934例絨毛染色體核型分析

郭芬芬　徐盈　陳必良　王德堂　張建芳　黎昱　徐慧　燕鳳

(第四軍醫(yī)大學(xué)第一附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科，陜西 西安　710032)

934例絨毛染色體核型分析

郭芬芬徐盈陳必良王德堂張建芳*黎昱徐慧燕鳳

(第四軍醫(yī)大學(xué)第一附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科，陜西 西安710032)

【摘要】目的探討絨毛取樣產(chǎn)前診斷的有效性和安全性。方法B超定位經(jīng)腹絨毛取材法，采用絨毛細(xì)胞短期培養(yǎng)法，制備染色體，G顯帶進(jìn)染色體核型分析。結(jié)果934例絨毛標(biāo)本中，其中85例為流產(chǎn)胚胎，培養(yǎng)成功率為99.46%。849例絨毛活檢術(shù)中，異常核型75例，異常率為8.83%。其中多倍體8例，12-三體2例，13-三體2例，16-三體10例，18-三體10例，21-三體7例，22-三體2例，標(biāo)記染色體2例，性染色異常9例，分別是1例47,XXY和8例45,X0。嵌合體3例，結(jié)構(gòu)異常6例，染色體多態(tài)性14例，涉及的染色體有16、15、13。85例胚胎終止發(fā)育后，清宮術(shù)絨毛取材，進(jìn)行胎兒染色體核型分析，檢測(cè)出27例染色體異常核型，檢出率為31.76%。結(jié)論絨毛染色體核型分析是孕早期產(chǎn)前診斷和胚胎停止發(fā)育原因分析常用的方法，是早期、快速、有效、安全的產(chǎn)前診斷方法。將絨毛染色體分析技術(shù)廣泛應(yīng)用于臨床產(chǎn)前診斷，有效避免染色體異常兒的出生，對(duì)提高我國(guó)人口素質(zhì)有重要的意義。

【關(guān)鍵詞】絨毛; 染色體; 核型分析; 流產(chǎn)胚胎

絨毛是胚外組織，它和胚胎由同一受精卵發(fā)育而來[1]。絨毛染色體分析技術(shù)是近30年來國(guó)內(nèi)外使用較為廣泛的一項(xiàng)產(chǎn)前診斷技術(shù)，主要用于孕早期胎兒染色體分析和流產(chǎn)原因分析，是有效降低和杜絕先天出生缺陷患兒的有力手段[2]。對(duì)于這一診斷方法的安全性和有效性醫(yī)學(xué)界仍存在爭(zhēng)議。在此，經(jīng)本實(shí)驗(yàn)室開展的849例B超定位經(jīng)腹絨毛穿刺取樣和85例流產(chǎn)胚胎產(chǎn)前診斷及部分胎兒隨訪結(jié)果報(bào)告如下。

1對(duì)象與方法

1.1研究對(duì)象自2009年1月至2015年6月底來本院產(chǎn)科門診和遺傳咨詢門診的934例孕早期(8～14周)孕婦，產(chǎn)前檢查的指征包括高齡、孕期服藥或接觸有害物質(zhì)史、自然流產(chǎn)史、胚胎停育史、曾生育過染色體異常的孩子、夫妻一方或雙方染色體異常、胎兒B超異常等，結(jié)果見表1。

表1　934例受檢者產(chǎn)前診斷的指征

1.2方法受檢者妊娠孕周均在8～14周，B超定位經(jīng)腹絨毛穿刺取樣，每次取材的濕重為15～20 mg。采用絨毛短期培養(yǎng)法，一般為5～8天后收獲細(xì)胞。用0.25%胰酶消化細(xì)胞，將細(xì)胞移入離心管中2000 r/min離心，用含1%檸檬酸鈉和0.075%KCl(1∶1)的低滲液低滲15分鐘后, 用3∶1的固定液(甲醇：冰醋酸)預(yù)固定，1500 r/min離心棄上清，再固定兩次后，常規(guī)制片，G顯帶，然后進(jìn)行染色體核型分析。每份標(biāo)本至少計(jì)數(shù)20個(gè)分裂象，分析5～10個(gè)核型。

2結(jié)果

2.1934例絨毛標(biāo)本中，其中85例為流產(chǎn)胚胎。有5例因?yàn)槲廴净蛘呷〔倪^少而培養(yǎng)失敗，培養(yǎng)成功率為99.46%。對(duì)于絨毛穿刺取樣培養(yǎng)失敗的受檢者，待孕中期為其進(jìn)行羊水穿刺取樣，羊水細(xì)胞培養(yǎng)均成功。

