鹽度對鱸魚稚、幼魚發(fā)育階段氨基酸的影響

楊　山，王　艷，劉　濤，胡先成，陳　煒

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鹽度對鱸魚稚、幼魚發(fā)育階段氨基酸的影響

楊山1，王艷2，劉濤1，胡先成1，陳煒1

（1.重慶師范大學 生命科學學院，動物生物學重慶市市級重點實驗室，重慶 401331； 2.河北工業(yè)大學 城市學院，天津300130）

摘要：為揭示鱸魚（Lateolabrax japonicus）稚、幼魚在淡化過程中氨基酸的組成及含量的變化規(guī)律，本實驗在15.00、7.50及0.00 共3個鹽度梯度下，用氨基酸全自動分析儀對鱸魚稚、幼魚氨基酸的組成及含量進行了測定和分析。結果表明，實驗中，3個鹽度組的總氨基酸含量均逐漸增加，且它們之間沒有顯著性差異； 實驗中15.00鹽度的必需氨基酸總量略呈下降趨勢，而7.50鹽度組和0.00鹽度組均呈上升趨勢，3個鹽度之間存在顯著性差異（P>0.05）； 除脯氨酸外，3個鹽度組中其他的非必需氨基酸含量及總的非必需氨基酸含量也均無顯著差異。

關鍵詞：鱸魚（Lateolabrax japonicus）； 稚魚； 幼魚； 鹽度； 氨基酸

［Foundation： Chongqing Science and Technology Commission，No.7877；Chongqing Municipal Education Commission Natural Science and Technology Research Project，No.040807； Chongqing Science and Technology Innovation Capacity Building Project，No.2010CA1010］

水體鹽度是影響魚類生長的重要環(huán)境因素之一［1］，鹽度的變化會對養(yǎng)殖對象造成滲透調(diào)節(jié)脅迫，進而影響其生存、生長、發(fā)育、繁殖等。鱸魚（Lateolabrax japonicus）又稱七星鱸、海鱸、賽花，屬鱸形目（Perciformes）鮨、 科（Serranidae）、鱸魚屬（Lateolabrax），為廣溫、廣鹽性、兇猛的肉食性經(jīng)濟魚類。通常生活在近岸淺海，也有直接進入半咸水、淡水的，在鹽度為 5.00～38.00的海水中均能生存生長，經(jīng)馴化后也可在淡水中生長。其具有肉質(zhì)細嫩、生長速度快、適合于各種形式的養(yǎng)殖等優(yōu)點，而成為當今海水魚類養(yǎng)殖的主要品種之一。目前有關鱸魚增養(yǎng)殖方面的研究及報道較多［2-9］，也有一些鱸魚淡水養(yǎng)殖方面的報道［10-11］，有關鱸魚生化組成及其營養(yǎng)代謝方面的研究也比較多［12-20］。但有關鱸魚早期發(fā)育過程中生化組分變化及其營養(yǎng)代謝的研究較少［21-22］，特別是有關鱸魚淡化過程中鹽度對其稚、幼魚階段生化指標影響的研究報道就顯得更少［23-24］。本實驗主要研究淡化過程中鱸魚稚、幼魚氨基酸的組成及含量的變化，揭示不同鹽度下鱸魚稚、幼魚氨基酸的差異，旨在為盡早實施鱸魚的淡化養(yǎng)殖提供營養(yǎng)生理學方面的基礎資料，并為其配合飼料的研制提供參考依據(jù)。

1　材料與方法

1.1材料的獲取

實驗材料為廈門集美大學在 20.00鹽度海水中進行人工孵化的鱸魚仔魚，發(fā)育到稚魚階段后養(yǎng)殖于15.00鹽度的海水中，稚魚平均體質(zhì)量為 0.0949 g± 0.0094 g，平均體長為1.93 cm±0.10 cm?？者\回重慶后，將鱸魚稚魚飼養(yǎng)于用海鹽配制的鹽度為15.00的人工海水中，期間投喂冰凍的搖蚊（Chironomid midg）幼蟲，且每天吸污 2次，保持水質(zhì)清潔，溶氧保持在4.5 mg/L以上，水溫為 10.8～16.8℃，馴化后的稚魚按15.00、7.50、0.00共3個鹽度梯度進行淡化實驗，水體大小為15 L，開始實驗時的放養(yǎng)密度為20尾/L，各鹽度水體中鱸魚稚魚的存活率在75%～95%。

