冠心病氣虛血瘀證大鼠模型的建立

黃爍 任建勛 王少辰 楊斌 董小霞 許晴 王瓊 劉建勛

[摘要]應(yīng)用疲勞跑步運(yùn)動(dòng)復(fù)合左冠狀動(dòng)脈前降支高位結(jié)扎的方法建立冠心病氣虛血瘀證病證結(jié)合大鼠模型。該實(shí)驗(yàn)選用Wistar雄性大鼠，隨機(jī)分為假手術(shù)組（JSS）、單純結(jié)扎冠脈組（DZ）、疲勞跑步運(yùn)動(dòng)復(fù)合結(jié)扎冠脈組（PZ）。DZ組進(jìn)行單純冠脈結(jié)扎；PZ組利用小動(dòng)物跑臺(tái)進(jìn)行為期2周的跑步運(yùn)動(dòng)造成疲勞模型，在此基礎(chǔ)上進(jìn)行冠脈結(jié)扎，術(shù)后以1次/2 d的頻率維持28 d的力竭跑步；于術(shù)后28～31 d觀察大鼠宏觀體征，分別采集大鼠超聲心動(dòng)檢測(cè)指標(biāo)、呼吸幅度對(duì)大鼠冠心病氣虛血瘀證的主癥進(jìn)行評(píng)價(jià)；采集空?qǐng)鰧?shí)驗(yàn)相關(guān)指標(biāo)、力竭運(yùn)動(dòng)時(shí)間、足底圖像色彩飽和度對(duì)兼癥進(jìn)行評(píng)價(jià)；采集舌面色彩飽和度對(duì)舌象進(jìn)行評(píng)價(jià)；采集脈搏搏動(dòng)幅度對(duì)脈象進(jìn)行評(píng)價(jià)。同時(shí)對(duì)血液流變學(xué)、凝血功能等指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果顯示，術(shù)后第28天開始，PZ組大鼠主癥、兼癥、舌象、脈象均符合冠心病氣虛血瘀證證候表現(xiàn)，結(jié)合相關(guān)病理性檢測(cè)結(jié)果證明以疲勞跑步運(yùn)動(dòng)復(fù)合左冠狀動(dòng)脈前降支高位結(jié)扎的方法在大鼠體內(nèi)可以成功建立冠心病氣虛血瘀證病證結(jié)合模型。

[關(guān)鍵詞]冠心病；病證結(jié)合；氣虛血瘀證；大鼠；動(dòng)物模型

[Abstract]To establish Qideficiency and bloodstasis syndrome type coronary heart disease models by fatigue running exercise and high ligation of left anterior descending coronary artery （LAD）， male Wistar rats were selected and randomly divided into sham operation group （JSS）， coronary ligation group （DZ）， fatigue running exercise+coronary ligation group （PZ） Coronary ligation alone was done in DZ group； while the rats in PZ group had running exercise in on the animal treadmill system for 2 weeks to establish fatigue models， and then coronary ligation was done based on the models The exhausted running was maintained for 28 days at the frequency of 1 time/2 days after operation Twentyeight to thirtyone days after the operation， all the rats were observed for macroscopic physical signs， and ultrasonic echocardiography indexes and breathing extent of the rats were collected to evaluate the main symptoms of rats with Qideficiency and bloodstasis syndrome type coronary heart disease； related indexes of open field test， exhaustive running time， and colorimetric analysis data on images of plantar were collected to evaluate the accompanied symptoms； colorimetric analysis data on lingual surface was collected to evaluate the tongue characteristics； pulse distension data was collected to evaluate the pulse condition， and meanwhile， blood rheology and coagulation function were also detected From the 28th day postoperatively， the main symptoms， accompanied symptoms， tongue characteristics and pulse conditions of rats in PZ group conformed to the symptoms of coronary heart disease and Qideficiency and bloodstasis syndrome Combined with related pathological results， the study revealed that Qideficiency and bloodstasis syndrome type coronary heart disease models could be successfully established by fatigue running exercise and high ligation of left anterior descending coronary artery for the rats

