HPLC法鑒別黃芪與紅芪中黃芪甲苷含量的研究

劉翠華　昌　暢

南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院藥材科，廣東　廣州　510515

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HPLC法鑒別黃芪與紅芪中黃芪甲苷含量的研究

劉翠華昌暢

南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院藥材科，廣東廣州510515

【摘要】目的：探討采用高效液相色譜法鑒別黃芪與紅芪中黃芪甲苷含量的價值。方法：根據(jù)高效液相色譜法，色譜柱(150 mm × 4.4mm，5μm)；流動相：乙腈-水(32∶68)；流速1 ml/min；柱溫：25℃。分別對黃芪與紅芪中的黃芪甲苷進行含量測定。結(jié)果：在2.024～10.120μg范圍內(nèi)，黃芪甲苷的線性關(guān)系良好。結(jié)論：該方法具有準確、穩(wěn)定、可重復(fù)的特點。黃芪中明顯含有黃芪甲苷，而紅芪中黃芪甲苷的含量十分微少，可提供此法鑒別黃芪與紅芪。

【關(guān)鍵詞】黃芪；紅芪；黃芪甲苷； 高效液相色譜法

黃芪是臨床常用的補益藥，其味甘，性溫，具有利尿排毒、斂瘡生肌、補氣固表的功效。研究發(fā)現(xiàn)，黃芪所含的皂苷具有提高免疫的功能，而皂苷中的主要有效成分為黃芪甲苷，并具有降壓、消炎鎮(zhèn)痛的活性。紅芪具有補氣升陽、固表止汗、斂瘡生肌的功效。與黃芪相比，紅芪的抗菌、降壓作用較強。研究采用效液相色譜法對黃芪與紅芪中黃芪甲苷進行鑒別，進而為黃芪、紅芪中藥制劑的質(zhì)量控制提供實驗依據(jù)。

1儀器與材料

1.1儀器Agilent 1260型高效液相色譜儀(蒸發(fā)光散射檢測器，美國安捷倫科技有限公司)；ABS135-S型分析天平(美國梅特勒-托利多公司)。

1.2材料黃芪甲苷對照品(中國藥品生物制品鑒定所)；紅芪(購自鄭州藥材市場)；黃芪(購自甘肅蘭州藥材市場)；高純氮氣(純度為99.999%，濟南堯天儀器有限公司)。甲醇、乙醇為色譜純；水為超純水；其余試劑均為分析純。

2方法

2.1色譜條件日本島津C18色譜柱(150mm × 4.4mm，5μm)；流動相：乙腈-水(32∶68)；流速1ml/min；柱溫：25℃。理論板數(shù)以黃芪甲苷峰計算不低于4000。見圖1。

圖1　黃芪甲苷標準液色譜圖

2.2供試品溶液的制備精密稱取黃芪/紅芪粉末4.0g，放入索氏提取器，加入甲醇40m1，冷浸后再加30 ml甲醇。然后80℃回流4個小時，過濾，濃縮干燥，提取物加l0 ml水輕微加熱進行溶解。用水飽和正丁醇進行萃取，每次40 ml，共4次。合并正丁醇液并洗滌，洗滌用氨試液進行，每次用40 ml，共洗滌2次，棄去氨液。蒸干正丁醇液后在殘渣中加入水5ml。使用50ml水洗脫后棄去水液，再用40%乙醇洗脫，乙醇用量為30m1，同樣去除乙醇洗脫液。隨后用70%乙醇80ml繼續(xù)進行洗脫，收集洗脫液，蒸干，甲醇溶解后放進5ml量瓶輕搖至均勻。

2.3對照品溶液制備精密稱取5.0mg對照品黃芪甲苷放入l0 ml量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻得對照品溶液。

2.4標準曲線與線性關(guān)系精密吸取對照品溶液4、8、12、16、20μl測定，以黃芪甲苷含量為橫坐標，峰面積均值為縱坐，得回歸方程：Y=1.294×10-6X+0.02812(R=0.9994)。表明黃芪甲苷在2.024～10.120μg范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

2.5穩(wěn)定性實驗取黃芪甲苷對照品溶液，分別在0、 3 、6、12、18、24h測定其峰面積。結(jié)果該溶液在24h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.6精密度實驗取黃芪甲苷對照品溶液20μl，平行5次進樣。結(jié)果峰面積的相對標準偏差為1.02%(n=5)，表明儀器的精密度較好。

2.7重復(fù)性實驗稱取黃芪藥材5.0g，平行5份。按照“2.2”的方法進行操作，并測定峰面積。結(jié)果樣品5次所得的黃芪甲苷含量一致，說明方法具有良好的重復(fù)性。

2.5回收率實驗稱取黃芪藥材5.0g，平行5份，每份加入黃芪甲苷3.0mg，按照“2.2”的方法操作。平均回收率為98.2%，RSD=0.87%。說明樣品的回收率較好。

2.6樣品測定取黃芪、紅芪中藥飲品，按照“2.2”方法操作，按照“2.1”的條件測定黃芪甲苷的含量。結(jié)果：黃芪、黃芪中均含有黃芪甲苷，與黃芪相比，紅芪中黃芪甲苷的含量微小。見圖2、圖3。

圖2　黃芪中藥飲品色譜圖

圖3　紅芪中藥飲品色譜圖

3討論

黃芪是一種常用的補氣藥，含有皂苷類、黃酮類、多糖類、氨基酸類等多種化學(xué)成分。黃芪甲苷是黃芪的主要活性成分，具有抗氧化、降壓、消腫止痛、提高免疫功效等活性，目前作為監(jiān)控黃芪藥材質(zhì)量的指標之一。薄層掃描法、高效液相色譜法均為測定黃芪甲苷含量的常用方法，但薄層掃描法的操作不便，測定結(jié)果的偏差較大，且紫外線檢測器的靈敏度較低，受雜質(zhì)的干擾較大、信噪比較低，回收率不穩(wěn)定。研究采用高效液相色譜法對黃芪與紅芪中的黃芪甲苷成分進行了檢測，該方法具有較高的靈敏度，簡單而準確，無干擾，重復(fù)性較高，適用于黃芪甲苷的含量測定。此外，研究發(fā)現(xiàn)，黃芪、黃芪中均含有黃芪甲苷，但與黃芪相比，紅芪中黃芪甲苷的含量微小，這一特點可作為區(qū)分紅芪和黃芪飲品的判斷指標。

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【中圖分類號】R284.1

【文獻標志碼】A

【文章編號】1007-8517(2016)09-0024-02

(收稿日期：2016.03.04)