金葡球菌和肺炎鏈球菌在體內對莫西沙星耐藥性分析

梁　霞（深圳市寶安區(qū)婦幼保健院　深圳　518100）

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金葡球菌和肺炎鏈球菌在體內對莫西沙星耐藥性分析

梁霞（深圳市寶安區(qū)婦幼保健院深圳518100）

摘要：目的：分析金葡球菌和肺炎鏈球菌在體內對莫西沙星的耐藥性。方法：采用大鼠肉芽腫袋模型，體內試驗選用野生株、第一代耐藥株以及多代耐藥株，使用不同菌株感染大鼠產生肉芽腫袋后分為A、B、C3個組，用莫西沙星進行不同劑量用法治療，每天收集肉芽腫袋的滲出物，根據耐藥株的產生測定金葡球菌與肺炎鏈球菌對莫西沙星的耐藥性。結果：由于莫西沙星對試驗菌株與大鼠肉芽腫袋中分離菌的MIC相同，所以敏感性無顯著變化。兩種感染病原體A組與B組的試驗結果相同，A組治療1d后肺炎鏈球菌減少約107CFU·mL-1，A組治療1d后金葡球菌的減少數量較慢，3d后減少數量明顯。B組的肺炎鏈球菌與金葡球菌的生存率都迅速下降，但減少幅度差異不明顯，莫西沙星對細菌生存數量的影響可持續(xù)6d，影響期間細菌沒有發(fā)生再生長，莫西沙星對肺炎鏈球菌的殺菌能力高于對金葡球菌的殺菌能力。同時B組與C組對比，50mg·kg-1·d-1的莫西沙星殺菌速度和程度都會明顯降低，但殺菌效果仍在，治療1d后細菌可降低103CFU·mL-1，效果持續(xù)4d，但50mg·kg-1·d-1的莫西沙星、感染后24h治療對多代耐藥株的療效幾乎為零。結論：即使人體內莫西沙星的濃度低于預期的治療濃度，也對金葡球菌與肺炎鏈球菌的野生株與第一代耐藥株具有良好的殺菌效果。

關鍵詞：金葡球菌肺炎鏈球菌莫西沙星耐藥性

莫西沙星是一種新型8-甲氧基氟喹諾酮類抗菌藥物［1］，1999年首次在德國上市，目前在我國上市的產品有莫西沙星片、莫西沙星膠囊以及莫西沙星注射液［2］，相比其他廣譜氟喹諾酮類藥物，具有更強的莫西沙星抗G+菌活性、不典型致病菌活性以及厭氧菌活性，同時保持了對G-菌的抗菌活性［3］。有研究報道稱，莫西沙星的抗菌活性很強，可能具有多種抗菌機制，所以有可能降低耐藥菌株的產生［4］。本次研究為了探討金葡球菌和肺炎鏈球菌在人體內對莫西沙星的耐藥性，采用動物肉芽腫袋模型，該模型由于是同一動物品系在一個致病菌容器，所以獲取標本較為容易，隨時可檢測抗菌活性且變異性小，同時動物肉芽腫袋中的宿主排斥減輕，可在細胞排斥干擾最小的情況下檢測出細菌與抗菌藥物之間的關系。

1　資料與方法

1.1菌株的選擇：所選的金葡球菌菌株為甲氧西林和環(huán)丙沙星敏感株No.133，莫西沙星的形態(tài)學、免疫學及細胞遺傳學（MIC）分型為0.06mg·L-1。肺炎鏈球菌株為No.4241，莫西沙星的MIC為0.12mg·L-1。

1.2菌株的耐藥性：將細菌放置于含有2倍稀釋度莫西沙星的腦心浸出液肉湯中，莫西沙星的濃度為0.01～1204mg·L-1，放置時間為一夜［5］，選擇MIC超過原始MIC1倍的菌株作為第一代耐藥株，同時選擇細菌生長最高藥物濃度的樣本，將其稀釋20倍，繼續(xù)接種于不同濃度藥物的培養(yǎng)基中放置一夜，重復傳代至金葡球菌的MIC到2mg·L-1，23代；肺炎鏈球菌MIC到1mg·L-1，17代，將其作為多代耐藥株。