[Key words]coronary heart disease； diseasesyndrome combination； Qideficiency and bloodstasis； rat； animal model

doi：10.4268/cjcmm20160921

血管疾病是目前導(dǎo)致人類死亡與殘疾的三大主要疾病之首，嚴(yán)重危害人類健康。世界衛(wèi)生組織（WHO）最近的報(bào)告中指出，2000—2020年心肌梗死的死亡率將由第5位上升到第1位，因心血管病引發(fā)的死亡占全球死亡人數(shù)的30%，該病嚴(yán)重影響著廣大患者的健康。Pillai H S等[1]調(diào)查顯示，冠心病、高血壓和慢性腎衰是南亞心力衰竭的主要三大病因，據(jù)統(tǒng)計(jì)大約65%的心力衰竭由冠狀動(dòng)脈疾病引發(fā)。葛永彬等[2]對(duì)7 512例冠心病中醫(yī)證型分布規(guī)律的分析中得出冠心病中醫(yī)證型中本虛標(biāo)實(shí)屬常見證型，其中氣虛血瘀比例最高。建立規(guī)范化的疾病動(dòng)物模型是研究疾病發(fā)生、發(fā)展進(jìn)程，研究病因和尋求有效治療方案的有效途徑。病證結(jié)合動(dòng)物模型融合了現(xiàn)代醫(yī)學(xué)病理學(xué)動(dòng)物模型和中醫(yī)證候動(dòng)物模型兩者共同的特點(diǎn)和因素， 使模型動(dòng)物同時(shí)具有西醫(yī)疾病和中醫(yī)證候的特征，是闡明中醫(yī)基礎(chǔ)理論、辨證論治關(guān)系、全面客觀反映中藥藥效作用較為理想的載體[3]。

本文依據(jù)中醫(yī)對(duì)冠心病氣虛血瘀證的病機(jī)認(rèn)識(shí)，在既往實(shí)驗(yàn)研究的基礎(chǔ)之上，嘗試選擇疲勞運(yùn)動(dòng)結(jié)合高位結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支雙因素復(fù)合刺激的方法建立大鼠冠心病氣虛血瘀證病證結(jié)合動(dòng)物模型，使其更加符合中醫(yī)氣虛血瘀證候的病機(jī)特點(diǎn)。

1材料

健康雄性Wistar大鼠40只，SPF級(jí)，體重（200±10）g，購置于北京維通利華動(dòng)物中心有限公司，許可編號(hào)SCXK（京）20130012。

動(dòng)物專用心電圖機(jī)（日本Softron）；高分辨率小動(dòng)物超聲影像系統(tǒng)Vevo 2100（加拿大VisualSonics公司），探頭型號(hào)MS250；MouseOx小動(dòng)物無創(chuàng)脈搏血氧儀（美國Starr Life Sciences Inc公司）；Nikon D90單反相機(jī)；臺(tái)灣TES1330A數(shù)位式照度計(jì)；空?qǐng)鲇?jì)算機(jī)圖像實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)分析系統(tǒng)（中國航天員訓(xùn)練中心和中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所聯(lián)合研制開發(fā)）；ZHPT動(dòng)物實(shí)驗(yàn)跑臺(tái)（安徽正華生物儀器設(shè)備有限公司）；LBYN6C血液流變測(cè)定儀（北京普利生）；COALAB1000血凝儀（德國藍(lán)波）；美國MatrxVIP3000小動(dòng)物麻醉機(jī)凝血酶時(shí)間（TT），活化部分凝血活酶時(shí)間（APTT），凝血酶原時(shí)間（PT），纖維蛋白原（FIB）測(cè)定試劑盒（上海太陽生物技術(shù)有限公司）；異氟烷（100 mL/瓶，魯南貝特制藥有限公司，批號(hào)H20020267）；注射用青霉素鈉（400萬 U/支，華北制藥股份有限公司，批號(hào)H13020656）；鹽酸利多卡因注射液（5 mL，01 g/支，中國大冢制藥有限公司，批號(hào)H20065378）。

