家蠶微粒子病治療藥物篩選和應(yīng)用技術(shù)研究

黃旭華，潘志新，韋廷秀，湯慶坤，賈雪峰，黃深惠，王霞，羅梅蘭

（廣西壯族自治區(qū)蠶業(yè)技術(shù)推廣總站，南寧市 530007）

·試驗研究·

家蠶微粒子病治療藥物篩選和應(yīng)用技術(shù)研究

黃旭華，潘志新，韋廷秀，湯慶坤，賈雪峰，黃深惠，王霞，羅梅蘭

（廣西壯族自治區(qū)蠶業(yè)技術(shù)推廣總站，南寧市 530007）

家蠶微粒子病是一種可以應(yīng)用藥物進行治療的蠶病。通過比較多種化學(xué)藥物對家蠶微粒子病的防治效果，發(fā)現(xiàn)阿苯達唑?qū)倚Q微粒子病具有較好的治療效果，而且對蠶體毒害性低。利用阿苯達唑采取溶液浸泡桑葉或以藥粉直接噴灑蠶座上桑葉的方式均可以達到治療家蠶微粒子病的效果，兩種使用方式的實用濃度分別為1 000 mg/L和1.0 g/kg，而且適宜采取每天添食藥物1餐的方式利用藥物。在蠶種生產(chǎn)中初步應(yīng)用阿苯達唑組合藥物防治家蠶微粒子病，也取得了一定的防治效果。

家蠶微粒子??；治療藥物；阿苯達唑；使用方式

家蠶微粒子病是一種毀滅性蠶病。在蠶業(yè)生產(chǎn)中，除了實施母蛾檢疫控制家蠶微粒子病胚種傳染外，進行蠶業(yè)消毒殺滅病原防止食下傳染也是防治家蠶微粒子病最基本的措施[1]。但隨著養(yǎng)蠶環(huán)境復(fù)雜化，病原污染嚴重，雖然嚴格執(zhí)行消毒防病制度，有時仍收效甚微，還是無法控制家蠶微粒子病的發(fā)生。據(jù)此，許多蠶業(yè)工作者致力于建立新的家蠶微粒子病防治方法，其中利用化學(xué)藥劑治療家蠶微粒子病是研究熱點之一。目前已經(jīng)開發(fā)出多種對家蠶微粒子病有一定治療效果的藥物，如防微靈[2]、克微1號[3]、微毒靈[4]、TAAL[5]、原蟲凈[6]等，其中防微靈應(yīng)用范圍較廣，已經(jīng)在很多蠶區(qū)推廣應(yīng)用。這些家蠶微粒子病治療藥物的應(yīng)用方式主要有兩種：一種是將藥物溶液噴灑于桑樹桑葉上讓其內(nèi)吸，再采摘桑葉養(yǎng)蠶；另外一種是利用離體桑葉浸泡于藥物溶液中，晾干后再喂蠶。

雖然國內(nèi)已經(jīng)開發(fā)出多種家蠶微粒子病治療藥物，但目前在蠶業(yè)生產(chǎn)中的應(yīng)用治療效果相差甚遠，以致于很多藥物未能應(yīng)用于蠶業(yè)生產(chǎn)防治家蠶微粒子病，究其原因可能是藥物藥效不穩(wěn)定，或者使用方式與生產(chǎn)形勢需求存在差距。為了提升化學(xué)藥物在家蠶微粒子病治療方面的應(yīng)用范圍，本文篩選新的家蠶微粒子病治療藥物，并探索新的家蠶微粒子病治療藥物使用方式，以期促進藥物治療成為蠶種生產(chǎn)防控家蠶微粒子病的重要方式。

1 材料與方法

1.1 試驗用蠶品種

932×芙蓉，7532×湘暉。

1.2 藥物

多菌靈（廣東省農(nóng)科集團前沿動物保健有限公司生產(chǎn)），阿苯達唑片（中美天津史克制藥有限公司生產(chǎn)），阿苯達唑（原料），芬苯噠唑片（南京金盾動物藥業(yè)有限公司生產(chǎn)），左旋咪唑（原料）。

1.3 病原

家蠶微孢子蟲（Nosema bombycis，簡稱Nb），由廣西蠶業(yè)技術(shù)推廣總站蠶病研究室保存，接種蠶體繁殖后，再進行孢子提取、純化和精制[7]，4℃保存?zhèn)溆?。配置試驗濃度?.0×105個孢子/mL。