1.3方法：采用大鼠肉芽腫袋模型檢測細菌生長情況與較長時間內的細菌耐藥情況，選擇雌性Wistar大鼠、重量在120～160g之間的作為模型對象，在其肩胛間皮下軟組織中注射25mL過濾空氣，形成空腔，隨后立即在空腔中注射巴豆油，于7d后當大鼠肉芽腫袋中充滿滲出物時注射致病菌［6］。金葡球菌與肺炎鏈球菌的最初生存率大約為108CFU·mL-1滲出液。使用不同菌株感染大鼠產生肉芽腫袋后分為A、B、C3個組，每組10只大鼠，A組大鼠肉芽腫袋模型于感染1h后進行治療，給予100mg·kg-1· d-1的莫西沙星灌胃治療；B組大鼠肉芽腫袋模型于感染24h后進行治療，給予100mg·kg-1·d-1的莫西沙星灌胃治療；C組大鼠肉芽腫袋模型于感染24h后進行治療，給予50mg·kg-1·d-1的莫西沙星灌胃治療。每天在給藥前收集大鼠肉芽腫袋的滲出物標本，接種于不含藥物的培養(yǎng)基中，檢測CFU水平，同時接種于含有莫西沙星的培養(yǎng)基中檢測是否產生耐藥性。

1.4統(tǒng)計學方法：采用SPSS20.0統(tǒng)計學軟件分析數據，計數資料用率（%）表示，采用X2檢驗，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2　結果

2.1莫西沙星對金葡球菌與肺炎鏈球菌菌株的MIC：觀察發(fā)現，莫西沙星對金葡球菌野生株的MIC為0.06mg·L-1，對金葡球菌第一代耐藥株的MIC為0.12mg·L-1，對金葡球菌多代耐藥株的MIC為1.0mg·L-1。莫西沙星對肺炎鏈球菌野生株的MIC為0.12mg·L-1，對肺炎鏈球菌第一代耐藥株的MIC為0.25mg·L-1，對肺炎鏈球菌多代耐藥株的MIC為2.0mg·L-1。詳情見表1。

表1　莫西沙星對金葡球菌與肺炎鏈球菌菌株的MIC（mg·L-1）

2.2莫西沙星治療后從感染袋中分離出的菌株的敏感性：觀察發(fā)現，由于莫西沙星對試驗菌株與大鼠肉芽腫袋中分離菌的MIC相同，所以敏感性無顯著變化，詳情見表2。

2.3金葡球菌與肺炎鏈球菌對莫西沙星的耐藥性：實驗結果發(fā)現，兩種感染病原體A組與B組的試驗結果相同，A組治療1d后肺炎鏈球菌減少約107CFU·mL-1，A組治療1d后金葡球菌的減少數量較慢，3d后減少數量明顯。B組的肺炎鏈球菌與金葡球菌的生存率都迅速下降，但減少幅度差異不明顯，莫西沙星對細菌生存數量的影響可持續(xù)6d，影響期間細菌沒有發(fā)生再生長，莫西沙星對肺炎鏈球菌的殺菌能力高于對金葡球菌的殺菌能力。同時B組與C組對比，50mg·kg-1·d-1的莫西沙星殺菌速度和程度都會明顯降低，但殺菌效果仍在，治療1d后細菌可降低103CFU·mL-1，效果持續(xù)4d，但50mg·kg-1·d-1的莫西沙星、感染后24h治療對多代耐藥株的療效幾乎為零。

3　討論

莫西沙星的化學結構與其他氟喹諾酮類藥物的不同具有顯著性，因8位碳甲氧基的引入，擴大了抗菌譜，在保留早期氟喹諾酮類藥物對G-菌抗菌活性的同時，增強了對G+球菌、非典型病原體的抗菌活性，其抗菌活性明顯優(yōu)于第三代氟喹諾酮類藥物［7～8］。莫西沙星的殺菌機制主要是通過抑制細菌DNA螺旋酶或拓撲異構酶達到抑制細菌生長的目的，氟喹諾酮類藥物早期只能單純抑制拓撲異構酶，但莫西沙星能夠起到同時抑制拓撲異構酶以及DNA螺旋酶作用，所以導致細菌的耐藥性發(fā)展緩慢，呈現出低水平的耐藥性，只有在致病菌中的兩個靶酶基因編碼同時發(fā)生突變時才會出現耐藥［9～10］。本次研究中也發(fā)現，莫西沙星在人體內對金葡球菌與肺炎鏈球菌的野生株與第一代耐藥株具有良好的殺菌作用，即使?jié)舛鹊陀陬A期治療濃度，也可見良好的殺菌效果。

表2　莫西沙星治療后從感染袋中分離出的菌株的敏感性

參考文獻

［1］李熙建，肖亞雄，王昌蓉.幾種多重耐藥細菌耐藥性分析［J］.四川醫(yī)學，2012，33（10）：1812-1816.