2方法

21分組

實(shí)驗(yàn)大鼠飼養(yǎng)于中國中醫(yī)科學(xué)院西苑醫(yī)院SPF級(jí)動(dòng)物房，飼養(yǎng)條件：溫度（25±2） ℃，濕度（40±5）%，大鼠隨意飲食飲水。大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)2 d后，進(jìn)行3 d的適應(yīng)性跑臺(tái)訓(xùn)練，每天1次，每次15～30 min。當(dāng)大鼠能夠以20 m·min-1的速度持續(xù)跑30 min，開始進(jìn)行模型的建立。淘汰不能完成上述運(yùn)動(dòng)的大鼠[4]。將大鼠隨機(jī)分為3組：假手術(shù)組（JSS組，10只）、單純高位結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支組（DZ組，15只）、疲勞運(yùn)動(dòng)復(fù)合高位結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支組（PZ組，15只）。

22冠心病氣虛血瘀證造模方法

假手術(shù)組（JSS）方法：手術(shù)方法同DZ組，但穿線不結(jié)扎。

單純高位結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支組（DZ）方法：具體方法在參照文獻(xiàn)[5]的基礎(chǔ)上進(jìn)行改進(jìn)，大鼠用小動(dòng)物麻醉機(jī)維持麻醉狀態(tài)（氧氣壓強(qiáng)01 MPa，氧氣流量300 mL·min-1，麻醉藥物濃度2%）。用止血鉗撐開大鼠左側(cè)第3，4肋間隙，輕微按壓胸廓擠出心臟，用0號(hào)手術(shù)線結(jié)扎左冠脈前降支根部，結(jié)扎后心臟表面立刻給予利多卡因注射液2～3滴，立即將心臟放回胸腔，排出進(jìn)入胸腔空氣，縫合皮膚。關(guān)胸后立刻注射青霉素01～02 mL。

疲勞跑步運(yùn)動(dòng)復(fù)合高位結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支組（PZ）方法：大鼠在跑臺(tái)水平狀態(tài)中進(jìn)行每天1次為期2周中等強(qiáng)度的跑步運(yùn)動(dòng)[67]，造模實(shí)驗(yàn)方案見表1。在造成疲勞模型后對(duì)大鼠進(jìn)行左冠狀動(dòng)脈前降支高位結(jié)扎。術(shù)后恢復(fù)4 d，開始讓大鼠進(jìn)行力竭運(yùn)動(dòng)（速度20 m·min-1，頻率：1次/2 d）。

黃爍等：冠心病氣虛血瘀證大鼠模型的建立表1大鼠疲勞運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練方案

Table 1Training program for exerciseinduced fatigue in the rat modelsm·min-1×min

周次第1天第2天第3天第4天第5天第6天第7天第1周15×1515×1518×2018×2018×2518×2520×25第2周25×2525×2525×3025×3030×3030×3030×30

23指標(biāo)采集方法

231心電圖采集術(shù)后第3天上午8：00，大鼠用2%異氟烷維持麻醉狀態(tài)，背位固定，用日本Softron動(dòng)物專用心電圖機(jī)采集心電圖。檢測(cè)異常Q波是否出現(xiàn)，對(duì)大鼠成模情況進(jìn)行評(píng)價(jià)。