1.4 試驗方法

1.4.1 攻毒處理 用經(jīng)過含有效氯濃度為0.5%的漂白粉精溶液浸泡消毒10 min的潔凈桑葉（下同）浸泡到家蠶微孢子蟲孢子溶液中，取出、晾干，然后給供試蠶添毒12 h。

1.4.2 家蠶微粒子病有效治療藥物篩選 將各種藥物配制成濃度500 mg/L的溶液。分別取適量桑葉浸泡到各種藥物溶液中，晾干后備用。用含有孢子的桑葉給4齡起蠶連續(xù)添食12 h后，馬上飼喂含藥桑葉1餐，之后每天飼喂含藥桑葉1餐，其他時間改用潔凈桑葉飼喂，飼養(yǎng)至熟蠶、結(jié)繭、化蛾，逐頭進行鏡檢，調(diào)查感染率。試驗設(shè)毒對照和空白對照，每個處理設(shè)2個重復(fù)，每個重復(fù)50頭蠶。

1.4.3 家蠶微粒子病治療藥物使用方式比較 通過在1.4.2篩選出藥效最佳的藥物，分兩種方式使用藥物：（1）將目的藥物配制成濃度1 000 mg/L的溶液，取適量桑葉浸泡到藥物溶液中，晾干后再飼喂家蠶；（2）將藥物粉劑直接噴灑到蠶座的桑葉上，藥物用量為1.0 g/kg，即1 kg桑葉用藥1.0 g藥物。其他攻毒和用藥時間及調(diào)查方式同1.4.2。

1.4.4 家蠶微粒子病治療藥物有效使用濃度調(diào)查將1.4.2篩選出藥效最佳的藥物采取溶液浸泡桑葉和藥粉直接噴灑桑葉兩種方式用藥，其中設(shè)定溶液浸泡方式有效成分濃度為500 mg/L、1 000mg/L和1 500 mg/L；藥粉噴灑方式有效成分濃度為0.5 g/kg、1.0 g/kg和1.5g/kg。其他攻毒和用藥時間及調(diào)查方式同1.4.2。

1.4.5 家蠶微粒子病治療藥物有效治療時期調(diào)查選擇1.4.2篩選出藥效最佳的藥物。給4齡起蠶連續(xù)攻毒12 h后，進行分區(qū)，50頭/區(qū)，然后分別于0 h、12 h、24 h、36 h、48 h和60取蠶喂藥，每個處理設(shè)3個重復(fù)區(qū)（50頭蠶/區(qū)），添食含藥桑葉12 h后，其他時間改用正常桑葉飼喂，飼養(yǎng)至熟蠶、結(jié)繭、化蛾，逐條進行鏡檢，調(diào)查感染率。試驗設(shè)攻毒后連續(xù)添食含藥桑葉的用藥對照、毒對照和空白對照。

1.4.6 家蠶微粒子病治療藥物使用有效間隔時間調(diào)查 選擇1.4.2篩選出藥效最佳的藥物。給4齡起蠶連續(xù)攻毒12 h后，立即添食含藥桑葉1餐，然后進行分區(qū)，50頭/區(qū)，分別按照每餐添食藥葉、每天添食藥葉1餐和2 d添食藥葉1餐的方式進行用藥比較，非用藥時間改用潔凈桑葉飼喂，飼養(yǎng)至熟蠶，給結(jié)繭、化蛾后，逐條進行鏡檢，調(diào)查感染率。試驗設(shè)攻毒后連續(xù)添食含藥桑葉的用藥對照、毒對照和空白對照。