2.2849例絨毛活檢標(biāo)本中，異常核型75例，異常率為8.83%。常染色體數(shù)目異常33例，占異常核型的44.00%(33/75)，其中12-三體2例，13-三體2例，16-三體10例，18-三體10例，21-三體7例，22-三體2例。多倍體8例，占異常核型的10.67%(8/75)。標(biāo)記染色體2例，占異常核型的2.67%(2/75)。性染色體異常9例，占異常核型的12.00%(9/75)，分別是1例47,XXY和8例45,XO。嵌合體3例，占異常核型的4.00%(3/75)。染色體易位6例，占異常核型的8.00%(6/75)。染色體多態(tài)性14例，涉及的染色體有16、15、13，結(jié)果見圖1。

圖1　絨毛活檢染色體分析結(jié)果

2.3849例經(jīng)腹絨毛穿刺取樣的孕婦中，經(jīng)隨訪，有2人流產(chǎn)，其中一例胎兒染色體異常，為47,XX,+13，1例胎兒染色體正常的孕婦流產(chǎn)，流產(chǎn)率0.24%(2/849)，流產(chǎn)率低于文獻(xiàn)報(bào)道的1%。

2.485例流產(chǎn)胚胎中，檢出異常核型27例，異常率31.76%(27/85)。其中，多倍體7例，21-三體1例，22-三體2例，16-三體10例，12-三體2例，性染色體嵌合體3例，染色體多態(tài)性2例，結(jié)果見圖2。

圖2　流產(chǎn)胚胎染色體分析結(jié)果

3討論

絨毛系胚胎的附屬結(jié)構(gòu)，它是胚胎和母體進(jìn)行物質(zhì)交換的重要組成部分[2]。因此，絨毛穿刺取樣的時(shí)間和取材量的多少很關(guān)鍵，一般認(rèn)為妊娠8～14周是最佳的取材時(shí)間，孕周過早胚胎著床不夠牢固，絨毛層較薄，取材容易導(dǎo)致流產(chǎn)；超過14周以后，囊胚較大表面張力大，取材很容易破水導(dǎo)致流產(chǎn)，另有絨毛細(xì)胞退變，滋養(yǎng)細(xì)胞開始減少，穿刺取絨毛組織太少[3]。絨毛取材量的多少以及受損程度關(guān)系到胚胎的發(fā)育，我們一般取材量控制在15～20 mg(濕重)。經(jīng)隨訪后，已出生的胎兒未出現(xiàn)發(fā)育及四肢畸形等影響，證實(shí)絨毛取材基本上不會(huì)影響胚胎發(fā)育，是一種安全有效的產(chǎn)前診斷方法。

849例絨毛活檢標(biāo)本中，異常核型75例，異常率為8.83%。常染色體數(shù)目異常33例，占異常核型的44.00%(33/75)，其中12-三體2例，13-三體2例，16-三體10例，18-三體10例，21-三體7例，22-三體2例。多倍體8例，占異常核型的10.67%(8/75)。標(biāo)記染色體2例，占異常核型的2.67%(2/75)。性染色體異常9例，占異常核型的12.00%(9/75)，分別是1例47,XXY和8例45,XO。嵌合體3例，占異常核型的4.00%(3/75)，對(duì)于絨毛取材來說，有可能混有母體細(xì)胞，國(guó)外報(bào)道，如果出現(xiàn)母體細(xì)胞污染小于10%，可認(rèn)為是先天性代謝紊亂造成的假性嵌合體[4]。因此對(duì)于嵌合體的病例，本實(shí)驗(yàn)室會(huì)建議孕婦孕中期再行羊膜腔穿刺術(shù)抽取羊水進(jìn)行核型分析，以排除假性嵌合體。染色體易位6例，占異常核型的8.00%(6/75)。染色體多態(tài)性14例，涉及的染色體有16、15、13。在75例絨毛染色體異常核型中，查閱孕婦的臨床資料，其中16例孕婦高齡，血清學(xué)篩查唐氏高危2例，胎兒無創(chuàng)DNA檢測(cè)高風(fēng)險(xiǎn)的3例，反復(fù)流產(chǎn)史孕婦10例，B超顯示胎兒發(fā)育異常15例，孕婦有不良生育史的16例，孕期服藥史4例，夫妻一方或雙方工作環(huán)境接觸有毒有害物質(zhì)史3例，夫妻一方染色體異常的6例。因此，對(duì)于有以上情況的孕婦進(jìn)行孕早期產(chǎn)前診斷十分必要，可以早期發(fā)現(xiàn)染色體異常胎兒、在孕婦及家屬知情同意的情況下及時(shí)終止妊娠，避免染色體異常兒的出生，有效提高新生兒的出生質(zhì)量。85例流產(chǎn)胚胎中，有27例染色體異常核型，其中，21-三體1例，多倍體7例，22-三體2例，16-三體10例，12-三體2例，性染色體嵌合體3例，染色體多態(tài)性2例，染色體異常率31.76%。有報(bào)道早期流產(chǎn)胚胎檢查50%～60%有染色體異常，胚胎染色體異常是自然流產(chǎn)的主要原因[6]。本次研究中, 流產(chǎn)胚胎絨毛染色體異常率31.76%，明顯高于產(chǎn)前診斷絨毛的染色體異常。由此可見，胚胎染色體異常是早期自然流產(chǎn)最常見的原因。在27例異常流產(chǎn)胚胎染色體核型中，染色體數(shù)目異常22例，占總異常例數(shù)的81. 48%。由此可見，數(shù)目異常是導(dǎo)致胚胎早期自然流產(chǎn)的最主要原因?？赡苁怯捎跀?shù)目異常的胚胎，遺傳缺陷大，致死性高[7]。對(duì)流產(chǎn)胚胎進(jìn)行染色體核型分析查找胚胎停止發(fā)育或自然流產(chǎn)的原因，為孕婦下一次妊娠提供臨床指導(dǎo)[10]。對(duì)臨床醫(yī)師來說，在發(fā)現(xiàn)孕婦胚胎發(fā)育異?；蛲Ｖ拱l(fā)育后，不要盲目的去保胎，建議其及時(shí)進(jìn)行孕早期產(chǎn)前診斷，排除染色體異常，為孕婦提供科學(xué)、合理的產(chǎn)前檢查。