232大鼠舌面、足底（統(tǒng)一右側(cè)后肢足底）圖像采集參照文獻(xiàn)方法[8]，術(shù)后第28天上午8：00—10：00，在動(dòng)物房利用色溫5500K柔光箱進(jìn)行布光，根據(jù)國際照明委員會(huì)CIE推薦的標(biāo)準(zhǔn)照明和觀測(cè)條件，采用45/0（照明/觀察）的照明幾何條件安排光路。光源照度測(cè)量采用臺(tái)灣泰仕TES1330A 照度計(jì)，舌面處照度范圍控制在1 500～2 000 lx。圖片采集應(yīng)用尼康D90數(shù)碼單鏡反光相機(jī)，聯(lián)合尼康A(chǔ)FS 微距尼克爾60 mm f/28G ED鏡頭，相機(jī)用三腳架固定，鏡頭與舌面、足底距離15 cm。應(yīng)用灰卡手動(dòng)設(shè)定白平衡，圖像采集時(shí)選用相機(jī)手動(dòng)（M）檔，自動(dòng)對(duì)焦，以光圈F8，快門1/80 s，ISO 400 的條件采集舌面圖像。拍照時(shí)保證比色卡與舌面、足底在同一平面，舌面足底照片以JPG格式輸出。圖像采集后利用Adobe Photoshop CS5軟件選取舌面、足底區(qū)域3點(diǎn)，讀取像素區(qū)域R（紅色）、G（綠色）及B（藍(lán)色）分量值。

233超聲心動(dòng)檢測(cè)方法術(shù)后第29天，利用異氟烷維持大鼠麻醉狀態(tài)后[維持大鼠心率在（350±20） bpm]，對(duì)大鼠胸部左側(cè)鎖骨至肋骨下緣進(jìn)行備皮處理。在左室長軸及胸骨旁短軸各切面進(jìn)行二維掃查，選用左室短軸切面M超測(cè)量計(jì)算左室收縮末內(nèi)徑（LVIDs），左室舒張末內(nèi)徑（LVIDd），左室收縮末容積（LVs Vol），左室舒張末容積（LVd Vol），射血分?jǐn)?shù)（EF），短軸縮短率（FS），各項(xiàng)指標(biāo)均連續(xù)測(cè)量3個(gè)周期，取平均值。

234大鼠呼吸幅度、脈搏幅度檢測(cè)術(shù)后第29天，利用2%異氟烷維持大鼠麻醉狀態(tài)后，利用Mouse Ox小動(dòng)物無創(chuàng)脈搏血氧儀對(duì)大鼠呼吸幅度、脈搏幅度進(jìn)行檢測(cè)。記錄每只動(dòng)物連續(xù)10個(gè)有效數(shù)據(jù)，取平均值。

235大鼠空?qǐng)鰧?shí)驗(yàn)相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)術(shù)后第30天進(jìn)行，空?qǐng)鰧?shí)驗(yàn)室保持安靜，室內(nèi)暗光，實(shí)驗(yàn)人員位置以操作角度無法觀測(cè)到箱中實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為準(zhǔn)。空?qǐng)鰷y(cè)試箱直徑80 cm，高50 cm，內(nèi)壁與底部涂黑。實(shí)驗(yàn)前，將動(dòng)物在測(cè)定房間中適應(yīng)10 min。實(shí)驗(yàn)開始時(shí)捏住大鼠尾巴距根部1/2處放入測(cè)試箱底部中心，顯示器中觀察動(dòng)物10 min內(nèi)活動(dòng)情況，每次測(cè)定結(jié)束后將動(dòng)物排泄物清理干凈，并用75%乙醇擦拭箱底驅(qū)散氣味。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后利用軟件進(jìn)行錄像分析。描繪動(dòng)物運(yùn)動(dòng)軌跡，測(cè)量動(dòng)物運(yùn)動(dòng)距離、平均速度、運(yùn)動(dòng)時(shí)間。

236大鼠力竭運(yùn)動(dòng)時(shí)間測(cè)定術(shù)后第30天將大鼠放進(jìn)小動(dòng)物實(shí)驗(yàn)跑臺(tái)（跑臺(tái)速度25 m·min-1，電擊強(qiáng)度15 mA）進(jìn)行力竭跑步測(cè)試。以大鼠3 s內(nèi)被連續(xù)電擊5次仍無法跑步為標(biāo)準(zhǔn)判斷是否力竭。記錄時(shí)間。

