進(jìn)口魚粉中沙門菌監(jiān)測與分析

張體銀，王武軍，黃嫦嬌，林素潔，白泉陽，鄭　騰，張志燈，于師宇（福建出入境檢驗檢疫局福建省檢驗檢疫技術(shù)研究重點實驗室，福建福州350001）

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進(jìn)口魚粉中沙門菌監(jiān)測與分析

張體銀，王武軍，黃嫦嬌，林素潔，白泉陽，鄭騰，張志燈，于師宇
（福建出入境檢驗檢疫局福建省檢驗檢疫技術(shù)研究重點實驗室，福建福州350001）

摘要：為了解進(jìn)口魚粉中沙門菌的污染狀況，給制定相關(guān)的檢驗檢疫措施提供必要的理論依據(jù)，對2011年到2014年期間來自18個國家的543份魚粉樣品進(jìn)行沙門菌檢測。魚粉樣品經(jīng)過增菌、沙門茵平板分離、VITEKⅡ生化試驗和血清學(xué)鑒定后，共分離鑒定到27株沙門菌，分屬于B、C、E 3個群。沙門茵的總檢出率為4.97%，且來自不同國家的魚粉陽性率不同。結(jié)果顯示，進(jìn)口魚粉中存在著不同程度的沙門菌污染，應(yīng)加強進(jìn)口魚粉的檢疫和監(jiān)管，減少沙門菌病的發(fā)生。

關(guān)鍵詞：進(jìn)口魚粉；沙門菌；檢驗檢疫

沙門菌是魚粉中常見的一種致病菌，很容易引起魚粉的污染，并逐步在動物與動物、動物與人、人與人之間通過直接或間接的途徑傳播，引起人和動物發(fā)?。?］。福建省是水產(chǎn)養(yǎng)殖大省，馬尾口岸是我國魚粉主要進(jìn)口口岸之一，2011-2014年以來，累計進(jìn)口將近50萬噸，涉及金額7.8億美元，主要從智利、秘魯、美國、俄羅斯、加拿大、挪威等國家進(jìn)口。本試驗將對進(jìn)口魚粉進(jìn)行沙門菌監(jiān)測，為有效防范疫病傳入和制定相應(yīng)的檢驗檢疫措施提供理論依據(jù)，同時，對于維護(hù)國內(nèi)畜禽養(yǎng)殖、水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的健康、可持續(xù)發(fā)展也具有重要意義。

1　材料與方法

1.1檢測樣品被檢樣品選自2011年1月-2014年9月期間馬尾口岸進(jìn)口魚粉，共計543份，其中白魚粉311份，紅魚粉232份。主要來自美國、俄羅斯、智利、秘魯和厄瓜多爾等18個國家，見表1。

1.2儀器全自動微生物分析系統(tǒng)（VITEK 2 Compact），法國生物梅里埃公司產(chǎn)品。

1.3培養(yǎng)基和試劑緩沖蛋白胨水（BPW）、氯化鎂-孔雀綠（RV）增菌液、亞硒酸鹽胱氨酸（SC）增菌液、DHL瓊脂、酚紅煌綠瓊脂、三糖鐵（TSI）瓊脂和賴氨酸脫羧酶培養(yǎng)基，均購自北京陸橋生物技術(shù)有限責(zé)任公司；革蘭陰性菌鑒定卡（VITEK 2 GN Test Kit），購自法國生物梅里埃公司。

表1　樣品來源及數(shù)量

1.4沙門菌屬診斷血清購自寧波天潤生物藥業(yè)有限公司。

1.5前增菌分別將上述魚粉混勻，無菌稱取25 g加入到225 mL緩沖蛋白胨水中置36℃溫箱培養(yǎng)20 h。

1.6選擇性增菌取前增菌液0.1 mL轉(zhuǎn)接于10 mL氯化鎂-孔雀綠增菌液中，42℃培養(yǎng)24 h；同樣取10 mL前增菌液轉(zhuǎn)接于100 mL亞硒酸鹽胱氨酸增菌液中，37℃培養(yǎng)24 h。

1.7分離培養(yǎng)取上述兩種增菌液分別劃線接種于DHL瓊脂和酚紅煌綠瓊脂平皿上，置37℃溫箱中培養(yǎng)20 h～24 h，如生長微弱，或無典型沙門菌落出現(xiàn)時，重新培養(yǎng)18 h～24 h。沙門菌在酚紅煌綠瓊脂上，培養(yǎng)基顏色由粉紅變紅，并且為紅色透明則為可疑菌落；在DHL瓊脂上中心為黑色，或黃褐色透明的小型菌落。

1.8初步生化試驗挑選可疑菌落，劃線穿刺接種在三糖鐵培養(yǎng)基斜面上，36℃培養(yǎng)24 h。再挑取同一可疑菌落接種賴氨酸脫羧酶培養(yǎng)基和營養(yǎng)瓊脂平板，36℃培養(yǎng)24 h。根據(jù)三糖鐵試驗和賴氨酸脫羧酶試驗顏色變化，有無產(chǎn)氣和硫化氫產(chǎn)生，參照表2判定結(jié)果。

表2　沙門菌屬在三糖鐵瓊脂和賴氨酸脫羧酶試驗培養(yǎng)基內(nèi)的反應(yīng)

1.9全自動微生物生化鑒定系統(tǒng)根據(jù)初步生化反應(yīng)判斷結(jié)果，從營養(yǎng)瓊脂平板上挑取可疑菌落，用生理鹽水制備成濁度適當(dāng)?shù)木鷳乙海褂萌詣游⑸锷b定系統(tǒng)進(jìn)行鑒定。

