（1，3）-β-D葡聚糖檢測聯(lián)合CD4+T淋巴細(xì)胞計數(shù)對獲得性免疫缺陷綜合征合并侵襲性真菌病診斷的價值*

杜榴恩

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（1，3）-β-D葡聚糖檢測聯(lián)合CD4+T淋巴細(xì)胞計數(shù)對獲得性免疫缺陷綜合征合并侵襲性真菌病診斷的價值*

杜榴恩①

【摘要】目的：探討分析（1，3）-β-D葡聚糖（BDG）檢測（G試驗）聯(lián)合CD4+T淋巴細(xì)胞計數(shù)對于獲得性免疫缺陷綜合征（AIDS）合并侵襲性真菌病（IFD）的臨床診斷價值。方法：選擇本院收治的疑似合并IFD的AIDS患者59例作為研究對象，同時實施G試驗及CD4+T淋巴細(xì)胞計數(shù)。按照IFD診斷標(biāo)準(zhǔn)，將患者分為IFD組31例及非IFD組28例。分析IFD組和非IFD組的CD4+T淋巴細(xì)胞計數(shù)結(jié)果及不同檢測方法的陽性率檢測結(jié)果。結(jié)果：IFD組CD4+T淋巴細(xì)胞計數(shù)顯著低于非IFD組，兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；IFD組患者的G試驗結(jié)果顯示陽性率為74.19%，聯(lián)合診斷結(jié)果顯示陽性率為90.32%；非IFD組患者G試驗結(jié)果顯示陽性率為17.86%，聯(lián)合診斷結(jié)果顯示陽性率為10.71%，兩組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論：G試驗聯(lián)合CD4+T淋巴細(xì)胞計數(shù)對于確診AIDS合并IFD，具有極高的價值，值得推廣應(yīng)用。

【關(guān)鍵詞】（1，3）-β-D葡聚糖； CD4+T淋巴細(xì)胞計數(shù)； AIDS； IFD

①廣東省肇慶市第一人民醫(yī)院 廣東 肇慶 526060

Medical Innovation of China， 2016，13（16）：035-038

First-author's address：The First People's Hospital of Zhaoqing City，Zhaoqing 526060，China

侵襲性真菌疾病（IFD）是人類免疫缺陷病毒（HIV）感染者/獲得性免疫缺陷綜合征（AIDS）患者的常見合并癥之一，該病也是導(dǎo)致AIDS患者死亡的重要原因，具有較高的致死率［1］。研究認(rèn)為，IFD發(fā)病較為隱匿，不具有典型的臨床表現(xiàn)，目前還無成功率較高的治療方式。因此，其早期以及特異性的診斷，有助于改善預(yù)后。既往常規(guī)應(yīng)用真菌培養(yǎng)以及病理活檢方式實施IFD檢查，但實施真菌培養(yǎng)，其陽性檢出率低，需要較長的時間；實施病理活檢，則具有創(chuàng)傷性，而且難以操作，這兩種方法均不能取得理性的效果。目前，較多的前沿研究均將非培養(yǎng)診斷作為IFD診斷的研究方向，其中（1，3）-β-D葡聚糖（BDG）檢測（G試驗）已得到廣泛應(yīng)用，并已經(jīng)成為IFD的一種診斷標(biāo)準(zhǔn)。本院積極探討分析（1，3）-β-D葡聚糖（BDG）檢測（G試驗）聯(lián)合CD4+T淋巴細(xì)胞計數(shù)對于獲得性免疫缺陷綜合征（AIDS）合并侵襲性真菌?。↖FD）的臨床診斷價值，取得了具有推廣價值的經(jīng)驗，基本情況如下。