237大鼠血液流變學(xué)、凝血功能檢測(cè)各組大鼠在術(shù)后第31天，禁食24 h后腹腔注射35%水合氯醛（10 mL·kg-1）麻醉，腹主動(dòng)脈取血3 mL，加入肝素化抗凝試管中，立刻進(jìn)行血液流變學(xué)測(cè)定。腹主動(dòng)脈取血3 mL，38%檸檬酸鈉抗凝，常溫1 800×g離心10 min，進(jìn)行凝血酶時(shí)間（TT）、活化部分凝血活酶時(shí)間（APTT）、凝血酶原時(shí)間（PT）、纖維蛋白原（FIB）含量檢測(cè)，操作步驟按照說明書進(jìn)行。

238大鼠心肌MASSON染色心臟切片脫蠟至水，經(jīng)過天青石藍(lán)、Mayer氏蘇木素、麗春紅苦味酸、1%淡綠等染色后，再脫水，樹膠封固。顯微鏡下觀察，膠原纖維染為藍(lán)色，胞核染為藍(lán)黑色，肌纖維染為紅色。

239大鼠心肌HE染色大鼠心肌組織放于4%多聚甲醛固定24 h，石蠟包埋，切片（5 μm），蘇木精伊紅染色，光學(xué)顯微鏡下觀察心肌結(jié)構(gòu)。

24統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

統(tǒng)計(jì)軟件采用SPSS 200進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。實(shí)驗(yàn)獲得的各數(shù)據(jù)以±s表示。若數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布方差齊用LSD檢驗(yàn)反之用Tamhane′s T2檢驗(yàn)。P<005表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3結(jié)果

31大鼠術(shù)后3 d心電圖檢測(cè)及術(shù)后28 d一般狀態(tài)

術(shù)后第3天單純高位結(jié)扎組、疲勞運(yùn)動(dòng)復(fù)合高位結(jié)扎組大鼠心電圖中出現(xiàn)異常Q波，假手術(shù)組大鼠心電圖正常；術(shù)后28 d單純高位結(jié)扎組、疲勞運(yùn)動(dòng)復(fù)合高位結(jié)扎組大鼠精神萎靡，被毛枯黃失去光澤，活動(dòng)度降低，喜歡聚攏在一起，嗜睡，對(duì)外界刺激反應(yīng)遲鈍，稀便；假手術(shù)組大鼠狀態(tài)正常。疲勞運(yùn)動(dòng)復(fù)合高位結(jié)扎組大鼠與假手術(shù)組大鼠比較，體重下降，存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<005）；疲勞運(yùn)動(dòng)復(fù)合高位結(jié)扎組大鼠與單純高位結(jié)扎組大鼠比較，體重有所下降，但不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；單純高位結(jié)扎組大鼠與假手術(shù)組大鼠比較，體重有所下降，但不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，見表2。

32大鼠足底、舌面圖片分析

術(shù)后28 d觀察單純高位結(jié)扎組、疲勞運(yùn)動(dòng)復(fù)合高位結(jié)扎組大鼠鼻尖、口唇、掌心、舌面與假手術(shù)組大鼠比較，均發(fā)生不同程度的變紫變暗，見表3。本研究著重記錄大鼠右側(cè)后肢足底及舌面的R，G，B值，單純高位結(jié)扎組、疲勞運(yùn)動(dòng)復(fù)合高位結(jié)扎組大鼠與假手術(shù)組大鼠比較，足底R(shí)，G，B值均顯著降低（P<001）；疲勞運(yùn)動(dòng)復(fù)合高位結(jié)扎組大鼠與單純高位結(jié)扎組大鼠比較，足底R(shí)，G值有所降低，但不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。單純高位結(jié)扎組、疲勞運(yùn)動(dòng)復(fù)合高位結(jié)扎組大鼠與假手術(shù)組大鼠比較，舌面R，G，B值均顯著降低（P<001）；疲勞運(yùn)動(dòng)復(fù)合高位結(jié)扎組大鼠與單純高位結(jié)扎組大鼠比較，足底G，B值有所降低，但不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