絨毛染色體檢查會(huì)增加流產(chǎn)和胎盤嵌合的風(fēng)險(xiǎn)。849例絨毛穿刺取樣的孕婦中，有2人發(fā)生流產(chǎn)，其中一例胎兒染色體異常，為47,XX,+13；1例胎兒染色體正常的孕婦流產(chǎn)，流產(chǎn)率0.24%。目前，絨毛穿刺取樣的方法有兩種，一種是B超定位經(jīng)腹絨毛取材法，另一種是B超定位經(jīng)宮頸絨毛吸取法。在我們的實(shí)際工作中，發(fā)現(xiàn)B超定位經(jīng)腹絨毛取材法，進(jìn)針次數(shù)少，孕婦出血量少，穿刺成功率高。經(jīng)腹穿刺獲取產(chǎn)前診斷絨毛比通過經(jīng)宮頸絨毛吸取法獲取的絨毛發(fā)生污染的幾率低，吸取的絨毛的質(zhì)量較高,更有利于培養(yǎng)以及母體細(xì)胞污染少，胎兒流產(chǎn)率低[5]。849例中流產(chǎn)2人，流產(chǎn)率0.24%明顯低于文獻(xiàn)報(bào)道的1%。因此，建議選擇B超定位經(jīng)腹絨毛取材法為宜。

絨毛染色體核型分析是孕早期產(chǎn)前診斷和流產(chǎn)原因分析常用的方法，具有早期、快速、簡(jiǎn)便、有效的優(yōu)點(diǎn)。雖然絨毛穿刺術(shù)的手術(shù)難度大，流產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn)高，但經(jīng)過本實(shí)驗(yàn)室的探索與改良，大大提高了絨毛穿刺術(shù)的安全性和細(xì)胞培養(yǎng)的成功率。將絨毛染色體分析技術(shù)廣泛應(yīng)用于臨床產(chǎn)前診斷，有效避免染色體異常兒的出生，對(duì)提高我國(guó)人口素質(zhì)有重要的意義。

參 考 文 獻(xiàn)

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編輯：宋文穎

【Abstract】ObjectiveTo investigate the efficacy and safety ofchorionic villus sampling for prenatal diagnosis. MethodThe chorionic villus were aspirated the transabdominalultrasound localization method, using the chromosome and G band wereanalysed by villus cellsshort-stage culturemethod. ResultsIn 934 cases villus samples, cultivatea success rate of 99.46%, 85 cases were abortus. Chorionic villus samplings of 849, there were 75 cases abnormal karyotype, abnormal rate of 8.83%. Including 8 cases of polyploidy, 2 cases oftrisomy 12, 2 cases of trisomy 13, 10 case oftrisomy 16, 10 cases of trisomy 18, 7 cases oftrisomy 21, 2 cases oftrisomy 22, 2 cases of maker chromosome. There were 9 cases of sex chromosome abnormalities, respectively, one case of 47, XYY, 8 cases of 45, XO. Chimera was 3 cases. Structural abnormalities chromosome were 6 cases. Chromosomepolymorphism were 14 cases, involving chromosomes 16, 15, 13. In 85 cases abortus, There were 27 cases abnormal karyotype, abnormal rate of 31.76%. ConclusionsThe villichromosome karyotype analysis was a common method in trimester prenatal diagnosis and the reason of abortus, which was an early, rapid, effective and safemethod of prenatal diagnosis. The villichromosome analy sistechnology is widely used in clinicalprenatal diagnosis, which was an effective way was to avoid abnormalities chromosomal child′s birth, to improve the quality of our population.

【Key words】chorionic villus sampling; chromosome; karyotyping; abortus

DOI:10.13470/j.cnki.cjpd.2015.03.008

*通訊作者：張建芳，E-mail：zhangjianfang@fmmu.com

【中圖分類號(hào)】R394.2

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

(收稿日期：2015-07-30)