1　資料與方法

1.1一般資料 本研究中所涉及的對象均為本院2014年8月-2015年8月期間收治的疑似合并IFD 的AIDS患者，共59例，其中男40例，女19例；患者年齡18～65歲，平均（48.5±5.5）歲。所有研究對象均符合美國疾病預(yù)防與控制中心（CDC）制定的AIDS相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)，具有抗HIV陽性，并經(jīng)本院實驗室篩查確診。參照《血液病/惡性腫瘤患者侵襲性真菌感染的診斷標(biāo)準(zhǔn)與治療原則》，將所有研究對象分為非IFD組（28例）和IFD組（31例）［2］。其中IFD診斷標(biāo)準(zhǔn)為：通過組織病理學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)真菌或者無菌組織培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)真菌；患者有IFD宿主/環(huán)境因素、臨床及影像學(xué)表現(xiàn)，均有臨床診斷意義的微生物學(xué)依據(jù)（排除G試驗）；患者具有IFD宿主/環(huán)境因素、臨床及影像學(xué)表現(xiàn)，沒有微生物學(xué)依據(jù)。

1.2方法 （1）樣本采集：將疑似合并IFD 的AIDS患者采集肝素鈉和乙二胺四乙酸二鉀（EDTA-K2）抗凝血漿樣本各2 mL，分別實施G試驗以及CD4+T淋巴細(xì)胞計數(shù)。同時送檢痰液實施真菌培養(yǎng)及涂片，另外送檢血液、骨髓、尿液、大便、胸腔積液、腹水、腦脊液真菌培養(yǎng)及涂片。（2）G試驗：應(yīng)用含肝素鈉真空玻璃管采集血液2 mL送檢，應(yīng)用MB-80微生物快速動態(tài)檢測系統(tǒng)以及G試驗試劑盒實施檢測。當(dāng)BDG≥20 pg/mL時，則可判定結(jié)果為G試驗陽性。（3）CD4+T淋巴細(xì)胞計數(shù)：抽取EDTA-K2抗凝靜脈血2 mL送檢，應(yīng)用FACSCantoⅡ流式細(xì)胞儀、6色TBNK試劑和FRCS溶血素檢測CD4+T淋巴細(xì)胞絕對數(shù)，單位為cell/μL。（4）真菌培養(yǎng)及鑒定：對提取到的患者血液、骨髓、腦脊液、痰液以及其他深部組織液實施真菌培養(yǎng)，應(yīng)用全自動微生物分析系統(tǒng)以及真菌鑒定片實施真菌鑒定，按照真菌形態(tài)以及菌落特征等對菌種進(jìn)行確定。

1.3觀察指標(biāo) 分析IFD組和非IFD組的CD4+T淋巴細(xì)胞計數(shù)結(jié)果及不同檢測方法的陽性率檢測結(jié)果。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理 使用SPSS 18.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行分析，計量資料采用（±s）表示，比較采用t檢驗，計數(shù)資料采用 字2檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1兩組的一般情況 IFD組中G試驗陽性患者為23例，其中確診IFD者共10例，病原菌方面：含念珠菌2例，曲霉1例，新生隱球菌2例，毛霉1例，馬爾尼菲青霉4例；臨床診斷IFD者共10例，可疑病原菌方面：含念珠菌2例，曲霉2例，馬爾尼菲青霉1例，細(xì)菌真菌混合感染5例，2例死亡；擬診IFD者共3例，含1例胃鏡確診真菌感染，2例存在影像學(xué)改變。非IFD組中G試驗陽性患者為3例，25例存在肺部感染，23例存在口腔真菌感染，該組患者深部真菌其他檢查均表現(xiàn)為陰性，22例得以緩解，5例因病菌感染加重，1例因多器官功能衰竭死亡。

2.210例確診IFD患者G試驗結(jié)果情況 10例IFD確診患者中，有7例G試驗陽性（陽性率70.00%），3例G試驗假陰性（假陰性率30.00%），其BDG范圍為15.53～＞1000.00 pg/mL，見表1。