33大鼠超聲心動(dòng)圖檢測(cè)

術(shù)后第29天，單純高位結(jié)扎組、疲勞運(yùn)動(dòng)復(fù)合高位結(jié)扎組大鼠與假手術(shù)組大鼠比較，EF，F(xiàn)S顯著下降（P<001），LVIDd，LVIDs，LVd，LVs顯著上升（P<001）；疲勞運(yùn)動(dòng)復(fù)合高位結(jié)扎組大鼠與單純高位結(jié)扎組大鼠比較，EF，F(xiàn)S顯著下降（P<001），LVIDs和LVs顯著上升（P<005），LV d上升但不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，見表4。

34大鼠呼吸幅度、脈搏幅度檢測(cè)

術(shù)后第29天單純高位結(jié)扎組、疲勞運(yùn)動(dòng)復(fù)合高位結(jié)扎組大鼠與假手術(shù)組大鼠比較，呼吸幅度、脈搏幅度顯著下降（P<001）；疲勞運(yùn)動(dòng)復(fù)合高位結(jié)扎組大鼠與單純高位結(jié)扎組大鼠比較，呼吸幅度、脈搏幅度顯著下降（P<001），見表5。

35大鼠空?qǐng)鰧?shí)驗(yàn)相關(guān)指標(biāo)、力竭運(yùn)動(dòng)時(shí)間檢測(cè)結(jié)果

術(shù)后第30天，單純高位結(jié)扎組大鼠與假手術(shù)組大鼠比較，運(yùn)動(dòng)距離、爬壁次數(shù)、力竭運(yùn)動(dòng)時(shí)間顯著下降（P<005，P<001），平均速度、運(yùn)動(dòng)時(shí)間下降但不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；疲勞運(yùn)動(dòng)復(fù)合高位結(jié)扎組大鼠與假手術(shù)組大鼠比較，運(yùn)動(dòng)距離、平均速度、運(yùn)動(dòng)時(shí)間、爬壁次數(shù)、力竭運(yùn)動(dòng)時(shí)間顯著下降（P<005，P<001）；疲勞運(yùn)動(dòng)復(fù)合高位結(jié)扎組大鼠與單純高位結(jié)扎組大鼠比較，運(yùn)動(dòng)距離、平均速度、運(yùn)動(dòng)時(shí)間、爬壁次數(shù)、力竭運(yùn)動(dòng)時(shí)間下降，但不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，見表6。

36大鼠血液流變學(xué)檢測(cè)

術(shù)后第31天，單純高位結(jié)扎組、疲勞運(yùn)動(dòng)復(fù)合高位結(jié)扎組大鼠與假手術(shù)組大鼠比較，在低切變率、高切變率下的全血黏度顯著升高（P<001），中切變率下的全血黏度升高，但不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；疲勞運(yùn)動(dòng)復(fù)合高位結(jié)扎組大鼠與單純高位結(jié)扎組大鼠比較，低切變率、中切變率、高切變率下的全血黏度升高，但不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，見表7。

37大鼠凝血功能檢測(cè)

術(shù)后第31天，單純高位結(jié)扎組、疲勞運(yùn)動(dòng)復(fù)合高位結(jié)扎組大鼠與假手術(shù)組大鼠比較，PT，APTT，F(xiàn)IB降低，TT升高，但不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；疲勞運(yùn)動(dòng)復(fù)合高位結(jié)扎組大鼠與單純高位結(jié)扎組大鼠比較PT，F(xiàn)IB降低，APTT，TT升高，但不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，見表8。