1.4.7 家蠶微粒子病治療藥物藥害調(diào)查 依據(jù)蠶藥試驗技術(shù)指導(dǎo)原則[8]，以實用藥物濃度的1倍、3倍和5倍劑量進行生物試驗，調(diào)查藥物對生物體的毒害性。以阿苯噠唑濃度1.0 g/kg為實用藥物濃度，采取藥粉直接噴灑桑葉方式用藥，分區(qū)（400頭/區(qū)），分別以1.0 g/kg、3.0 g/kg和5.0 g/kg阿苯噠唑有效成分重量的藥粉噴灑到桑葉上再飼喂家蠶，每個處理設(shè)3區(qū)，以4齡起蠶開始飼喂含藥桑葉1餐（6 h），以后每天飼喂含藥桑葉1餐（6 h），其他時間飼喂?jié)崈羯Ｈ~，飼養(yǎng)至熟蠶、上蔟、結(jié)繭。試驗設(shè)對照組：利用正常桑葉飼喂家蠶。家蠶上蔟結(jié)繭7 d后，調(diào)查蟲蛹生命率、全繭量、繭層量、繭層率，待蠶蛹羽化出蛾后，使雌雄蛾交配，產(chǎn)卵，調(diào)查卵量和蠶卵孵化率。飼養(yǎng)期間每天記錄家蠶的生長情況，記錄死蠶或病蠶頭數(shù)、結(jié)繭數(shù)、化蛾數(shù)、死籠數(shù)等。

1.4.8 家蠶微粒子病治療藥物蠶種生產(chǎn)應(yīng)用調(diào)查經(jīng)篩選出的治療藥物在某蠶種場某批原種的6戶做應(yīng)用效果調(diào)查，按照藥葉1.0 g/kg的用量并采用蠶座噴灑方式用藥；4齡起蠶開始用藥，每天添食含藥桑葉1餐，其他時間改用正常桑葉飼喂，按照常規(guī)原種生產(chǎn)方式制種，送檢。分別調(diào)查各區(qū)的斤繭粒數(shù)、死籠率、繭層率和毒率。

2 試驗結(jié)果

2.1 家蠶微粒子病有效治療藥物篩選

以多菌靈、阿苯達唑、芬苯噠唑、左旋咪唑等4種藥物有效成分濃度為500 mg/L添食治療家蠶微粒子病，試驗結(jié)果如表1。

表1 各種化學(xué)藥物對家蠶微粒子病的治療效果

由表1可知，多菌靈和阿苯達唑?qū)倚Q微粒子病的治療效果分別為60%和94%；而芬苯噠唑和左旋咪唑?qū)倚Q微粒子病基本無治療效果。所以阿苯達唑是作為治療家蠶微粒子病的最佳選擇藥物。

2.2 家蠶微粒子病治療藥物使用方式比較

選擇阿苯達唑作為試驗對象，采取藥物溶液浸泡桑葉和藥粉直接噴灑桑葉的兩種方式進行治療家蠶微粒子病，試驗結(jié)果如表2。

由表2可知，阿苯達唑采取溶液浸泡桑葉和藥粉直接噴灑桑葉兩種方式用藥均對家蠶微粒子病具有很好的治療效果，治療效果均超過95%以上。

表2 阿苯達唑兩種使用方式對家蠶微粒子病的治療效果

2.3 家蠶微粒子病治療藥物有效使用濃度調(diào)查結(jié)果

掌握藥物使用濃度是達到有效治療和控制成本的關(guān)鍵，同時調(diào)查了阿苯達唑采取溶液浸泡和藥粉噴灑方式的不同使用濃度的治療效果，試驗結(jié)果如表3。

表3 阿苯達唑使用濃度治療家蠶微粒子病效果

由表3可知，采取溶液浸泡桑葉方式使用阿苯達唑治療家蠶微粒子病，使用濃度為500 mg/L以上即有很好的治療效果，為了保證治療效果，最好使用1 000 mg/L以上的藥物濃度；當(dāng)采取藥粉直接噴灑桑葉的方式時，以0.5 g/kg用藥量使用也可達到67.33%的治療效果，1.0 g/kg以上效果更佳。

2.4 家蠶微粒子病治療藥物有效治療時期調(diào)查結(jié)果

家蠶微孢子蟲孢子感染蠶體后，在蠶體內(nèi)形成“芽體→裂殖體→孢子母細胞→成熟孢子”的發(fā)育過程，而阿苯達唑的作用位點是孢子何種發(fā)育階段？在家蠶感染Nb后，分別于0 h、12 h、24 h、36 h、48 h和60 h利用阿苯達唑進行添食治療，試驗結(jié)果如表3。

由表4可知，家蠶感染Nb后，在12～36 h之間添食阿苯達唑具有較好的治療效果，該時期正是家蠶微孢子蟲孢子裂殖體發(fā)育階段。因此，阿苯達唑的作用位點是孢子的裂殖體；在孢子的芽體（0 h）、孢子母細胞（超過60 h）及成熟孢子階段利用阿苯達唑治療沒有效果。此結(jié)果也證明利用阿苯達唑治療家蠶微粒子病時只要在36 h內(nèi)能夠利用藥物就具有明顯的治療效果。