1.2取樣和樣品處理

15.00、7.50及0.00共3個鹽度梯度的每個鹽度都設了 3個平行組。在稚魚發(fā)育階段每 3天取一次樣，發(fā)育到幼魚階段后每間隔6 d左右取1次樣，取樣時間為實驗后3、6、9、17、23 d，每次取樣時隨機抽取10尾稚、幼魚，共設 3個平行組，用濾紙吸干稚、幼魚體表水分，然后用電子天平稱質(zhì)量（精確至0.1 mg），樣品保存于-70℃低溫冰箱中，待測。

1.3分析方法

將整個待測樣品放入玻璃水解管內(nèi)，加入 6 mol/L的鹽酸10 mL，將水解管抽真空10 min，然后充入高純氮氣； 再抽真空充氮氣，重復3次后，在充氮氣狀態(tài)下封口，將已封口的水解管放在110℃的恒溫干燥箱內(nèi)水解22 h，冷卻后打開水解管，將水解液過濾后，用去離子水定容至50 mL。吸取1 mL濾液于5 mL容量瓶中，用真空干燥器在 40～50℃干燥，殘留物用1～2mL去離子水溶解，再干燥，反復進行兩次，最后蒸干，用1 mL pH2.2的檸檬酸鈉緩沖液溶解，用美國法瑪西亞公司的Bichrom 20氨基酸全自動分析儀測定樣品的氨基酸。

1.4數(shù)據(jù)處理

實驗結果以“平均值±標準誤”（Mean±SD）表示，用 SPSS17軟件對數(shù)據(jù)進行方差分析，并進行Duncan多重比較，顯著性水平設置為α=0.05。

2　結果

不同鹽度下鱸魚稚、幼魚氨基酸的組成和含量見表1。在所有檢測的氨基酸中，除色氨酸Trp在樣品的水解過程中被破壞外，共檢測到 16種氨基酸，其中有必需氨基酸（EAA）9種，非必需氨基酸（NEAA）7種。結果表明，實驗3 d時，15.00、7.50及0.00鹽度組 3個鹽度組稚、幼魚的總氨基酸含量分別為10.45、8.58和9.43，其中以15.00鹽度組稚、幼魚為最高，7.50組最低； 之后，3個鹽度組稚、幼魚的總氨基酸含量均逐漸增加，至實驗結束時，7.50鹽度的鱸魚稚、幼魚的總氨基酸含量最高，為12.04，其次為0.00鹽度組，15.00鹽度組最低。但實驗過程中，3個鹽度組之間的總氨基酸含量沒有顯著性差異。

結果顯示，15.00鹽度組稚、幼魚的必需氨基酸總量略呈下降趨勢，而7.50鹽度組和0.00鹽度組均呈上升趨勢（表1）。實驗3 d時，3個鹽度之間除異亮氨酸、苯丙氨酸外，其他7種必需氨基酸含量均無顯著性差異，必需氨基酸總量也沒有顯著性差異，15.00、7.50及 0.00鹽度組必需氨基酸總量分別為5.25、4.20和4.52，以15.00鹽度組最高，7.50鹽度組最低； 至實驗16 d時，3個鹽度之間除異亮氨酸、亮氨酸和賴氨酸外，其他 6種必需氨基酸含量無差異，但必需氨基酸總量出現(xiàn)顯著性差異（P>0.05），其中以0.00鹽度組必需氨基酸含量最高，為 5.68，其次是7.50鹽度，15.00鹽度組最低； 至實驗結束時，除異亮氨酸和賴氨酸外，3個鹽度之間的其他7種必需氨基酸仍無差異，在必需氨基酸總量上以 7.50鹽度組最高，為6.11，其次為0.00鹽度組，15.00鹽度組最低，3個鹽度之間存在顯著性差異（P>0.05）。

實驗中，除脯氨酸外，3個鹽度組之間的其他非必需氨基酸含量及總的非必需氨基酸含量差異不顯著。15.00鹽度組和0.00鹽度組的脯氨酸含量均呈上升趨勢，而 7.50鹽度組的脯氨酸含量呈下降趨勢。實驗3 d時，15.00、7.50及0.00鹽度組的脯氨酸含量分別為0.27、0.38和0.35，其中0.00鹽度組脯氨酸含量最高，15.00鹽度組的脯氨酸含量最低且與7.50鹽度組之間有顯著性差異（P<0.05）； 在實驗 16 d時，0.00鹽度組的脯氨酸含量明顯高出其他兩個鹽度組；至實驗結束時，0.00鹽度組的脯氨酸含量仍為最高，其次為15.00鹽度組，7.50鹽度組最低，但3個鹽度組之間無顯著性差異。