38大鼠心肌Masson染色

假手術(shù)組大鼠心肌染色以紅色的心肌細(xì)胞為主，心肌組織分布均勻，結(jié)構(gòu)清晰，細(xì)胞排列整齊，

4討論

本實(shí)驗(yàn)室在建立各類動(dòng)物模型的探索過程當(dāng)中，逐步形成了“病證結(jié)合動(dòng)物模型擬臨床”這一概念。原則上首先在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇上應(yīng)盡量選擇與人類接近或相似的動(dòng)物[8]，在冠心病氣虛血瘀證動(dòng)物模型的建立當(dāng)中，因?yàn)樾难芟到y(tǒng)與人類頗為相似所以小型豬是最為適合的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，但由于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物價(jià)格較為昂貴，并且在實(shí)際應(yīng)用過程中推廣起來有一定難度，所以本研究選用大鼠作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。其次選用無創(chuàng)或微創(chuàng)的手段獲取有價(jià)值的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)[8]。本研究在造模的手術(shù)方法中，選取了創(chuàng)傷最?。ㄆつw切口15 cm），手術(shù)過程時(shí)間最短（約30 s）的方法，盡量減小對(duì)原有胸腔穩(wěn)定環(huán)境的破壞。最后動(dòng)物模型的建立方法應(yīng)最大可能符合疾病實(shí)際的發(fā)展過程[8]，由于大鼠具有抵抗動(dòng)脈粥樣硬化形成的能力，在大鼠身上模擬冠脈粥樣硬化又有一定難度，所以目前大鼠冠心病心衰模型的建立方法主要有注射異丙腎上腺素[9]、腦垂體后葉素[9]、麥角新堿[10]、冠脈結(jié)扎[11]等方法。針對(duì)大鼠氣虛血瘀證候模型的建立方法主要有游泳+饑餓+高脂飲食[12]、老年+阿霉素+外傷[13]、饑餓+心得安+高分子右旋糖酐[14]、甲硝基亞硝基胍+雷尼替丁+饑飽失常的綜合法[15]、饑餓+疲勞+寒涼[16]、力竭游泳+皮下注射腎上腺素[17]、饑餓+高脂飲食+寒濕或+驚恐[18] 。目前冠心病氣虛血瘀病證結(jié)合動(dòng)物模型的建立過程中最為突出表現(xiàn)的問題是建立模型的干預(yù)因素?zé)o法有機(jī)結(jié)合與臨床實(shí)際發(fā)病原因相脫節(jié)。本研究遵循中醫(yī)病因病機(jī)“血瘀多由日久氣虛所致，血瘀進(jìn)一步阻滯氣機(jī)致虛”，先通過呈階梯遞增強(qiáng)度的跑步運(yùn)動(dòng)使大鼠處于疲勞狀態(tài)，模擬人體生理上呈現(xiàn)出的疲勞狀態(tài)，正氣消耗開始出現(xiàn)氣虛證的表現(xiàn)；在此基礎(chǔ)上結(jié)扎大鼠冠狀動(dòng)脈前降支，模擬人體心肌梗死的發(fā)生，日久氣虛導(dǎo)致心脈瘀阻；術(shù)后維持一定強(qiáng)度的跑步運(yùn)動(dòng)，繼續(xù)模擬人類正氣的消耗，由心肌梗死導(dǎo)致心力衰竭過程的發(fā)生，伴隨氣虛血瘀證候的出現(xiàn)。