表4 阿苯達唑治療家蠶微粒子病有效時期

2.5 家蠶微粒子病治療藥物使用有效間隔時間調(diào)查

依據(jù)2.4試驗結(jié)果可知，應(yīng)用阿苯達唑治療家蠶微粒子病具有一個治療有效期（12～48 h），在該范圍內(nèi)應(yīng)用藥物即有治療效果，因此養(yǎng)蠶實際應(yīng)用中可以考慮間隔應(yīng)用藥物，開展生物試驗調(diào)查阿苯達唑使用有效間隔時間結(jié)果如表5。

由表5可知，飼養(yǎng)家蠶時應(yīng)用阿苯達唑治療家蠶微粒子病，每餐均添食藥物、每天添食藥物1餐和每2天添食藥物 1餐的治療效果分別為 96.67%、92.67%和72.00%，3種用藥方式均對家蠶微粒子病具有一定的治療效果，尤其是每天添食藥物1餐與每餐均添食藥物差異不顯著。因此，生產(chǎn)應(yīng)用可以考慮采取每天添食藥物1餐的方式應(yīng)用阿苯達唑治療家蠶微粒子病。

表5 阿苯達唑治療家蠶微粒子病有效間隔時間

2.6 家蠶微粒子病治療藥物藥害性

依據(jù)蠶藥技術(shù)指導(dǎo)原則，以阿苯噠唑濃度1.0 g/kg為實用藥物濃度，分區(qū)分別以1.0 g/kg、3.0 g/kg和5.0 g/kg阿苯噠唑藥粉噴灑到桑葉上再飼喂家蠶的方法調(diào)查阿苯噠唑?qū)倚Q的毒害性，試驗結(jié)果如表6。

由表6的試驗數(shù)據(jù)可知，利用桑葉含阿苯噠唑濃度為1.0 g/kg、3.0 g/kg和5.0 g/kg給家蠶添食，與對照組比較，家蠶的蟲蛹生命率、繭質(zhì)（全繭量、繭層量和繭層率）和卵質(zhì)（卵量和孵化率）數(shù)據(jù)沒有顯著差異，說明阿苯達唑粉劑對家蠶的毒害性低。

表6 阿苯噠唑藥物對家蠶藥害性調(diào)查

2.7 蠶種生產(chǎn)應(yīng)用家蠶微粒子病治療藥物效果

在原種生產(chǎn)中應(yīng)用阿苯達唑藥物，調(diào)查蠶種毒率控制情況，以及藥物應(yīng)用對家蠶各項性狀的影響。試驗共分6組，應(yīng)用于芙蓉、932、7532和湘暉4個桑蠶品種結(jié)果，如表7。

由表7可知，在桑蠶原種生產(chǎn)中應(yīng)用阿苯噠唑防治家蠶微粒子病，各組均有一定的治療效果，與非用藥區(qū)比較，用藥處理區(qū)毒率下降率最高達到73.91%，最低也達到27.69%，平均下降率達到38.64%，說明在蠶種生產(chǎn)中應(yīng)用阿苯噠唑防治家蠶微粒子病效果顯著，而且對家蠶各項性狀無影響。

