以，在本實(shí)驗(yàn)中，筆者通過觀察患者治療前后免疫應(yīng)答與漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞功能的變化，探討拉米夫定聯(lián)合阿德福韋對(duì)慢性乙肝患者的治療效果及作用機(jī)理。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)組患者的外周血CD4+T細(xì)胞及CD4+/CD8+水平與對(duì)照組比較明顯較高，證實(shí)了拉米夫定聯(lián)合阿德福韋能夠提高患者的免疫功能。T淋巴細(xì)胞是構(gòu)成機(jī)體免疫系統(tǒng)的主要部分，能夠反應(yīng)機(jī)體的免疫狀態(tài)，在CHB患者體內(nèi)，CD4+T細(xì)胞能夠促進(jìn)B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體，清除HBV；CD8+T細(xì)胞能夠識(shí)別病毒與肝細(xì)胞結(jié)合形成的復(fù)合物，對(duì)肝細(xì)胞產(chǎn)生破壞，有報(bào)道稱，體內(nèi)高水平的病毒載量導(dǎo)致持續(xù)低下的T淋巴細(xì)胞反應(yīng)[11]，使得血清CD4+T細(xì)胞水平、CD4+/CD8+比值降低，免疫功能下降。

pDCs是一種天然抗原提呈細(xì)胞，能夠合成釋放大量IFN-α。IFN-α能夠誘導(dǎo)細(xì)胞合成抗病毒蛋白，抑制乙肝病毒的復(fù)制，發(fā)揮廣譜抗病毒作用。有研究顯示，在CHB患者體內(nèi)pDCs數(shù)量和功能都有所降低[12]。本研究結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組患者的血清IFN-α及外周血pDCs水平與對(duì)照組比較明顯較高(P<0.05)，表明拉米夫定聯(lián)合阿德福韋能夠能夠提高pDCs功能，恢復(fù)機(jī)體抗病毒效應(yīng)。所以，實(shí)驗(yàn)組患者的血清AST、ALT水平與對(duì)照組比較明顯較低(P<0.05)，患者的肝功能得到恢復(fù)。

本實(shí)驗(yàn)通過48例慢性乙型肝炎患者血清AST、ALT、IFN-α水平及外周血CD4+、CD8+T細(xì)胞、CD4+/CD8+、pDCs水平的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析，證實(shí)了拉米夫定聯(lián)合阿德福韋能夠顯著提高乙型肝炎患者的免疫應(yīng)答以及漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞功能，改善肝功能，對(duì)臨床有指導(dǎo)意義，在下一步研究中，將進(jìn)行分子機(jī)制方面研究，為本實(shí)驗(yàn)所反映的現(xiàn)象做出進(jìn)一步論證和分析。

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(編校：譚玲)

Effect of lamivudine combined with adefovir on changes of immune response and plasmacytoid dendritic cell function in patients with hepatitis B

CHEN Xiao-chun1Δ, HUANG Chang-jing2

(1.Department of Infectious Diseases, Quzhou People’s Hospital of Zhejiang Province, Quzhou 324000, China; 2.Institute of Biological Engineering, Hubei University of Technology, Wuhan 430070, China)

ObjectiveTo analysis the effect of lamivudine combined with adefovir on changes of immune response and plasmacytoid dendritic cell function in patients with hepatitis B.Methods48 patients who were diagnosed with chronic hepatitis B were randomly divided into experimental group and control group,24 cases in each group.On the basis of conventional treatment, patients in the control group

lamivudine therapy, patients in the experimental group were treated with adefovir on the basis of the control group, after the treatment, the serum levels of AST,ALT,IFN-α and peripheral blood CD4+, CD8+T cells, CD4+/CD8+and pDCs levels were detected in all patients.ResultsAfter treatment, compared with control group,the peripheral blood level of CD4+T cells and CD4+/CD8+were higher in the experimental group,and the difference was statistically significant (P<0.05);the serum level of IFN-α and peripheral blood level of pDCs were higher in the experimental group (P<0.05);the serum levels of AST and ALT were lower in the experimental group (P<0.05).ConclusionThe lamivudine combined with adefovir can significantly improve the immune response and the function of plasma cell like dendritic cells in patients with hepatitis B, improve liver function.

lamivudine; adefovir; hepatitis B; immune response; plasmacytoid dendritic cell function

浙江省中醫(yī)藥科技計(jì)劃項(xiàng)目(2007CB199)

陳曉春，通信作者，女，主治醫(yī)師，本科，研究方向：肝炎結(jié)核及感染性疾病，E-mail：zjchenxiaochun@163.com。

R978.1

A

1005-1678(2016)02-0125-03