表1　10例IFD確診患者真菌感染G試驗BDG結(jié)果情況

2.3AIDS患者IFD與CD4+T淋巴細(xì)胞計數(shù)分析 IFD 組CD4+T淋巴細(xì)胞計數(shù)顯著低于非IFD組，兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表2　AIDS患者IFD與CD4+T淋巴細(xì)胞計數(shù)分析　例

2.4G試驗聯(lián)合CD+T淋巴細(xì)胞計數(shù)診斷IFD的結(jié)果比較 IFD組患者的G試驗結(jié)果顯示陽性率為74.19%，聯(lián)合診斷結(jié)果顯示陽性率為90.32%；非IFD組患者G試驗結(jié)果顯示陽性率為17.86%，聯(lián)合診斷結(jié)果顯示陽性率為10.71%，兩組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表3。

表3　G試驗聯(lián)合CD+T淋巴細(xì)胞計數(shù)診斷IFD的結(jié)果比較　例（%）

3　討論

AIDS患者的特征性生理病理變化即重度免疫功能缺陷，HV-1能夠通過膜上的一種糖蛋白gp120 與CD4+細(xì)胞結(jié)合，CD4屬于gp120的受體。人類CD4+細(xì)胞則主要為輔助性T細(xì)胞（Th），在HV-1進(jìn)入到輔助性T細(xì)胞之后，會隨著病毒而不斷的被復(fù)制，借助于細(xì)胞凋亡機(jī)制而出現(xiàn)破壞，引發(fā)體內(nèi)Th/Ts比例倒置，從而出現(xiàn)嚴(yán)重的免疫缺陷，顯著提高機(jī)體的感染及某些腫瘤易感性，最終導(dǎo)致患者死亡。目前AIDS傳染研究，已經(jīng)證實血液、精液以及宮頸分泌物均能夠傳染，傳染途徑則包括：性接觸傳播、經(jīng)血液傳播以及母嬰傳播。針對這些情況，想要對患者實施早期診斷，有效控制傳播發(fā)展，則必須實施有效的臨床檢測。目前患者臨床檢測中主要方式為G試驗，即對患者真菌細(xì)胞壁成分BDG實施有效檢測，聯(lián)合CD4+T淋巴細(xì)胞計數(shù)檢測，更有助于提高患者的臨床檢測陽性率，從而及早發(fā)現(xiàn)AIDS患者，實施有效治療及控制傳染。

G試驗主要用于檢測真菌細(xì)胞壁成分BDG，人體吞噬細(xì)胞在吞噬真菌后，將持續(xù)釋放該物質(zhì)，從而提升血液及體液中的BDG含量，但是針對淺部真菌感染而言，則不會存在類似現(xiàn)象。G試驗主要適用于除新生隱球菌和接合菌之外的所有深部真菌感染早期診斷，尤其是針對念珠菌、鐮刀菌、毛抱子菌等具有明顯診斷效果，但該方式無法辨別和確定菌種。相關(guān)研究認(rèn)為，G試驗對于惡性血液病患者合并IFD而言，其診斷敏感性以及特異性均較高，該方法對于侵襲性真菌而言，是一種高效的非培養(yǎng)檢測方式和手段［3］。

對于AIDS患者而言，其免疫功能具有嚴(yán)重缺陷，該類患者需要實施終身治療［4］。T淋巴細(xì)胞中，起輔助誘導(dǎo)作用的CD4+T淋巴細(xì)胞進(jìn)行性減少，免疫功能下降，而IFD發(fā)生率顯著提升［5-7］。研究認(rèn)為，CD4+T淋巴細(xì)胞計數(shù)是目前條件下用于監(jiān)測AIDS感染的重要參數(shù)，CD4+T淋巴細(xì)胞水平同IFD之間具有緊密關(guān)系，同時也與AIDS合并IFD的發(fā)生情況以及存活時間等具有密切關(guān)系［8-13］。由此可以明顯看出CD4+T淋巴細(xì)胞在AIDS合并IFD檢測及預(yù)后評估中具有重要檢測價值。