［2］蘭健萍，韋柳華，蔣利君.549例血培養(yǎng)病原菌分布及耐藥性分析［J］.現代預防醫(yī)學，2013，40（16）：3104-3106.

［3］泰淑紅，王鵬，徐豪，等.333株金黃色葡萄球菌引起的臨床感染類型及耐藥性分析［J］.現代預防醫(yī)學，2015，42（22）：4211-4213.

［4］向蓉，楊新懷，隋洪，等.基層醫(yī)院耐甲氧西林金黃色葡萄球菌臨床分布與耐藥性分析［J］.中國基層醫(yī)藥，2013，20（18）：2727-2730.

［5］諸葛林敏，張春梅，王奕英，等.手術切口感染的病原菌分布與耐藥性分析［J］.中華醫(yī)院感染學雜志，2014，24（14）：3425-3427.

［6］何淑霞，孟德陽，周建合.外科感染病原菌檢測及耐藥性分析［J］.中華醫(yī)院感染學雜志，2014，24（5）：1112-1114.

［7］何秋瑩，張智賢，曾華，等.2008-2011年四年我院560株MRSA的耐藥性分析及分子分型［J］.中國微生態(tài)學雜志，2014，26 （1）：82-86.

［8］馬華蘭，付曉，黃俊，等.醫(yī)院內泌尿系統(tǒng)感染病原菌分布及耐藥性分析［J］.中華醫(yī)院感染學雜志，2013，23（13）：3274-3275.

［9］陳紅梅.金黃色葡萄球菌臨床分布及耐藥性檢測分析［J］.吉林醫(yī)學，2013，34（32）：6659-6661.

［10］孫一奎，張傳領，趙楓，等.金黃色葡萄球菌醫(yī)院感染的臨床分布及耐藥性分析［J］.中華醫(yī)院感染學雜志，2012，22（17）：3865-3867.

Staphylococcus auras and Streptococcus pneumatic analysis of tamoxifen resistance in vino

Abstract：Objective：Staphylococcus auras and Streptococcus pneumatic in the tamoxifen resistance in vino. Methods：Rats bags granular，wild strains were selected and in vino，as well as the first generation of drug-resistant strains of drug-resistant strains of many generations after using different strains of rats infected produce granules bags into A，B，C3 groups，with different doses of tamoxifen therapy usage，gather daily granular pouch exude was measured Staphylococcus auras and Streptococcus pneumatic resistance to tamoxifen according resistant strains. Results：Since tamoxifen rat granular pouch test strain isolates MIC same，so no significant change sensitivity. Both pathogens A group with the test results the same group B，group A after treatment 1d by about 107CFU·mL-1Streptococcus pneumatic，group A after treatment 1d reduce the number of Staphylococcus aureus slow，3d after reducing significantly the number. Group B Streptococcus pneumatic and Staphylococcus auras survival are rapidly decreased，but the decrease was not significantly different amplitude，the bacteria did not occur during the re-growth of bacteria affect the survival of tamoxifen sustainable 6d，influence，and tamoxifen Streptococcus pneumatic is higher than for bactericidal capacity Staphylococcus auras bactericidal capacity. While group B and group C contrast，50mg·kg-1·d-1tamoxifen sterilization speed and extent will significantly reduce，but still bactericidal effect，bacteria can reduce treatment 1d days 103CFU·mL-1，the effect lasts 4 days，but 50mg·kg-1·d-1of tamoxifen，24h post -infection therapy on multiple generations of resistant strains is almost zero. Conclusion：Even if the body Modishness stars concentrations below the expected therapeutic concentrations，still wild strains of Staphylococcus auras and Streptococcus pneumatic and the first generation of drug-resistant strains has a good bactericidal effect.

Key words：Staphylococcus auras Streptococcus pneumatic Tamoxifen Resistance

中圖分類號：R965

文獻標識碼：B

文章編號：1672-8351（2016）06-0168-02