3　討論與結論

3.1鹽度對鱸魚稚、幼魚氨基酸總量的影響

有一些學者已對養(yǎng)殖和野生的鱸魚成體和不同齡期鱸魚的氨基酸進行了研究［12-15］，因此關于鱸魚成魚氨基酸組成及含量的研究資料已比較豐富。一般認為，魚類不同發(fā)育階段對氨基酸的需求隨其年齡的增加而下降，稚魚的需要量通常要高于幼魚，這已在鯽（Carassius auratus）中得到了證實［25］，本實驗也驗證了這一說法。與成魚對比，3個鹽度組中鱸魚稚、幼魚的氨基酸含量均較低。此外，有研究認為當魚類對各種氨基酸需要量的比例與魚類飼料中所含有的可消化吸收的各種氨基酸比例相近即達到氨基酸平衡時，就能滿足魚類對氨基酸的需要［26-27］。Kanazawa［28］用幾種不同的蛋白源來飼養(yǎng)牙鲆（Paralichthys olivaceus）稚魚，取得了良好的生長效果，因為這些蛋白源所提供的氨基酸和魚體組織的氨基酸組成相近，類似的結果也見于香魚（Plecoglossus altivelis）［29］。本實驗揭示了鱸魚稚、幼魚發(fā)育階段氨基酸的動態(tài)變化規(guī)律，為鱸魚稚、幼魚人工餌料的配置提供了參考數(shù)據(jù)。

魚體總氨基酸包括蛋白質(zhì)和其他大分子聚合的氨基酸（PAA）、游離氨基酸庫中的游離氨基酸（ FAA），結果顯示 3個鹽度組總氨基酸并沒有差異，且均呈增加趨勢，說明稚、幼魚階段，無論是在海水或者是在淡水中養(yǎng)殖的鱸魚，其魚體組織均在快速增長（蛋白的沉積），而稚、幼魚的生長主要是通過合成蛋白質(zhì)增加魚體的重量，稚、幼魚的生長速度很快，因此，應根據(jù)鱸魚稚、幼魚發(fā)育階段的氨基酸特點而相應增加餌料中的氨基酸含量，以使其有足夠的外源營養(yǎng)來能滿足代謝的需要，進而提高其存活率和生長率。盡管 3個鹽度組中稚、幼魚總氨基酸的含量沒有顯著差異，但從表1可以看出，7.50鹽度組的總氨基酸量稍高于15.00鹽度組和0.00鹽度組。

表1　不同鹽度下鱸魚稚、幼魚氨基酸的組成及含量（%，濕質(zhì)量）Tab.1　Composition and content of amino acids of juvenile and larval Lateolabrax japonicus at different salinities（%，wet weight）

3.2鹽度對鱸魚稚、幼魚必需氨基酸含量的影響

魚類對蛋白質(zhì)的需要，實際上是對必需氨基酸和非必需氨基酸混合比例的數(shù)量需要。因此，魚體必需氨基酸的組成常被認為是魚類對必需氨基酸需求的依據(jù)?，F(xiàn)已證明，蛋白質(zhì)水解可生成20余種氨基酸，其中10種為魚類必需氨基酸： 蘇氨酸Thr、蛋氨酸Met、纈氨酸Val、色氨酸Trp、異亮氨酸Ile、亮氨酸 Leu、苯丙氨酸 Phe、組氨酸 His、賴氨酸 Lys和精氨酸Arg。本研究中，3個鹽度組的鱸魚稚、幼魚均測得9種必需氨基酸，本實驗中的鱸魚處于稚、幼魚發(fā)育階段，與成魚體內(nèi)必需氨基酸的含量相比，其含量較低。在必需氨基酸總量上，15.00鹽度組稚、幼魚的必需氨基酸總量略呈下降趨勢，而 7.50鹽度組和 0.00鹽度組均呈上升趨勢，且實驗結束時以7.50鹽度組最高，為6.11，其次為0.00鹽度組，15.00鹽度組最低且與7.50鹽度組有顯著差異（P>0.05）。