1.10血清學(xué)鑒定按沙門菌屬診斷血清操作說明書進(jìn)行反應(yīng)。

2　結(jié)果

2.1進(jìn)口魚粉沙門菌檢測情況對543份進(jìn)口魚粉通過前增菌、選擇性增菌、分離培養(yǎng)、全自動微生物生化鑒定和血清學(xué)鑒定進(jìn)行沙門菌檢測，共檢出沙門菌陽性27份，陽性率為4.97%，其中2011年13份，2012年10份，2013年4份，2014年0份。在27份陽性樣品中，來自美國16份，厄瓜多爾2份，墨西哥6份，泰國3份，來自其余國家的樣品均陰性。陽性樣品分布見表3。

2.2沙門菌血清型分布根據(jù)沙門菌屬診斷血清操作說明書對27株沙門菌進(jìn)行血清型鑒定，結(jié)果顯示，8株沙門菌屬于C群沙門菌，18株為B群，1株為E4群，其中6株能夠鑒定到具體的血清型，其余的21株只能鑒定到群，見表4。

表3　陽性樣品檢出情況

表4　血清型分布

3　討論

中國是世界上魚粉進(jìn)口量最大的國家，年進(jìn)口量大約在100萬噸左右，產(chǎn)品主要來自秘魯、智利和美國等國家［2］。福州馬尾口岸作為國內(nèi)三大魚粉進(jìn)口口岸之一，年進(jìn)口量接近20萬噸，根據(jù)近4年的統(tǒng)計，產(chǎn)品主要來自美國、秘魯和智利等國家，其中美國批次最多，占總批次的50%左右。

魚粉極易被沙門菌污染，當(dāng)飼料中水分含量高于10%，且儲存環(huán)境溫度高的情況下，沙門菌會迅速增殖。在適宜的溫度、濕度和pH值環(huán)境條件下，每公斤魚粉中沙門菌含量高達(dá)8 000個［3-4］，將給食用后的動物帶來嚴(yán)重疾病，而且國內(nèi)也多次從進(jìn)口魚粉中檢出沙門菌［5-7］。本試驗對近4年進(jìn)口魚粉進(jìn)行沙門菌監(jiān)測，共檢出27份，其中美國最多為16份，陽性率墨西哥最高，秘魯、智利等14個國家全部為陰性，在一定程度上說明了秘魯和智利等一些魚粉出口國具有完善的安全衛(wèi)生質(zhì)量管理措施，所以針對不同國家來源的魚粉要采取不同的檢疫措施，根據(jù)監(jiān)測情況確定具體的監(jiān)控頻率。在檢出的27株沙門菌中，全部分布在B、C群和E群，其中來自美國和墨西哥的魚粉主要以B群為主，從厄瓜多爾檢出的沙門菌均為C群，從泰國分離的3株沙門菌中有1份為E群，血清型可能和來源國家存在一定的關(guān)系，魚粉生產(chǎn)、加工或運輸過程中受到當(dāng)?shù)亓餍芯甑奈廴尽Ｔ?7株沙門菌中，只有6株能夠鑒定到具體的血清型，其他只能鑒定到群，主要可能是由于H因子反應(yīng)不太敏感或者試劑盒有待進(jìn)一步完善，這也是目前沙門菌血清型鑒定遇到的難題之一。另外對于不論從美國進(jìn)口的白魚粉還是從其他國家進(jìn)口的紅魚粉中都能檢出沙門菌的情況，說明了污染狀況跟魚粉種類無關(guān)，對于目前普遍認(rèn)為的白魚粉受沙門菌污染程度比紅魚粉低的說法也有待進(jìn)一步驗證。

針對進(jìn)口魚粉中沙門菌經(jīng)常被檢出的問題，當(dāng)?shù)貦z驗檢疫部門也采取了相關(guān)的管理措施，一是健全溯源管理，對國外魚粉出口加工企業(yè)進(jìn)行質(zhì)量管理考核，對于衛(wèi)生管理條件較好的企業(yè)進(jìn)行注冊備案，允許其產(chǎn)品出口到中國；二是實施風(fēng)險管理，在風(fēng)險分析的基礎(chǔ)上，對不同進(jìn)口國家或地區(qū)分類制定安全風(fēng)險監(jiān)控計劃，確定具體的監(jiān)控項目和頻率，提升檢驗檢疫監(jiān)管工作的科學(xué)性；三是強化后續(xù)監(jiān)管，對進(jìn)境魚粉實施進(jìn)口商報備、存放和標(biāo)簽及包裝場所的備案管理，對檢出不合格的產(chǎn)品均嚴(yán)格按照規(guī)定進(jìn)行檢疫處理；四是強化企業(yè)主體責(zé)任意識，認(rèn)真做好對不合格產(chǎn)品的處理，防止疫病傳播。通過上述措施的落實，沙門菌檢出率也是逐年下降，從2011年的8.3%降到2013年的2.9%，2014年截止到目前還未發(fā)現(xiàn)沙門菌陽性產(chǎn)品，優(yōu)化監(jiān)管措施成效初顯。

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［7］吳宗芬，余萍.魚粉中檢出阿貢納沙門菌的報道［J］.貴州畜牧獸醫(yī)，2011，02：30-31.

中圖分類號：S816

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B

文章編號：0529- 6005（2016）03- 0095- 02

收稿日期：2014-12-02

基金項目：福建出入境檢驗檢疫局科研項目（FK2012-33，F(xiàn)K2012-32）

作者簡介：張體銀（1979-），男，高級工程師，碩士，研究方向為動物檢疫，E-mail：zhty5337@163.com