本研究在模型評(píng)價(jià)體系的建立當(dāng)中，參照臨床冠心病致心力衰竭氣虛血瘀證侯診斷標(biāo)準(zhǔn)：胸痛胸悶，心悸氣短，身倦乏力，面色紫暗，舌淡紫，脈弱而澀。同時(shí)考慮到實(shí)驗(yàn)動(dòng)物本身特點(diǎn)，制定大鼠冠心病氣虛血瘀中醫(yī)證候診斷標(biāo)準(zhǔn)如下。主癥（胸痛胸悶、心悸氣短）：用反映心臟功能的超聲心動(dòng)圖指標(biāo)診斷是否胸痛胸悶；用呼吸幅度診斷是否心悸氣短。兼癥（身倦乏力、面色紫暗）：用反映大鼠運(yùn)動(dòng)能力的空?qǐng)鰧?shí)驗(yàn)指標(biāo)、力竭運(yùn)動(dòng)時(shí)間診斷是否身倦乏力；由于大鼠面部圖像采集以及分析存在一定困難，而大鼠足底圖像方便采集且色澤變化較為明顯所以用足底圖像色彩飽和度來診斷是否面色紫暗。舌象（舌淡紫）：用舌面色彩飽和度變化來診斷是否舌色淡紫。脈象（脈弱而澀）：用反映大鼠脈搏搏動(dòng)強(qiáng)度的指標(biāo)來診斷是否脈弱而澀。同時(shí)結(jié)合相關(guān)病理指標(biāo)，能夠?qū)谛牟馓撗鲎C大鼠模型進(jìn)行一個(gè)較為完整的疾病以及證候診斷。

利用西醫(yī)病因病理造模方法單純高位結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支建立的冠心病氣虛血瘀證大鼠模型雖然在證候上表現(xiàn)出了心氣虛證與血瘀證的相關(guān)特點(diǎn)，比如心功能下降，運(yùn)動(dòng)能力變差，掌心色彩飽和度下降等，但這種模型的建立方法均與特異的病理變化有所關(guān)聯(lián)，只能夠反映臨床病理表現(xiàn)的一個(gè)方面，缺少臨床病因?qū)W基礎(chǔ)，與中醫(yī)相關(guān)理論體系缺乏聯(lián)系，很難完整體現(xiàn)出中醫(yī)證候的特征，出現(xiàn)的病理狀態(tài)并不能夠與特定的中醫(yī)證候?qū)Φ?。相比較之下，本研究利用疲勞跑步運(yùn)動(dòng)結(jié)合高位結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支雙因素復(fù)合刺激的方法建立的冠心病氣虛血瘀證大鼠模型則更具有優(yōu)勢(shì)，模型在冠心病氣虛血瘀中醫(yī)證候的表現(xiàn)上更加顯著。

在動(dòng)物模型的評(píng)價(jià)體系中，雖然有些指標(biāo)的變化并沒有出現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，比如代表凝血功能的PT，APTT，TT，F(xiàn)IB等，但并不代表這些指標(biāo)的變化不存在任何生理學(xué)意義，PT，APTT的縮短說明血液處于高凝狀態(tài)，F(xiàn)IB的減低常見與彌散性血管內(nèi)凝血消耗性低凝溶解期，TT的增高常見于彌散性血管內(nèi)凝血纖溶亢進(jìn)期。臨床診斷中不能輕易忽視這些指標(biāo)的變化[19]，那么在動(dòng)物模型的評(píng)價(jià)當(dāng)中更加應(yīng)該留意一些“不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異”的指標(biāo)變化所包含的生理學(xué)意義。

但是本研究利用疲勞運(yùn)動(dòng)結(jié)合高位結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支雙因素復(fù)合刺激的方法建立的冠心病氣虛血瘀證大鼠模型與人類臨床上冠心病致心力衰竭氣虛血瘀證實(shí)際的發(fā)展演變過程仍然存在一定的差距，研究者在日后研究過程當(dāng)中，應(yīng)當(dāng)借助多學(xué)科交叉合作，建立更加穩(wěn)定更加可靠規(guī)范化的病證結(jié)合動(dòng)物模型，同時(shí)對(duì)模型的評(píng)價(jià)體系進(jìn)行不斷地完善。

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[責(zé)任編輯馬超一]