已有研究證明7.50鹽度為接近于鱸魚稚、幼魚的生理最適鹽度［23，30］，且在該鹽度中生長的稚、幼魚其體重也大于 15.00鹽度組和 0.00鹽度組。一般認為，淡水脊椎動物排泄大量氨，海產(chǎn)脊椎動物多數(shù)排泄尿素，且大多是由氨基酸代謝產(chǎn)生的，這些尿素被保留在體內(nèi)以維持高的滲透壓［31］。對虹鱒（Oncorhynchus mykiss）而言，鹽度不論比血液滲透壓高或低，都會增加氨的毒性［32］?？梢姡}度能夠影響氨基酸在體內(nèi)的代謝，7.50鹽度組稚、幼魚所面臨的鹽度脅迫壓力小于15.00組和0.00鹽度組，因此將從外源營養(yǎng)獲得的氨基酸更多的用于構件自身組織，促進生長、增加自身體質(zhì)量； 而0.00鹽度組和15.00鹽度組稚、幼魚分別面臨低滲脅迫和高滲脅迫，因而將大量的從外源營養(yǎng)獲得的蛋白質(zhì)和氨基酸作為代謝能源或者將其用于調(diào)節(jié)體內(nèi)外滲透壓平衡。

3.3鹽度對鱸魚稚、幼魚非必需氨基酸含量的影響

在實驗中測得 3個鹽度組鱸魚稚、幼魚的非必需氨基酸總量沒有顯著差異。但非必需氨基酸中的脯氨酸在不同鹽度組中有差異。15.00鹽度組和0.00鹽度組稚、幼魚的脯氨酸含量均呈上升趨勢，而7.50鹽度組的脯氨酸含量呈下降趨勢。Dalla Via［33］在鹽度10～50內(nèi)得到凡納濱對蝦（ Litopenaeus vannamei）和日本對蝦（ Penaeus japonicus）體內(nèi)自由氨基酸隨鹽度呈線性的變化，主要的自由氨基酸為甘氨酸、?；撬?、精氨酸、脯氨酸和丙氨酸，但主要的滲透壓效應物為甘氨酸、脯氨酸和丙氨酸。可見，脯氨酸在滲透壓調(diào)節(jié)中發(fā)揮著一定作用，當稚魚在淡化適應過程中脯氨酸也起到了一定的調(diào)節(jié)作用。由于廣鹽性海洋硬骨魚類體內(nèi)的滲透壓要低于海水滲透壓，但高于淡水滲透壓，因此可能會含有更多的滲透壓調(diào)節(jié)物質(zhì)。在實驗16 d時，0.00鹽度組和15.00鹽度組的脯氨酸含量呈上升趨勢可能就是這個原因。因為15.00鹽度接近鱸魚稚、幼魚的生態(tài)鹽度適應點，相比0.00鹽度所受到的脅迫要小，而7.50鹽度又接近稚、幼魚的生理適應鹽度，所以，0.00鹽度組的脯氨酸會高于其他兩組。至23 d時，各鹽度組鱸魚的脯氨酸含量已無差異，說明鱸魚稚、幼魚能夠生活在較低鹽度甚至是淡水中，但在養(yǎng)殖時還是應該注意將稚魚投放到低鹽度時短期內(nèi)的脅迫作用。

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（本文編輯： 譚雪靜）

Effect of salinity on composition and content of amino acid profiles of juvenile and larval Lateolabrax japonicus

YANG Shan1，WANG Yan2，LIU Tao1，HU Xian-cheng1，CHEN Wei1
（1.Chongqing Key Laboratory of Animal Biology，College of Life Sciences，Chongqing Normal University，Chongqing 401331，China； 2.City College，Hebei University of Technology，Tianjin 300130，China）

Received: Sept.13，2014

Key words:Lateolabrax japonicus； juvenile fish； larval fish； salinity； amino acid

Abstract:To determine the variation laws for the composition and content of amino acids in juvenile and larval sea bass（Lateolabrax japonicus）during desalination processes，in this study，we used an amino acid automatic analyzer to measure and analyze the composition and content of amino acids at three ambient salinities，including 15.00，7.50，and 0.00.The results show that the total contents of the amino acids at different salinities increase gradually and the differences were not significant in this experiment.The total essential amino acids（EAA）decreased at a salinity of 15.00，but the total EAA increased at salinities of 7.50 and 0.00.The differences in the total EAAs were significant for the three different salinities.In addition，the differences in the total non-essential amino acids，and in every non-essential amino acid except proline，were not significant at different salinities.

中圖分類號：Q945

文獻標識碼：A

文章編號：1000-3096（2016）03-0017-06

doi：10.11759//hykx20140913001

收稿日期：2014-09-13； 修回日期： 2015-05-05

基金項目：重慶市科委自然科學基金（7877）； 重慶市教委科學技術研究項目（040807）； 重慶市科技創(chuàng)新能力建設項目（ 2010CA1010）

作者簡介：楊山（1993-），女，重慶渝北人，碩士研究生，主要從事魚類發(fā)育生物學研究，E-mai： yangshancq@qq.com； 胡先成，通信作者，電話： 15902360018，E-mail： hww@cqnu.edu.cn