G試驗對IFD早期診斷具有重要參考價值，但現(xiàn)實中存在假陽性以及假陰性問題，對該檢測方法的推廣應(yīng)用造成了制約［14-15］。真菌感染與病原菌的毒力以及患者免疫水平存在密切關(guān)系，所以CD4+T淋巴細(xì)胞計數(shù)能夠作為AIDS合并IFD的重要預(yù)測指標(biāo)。本研究認(rèn)為，G試驗聯(lián)合CD4+T淋巴細(xì)胞計數(shù)，對AIDS合并IFD具有較高的診斷能力，可以作為AIDS患者IFD搶先治療的依據(jù)。

本次研究中，G試驗對IFD組患者的臨床診斷陽性率為74.19%，陰性率為25.81%，其敏感度低主要為AIDS患者的新生隱球菌感染率比較高，并且和后壁莢膜使實驗出現(xiàn)假陰性有一定相關(guān)性，本次患者臨床診斷過程中2例被診斷為新生隱球菌陽性?；颊叩男律[球菌具有厚莢膜，很難進(jìn)行BDG釋放入血，對患者實施磺胺類藥物抗感染治療，并且對其檢測BDG值是在臨界范圍上，所以可以確定患者為假陰性結(jié)果。由本臨床研究結(jié)果可以明顯看出，G試驗聯(lián)合CD4+T淋巴細(xì)胞計數(shù)在AIDS合并IFD臨床診斷中的陽性率顯著高于單純的G試驗檢測，G試驗聯(lián)合CD4+T淋巴細(xì)胞計數(shù)對于確診AIDS合并IFD具有極高的價值，值得推廣應(yīng)用。但也要注意對患者的臨床確診越早越好，實施G試驗診斷時會受到多種因素的影響，同時也無法避免因為患者真菌感染導(dǎo)致的假陰性情況，對其臨床診斷率具有一定的影響，從而影響診斷準(zhǔn)確率以及治療效果。因此可以結(jié)合多種檢測方式共同診斷，以提高患者的早期診斷準(zhǔn)確率，并及時對患者實施有效治療。

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Significance of the Detection of （1，3）-β-D Glucan and CD4+T Lymphocyte Count for the Diagnosis of Invasive Fungal Disease in Patients with AIDS

DU Liu-en

【Key words】（1，3）-β-D glucan； CD4+T lymphocyte count； Acquired immune deficiency syndrome（AIDS）； Invasive fungal disease（IFD）

【Abstract】Objective：To discuss the diagnosis significance of the detection of （1，3）-β-D glucan （BDG） and CD4+T lymphocyte count for the diagnosis of invasive fungal disease （IFD） in patients with Acquired Immune Deficiency Syndrome （AIDS）.Method：Patients with AIDS suspected to suffer from IFD treated in our hospital were selected as the study objects，G test and CD4+T lymphocyte count were performed and detected simultaneously. According to the diagnosis standard of IFD， the patients were divided into IFD group of 31 cases and non-IFD group of 28 cases.G test for diagnosing IFD was analyzed for sensitivity and specificity. The results of CD4+T lymphocyte count and the positive rate of different detection methods of two groups were analyzed.Result：The CD4+T lymphocyte count in IFD group was significantly lower than that in non IFD group，the difference was statistically significant（P＜0.05）；G test results showed that the positive rate of IFD group was 74.19%， and the positive rate was 90.32%，G test results showed that the positive rate was 17.86% in the non IFD group，and the positive rate was 10.71%，the differences were statistically significant（P＜0.05）. Conclusion：G test combined CD4+T lymphocyte count has great value in diagnosing IFD with AIDS，it is worthy of generalizing and applying.

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2016.16.010

*基金項目：肇慶市科學(xué)技術(shù)局課題（201504030808）

通信作者：杜榴恩

收稿日期：（2015-12-08） （本文編輯：周亞杰）