表7 蠶種生產(chǎn)應(yīng)用阿苯達唑治療家蠶微粒子病效果調(diào)查

續(xù)表6

3 討論

家蠶微粒子病是一種危害性很大的蠶病，據(jù)統(tǒng)計全國每年通過檢疫超標淘汰蠶種超過100萬張。而有關(guān)文獻報道和本文試驗結(jié)果也證明家蠶微粒子病是一種可以利用藥物進行治療的蠶病[9]，如“防微靈”已經(jīng)多年在蠶種生產(chǎn)應(yīng)用于防治家蠶微粒子病，在一些蠶區(qū)還取得了很好的防控效果[10]，還有其他一些家蠶微粒子病治療藥物產(chǎn)品，如克微1號[3]、微毒靈[4]、原蟲凈[6]等，均有試驗證明對家蠶微粒子病具有很好的治療效果。但目前在蠶種生產(chǎn)中應(yīng)用這些家蠶微粒子病治療藥物的范圍比較小，而且還有逐步萎縮趨勢，究其原因可能存在以下幾方面問題。其一，有些藥物藥效低，輔劑與主劑配合性差，造成藥效不穩(wěn)定，如在同等使用濃度下，阿苯噠唑的治療效果比多菌靈好，而藥物的助溶劑也很關(guān)鍵，如吐溫—80對阿苯噠唑具有很好的助溶效果，但兩者組合，活力就基本消失，因此篩選藥效高、配合性好的藥物組合非常重要；其二，蠶業(yè)生產(chǎn)形勢變化，桑蠶業(yè)與其他行業(yè)的比較效益降低，從事農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的勞動力老齡化，普遍追求省力化方式養(yǎng)蠶，而家蠶微粒子病治療藥物主要使用方式是在桑葉上噴灑藥物溶液，以桑葉吸收的方式進行應(yīng)用，據(jù)長期在蠶種生產(chǎn)一線工作的同志說“現(xiàn)在讓農(nóng)民背著藥箱到桑園噴藥的方式已經(jīng)不可能實施了”，而目前桑蠶業(yè)多數(shù)分布在山地、丘陵地區(qū)，桑園零星分散，不適宜機械化用藥，另外采用藥物溶液浸泡桑葉的方式應(yīng)用藥物，很多蠶戶沒有專用場地和設(shè)備晾干桑葉，蠶兒食下過量的水分也影響蠶體健康，因此改進家蠶微粒子病治療藥物用藥方式迫在眉睫；其三，藥物使用濃度和時間上存在局限性，也是導(dǎo)致藥物實用上的不穩(wěn)定[11]，苯丙咪唑類藥物對家蠶微粒子病的作用機理基本是抑制孢子裂殖體增殖，在裂殖體階段能夠使用較高的藥物濃度作用才能全面抑制孢子增殖，如采用桑園桑葉噴灑藥物再飼喂家蠶方式，雖然能夠時刻使蠶兒食下藥物，但藥物在桑樹桑葉長期存在會逐漸分解，降低濃度，使很多情況下孢子感染后在裂殖體階段蠶體內(nèi)未有適合藥物濃度作用，造成治療效果不穩(wěn)定；另外，既然藥物對孢子作用位點只是裂殖體階段，藥物應(yīng)該可以間隔時間再使用，這樣既可以降低用藥成本，也達到治療效果。因此根據(jù)藥物作用機理分析，家蠶微粒子病治療藥物可以采取“少餐高濃度應(yīng)用，間隔時間用藥”的方式使用藥物。

本文針對上述家蠶微粒子病應(yīng)用問題，開展了一系列研究。篩選出一種對家蠶微粒子病具有高效治療的藥物——阿苯噠唑，還創(chuàng)新性建立了在蠶座上利用藥粉直接噴灑桑葉的有效應(yīng)用方法。另外，還探索出阿苯噠唑應(yīng)用于治療家蠶微粒子病實用濃度，即采取溶液浸泡桑葉方式時使用1 000 mg/L的藥物濃度，采取藥粉直接噴灑桑葉的方式時使用1.0 g/kg的用藥量；以及采取每天添食藥物1餐的方式應(yīng)用阿苯達唑治療家蠶微粒子病。試驗證明本試驗建立的家蠶微粒子病治療方式對對家蠶的毒害性低，在生產(chǎn)上應(yīng)用也初步取得一定效果。

致謝：本文在試驗過程中獲得廣西蠶業(yè)技術(shù)推廣總站蔣滿貴、莫云霞、陸俁伽、李安華、譚福洋、夏青、石美寧、唐亮、盧德、陶積陽、李燕飛、安春梅、胡文娟，河池市蠶種場黃康東、覃龍偉，環(huán)江縣蠶業(yè)站全誠，來賓市蠶種場陳家福、莫優(yōu)想等同志的幫助，在此表示感謝！

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S884.21；

A；

1006-1657-（2016）01-0006-6

2015-12-08；

2016-2-15

廣西科學(xué)研究與技術(shù)開發(fā)計劃項目（No.桂科重14121002-4-2）；廣西壯族自治區(qū)蠶業(yè)科學(xué)研究院青年基金項目（No.桂蠶科201306）。

信息］黃旭華（1979—），男，碩士研究生，高級農(nóng)藝師，主要從事蠶病防治研究工作。E-mail:hgisoi@163.com