兒童腎小球疾病尿蛋白組分與其病理類型相關(guān)性分析

劉鈞菲，王　華

(1.河南省鄭州市兒童醫(yī)院腎臟風(fēng)濕科　450000；2.鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院兒內(nèi)科，鄭州 450000)

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兒童腎小球疾病尿蛋白組分與其病理類型相關(guān)性分析

劉鈞菲1，王華2

(1.河南省鄭州市兒童醫(yī)院腎臟風(fēng)濕科450000；2.鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院兒內(nèi)科，鄭州 450000)

[摘要]目的探討兒童不同病理類型腎小球疾病尿蛋白組分的差異及其對(duì)疾病診治的意義。方法2010年11月至2012年7月鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院兒內(nèi)科收治行腎穿刺活檢明確病理類型的腎小球疾病患兒共120例，其中急性腎小球腎炎(AGN)6例，微小病變型腎病(MCD)35例，局灶性階段性腎小球硬化(FSGS)9例，過(guò)敏性紫癜性腎炎(HSPN)44例,IgA腎病(IgAN)17例，溶血尿毒綜合征(HUS)9例，全部病例同步行尿蛋白電泳檢測(cè)，85例同步行尿β2微球蛋白(β2-MG)檢測(cè)。結(jié)果不同病理類型之間比較β2-MG、溶菌酶、視黃醇結(jié)合蛋白、游離輕鏈、α1微球蛋白、輕鏈二聚體、清蛋白和轉(zhuǎn)鐵蛋白所占比例差異顯著(P=0.016、P=0.017、P=0.017、P=0.023、P=0.004、P=0.025、P=0.049、P<0.01)，小分子蛋白所占比例和尿β2-MG之間相關(guān)性良好(r=0.243 P=0.025)。結(jié)論尿蛋白電泳和腎組織病理相結(jié)合對(duì)腎小球疾病的診治有重要的意義，不同的病理類型有不同的尿蛋白質(zhì)圖譜,尿蛋白質(zhì)圖譜的差異對(duì)腎小球疾病發(fā)病機(jī)制的意義有待進(jìn)一步研究。

[關(guān)鍵詞]兒童；腎小球疾?。荒I組織病理；尿蛋白電泳

兒童時(shí)期常見(jiàn)的腎小球疾病有急性腎小球腎炎(AGN)、腎病綜合征(NS)、過(guò)敏性紫癜性腎炎(HSPN)、IgA腎病(IgAN)和溶血尿毒綜合征(HUS)，其中NS中常見(jiàn)的有微小病變型腎病(MCD)和局灶性節(jié)段性腎小球硬化(FSGS)。腎小球疾病的發(fā)病原因和機(jī)制不甚明確[1]，目前確診依靠腎穿刺活檢，治療上主要是對(duì)癥和經(jīng)驗(yàn)治療。腎穿刺活檢為有創(chuàng)性檢查，且在危重患兒受到一定的限制，復(fù)查腎組織病理同樣受到一定的限制。尿蛋白是腎小球疾病的最常見(jiàn)臨床表現(xiàn)，尿蛋白的組分研究目前臨床上主要依靠尿蛋白電泳[2-3]，但患兒不同腎小球疾病的尿蛋白組分差異研究較少。尿蛋白組分的差異是否與腎組織病理存在一定的相關(guān)性，是否不同的病理類型有特定的尿蛋白質(zhì)圖譜，有待進(jìn)一步研究。本文結(jié)合不同病理類型尿蛋白電泳資料分析如下。

1資料與方法

1.1一般資料2010年11月至2012年7月鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院兒內(nèi)科收治行腎穿刺活檢明確病理類型的腎小球疾病患兒共120 例,其中男82例，年齡1.3～14.0歲，平均(7.76±3.36)歲；女38例，年齡1～17歲，平均(7.57±3.86)歲。其中AGN 6例，MCD 35例，F(xiàn)SGS 9例，HSPN 44例,IgAN 17例，HUS 9例。全部病例同步行尿蛋白電泳檢測(cè)，85例同步行尿β2微球蛋白(β2-MG)檢測(cè)。研究對(duì)象均為初治患兒，入院前2周無(wú)應(yīng)用激素及免疫抑制劑史，所有病例均經(jīng)病理確診。檢查及留取標(biāo)本前均取得家長(zhǎng)及醫(yī)院倫理委員會(huì)的同意。

1.2方法

1.2.1標(biāo)本的收集與保存所有研究對(duì)象用尿杯留取清晨第1次尿，置于潔凈塑料試管內(nèi)待測(cè)。B超定位下腎穿刺活檢,每例腎穿刺活檢組織取出后分成3份，分別在中性甲醛、戊二醛液中固定及低溫保存送檢。

1.2.2主要試劑和儀器(1)主要試劑:β2-MG生化比濁檢測(cè)試劑盒由西班牙Biosystems S.A.公司生產(chǎn)，法國(guó)SEBIA公司HYDRASYS全自動(dòng)電泳儀配套試劑盒。(2)主要儀器：日本日立公司生產(chǎn)的7600-020全自動(dòng)生化分析儀，法國(guó)SEBIA公司HYDRASYS全自動(dòng)電泳儀。

1.2.3檢測(cè)方法全自動(dòng)生化比濁法測(cè)定尿β2-MG，全自動(dòng)電泳儀測(cè)定尿蛋白組分。腎活檢病理檢查:腎活檢組織行石蠟包埋,切片厚度為1 μm,分別行HE、過(guò)碘酸雪夫反應(yīng)(PAS)、六胺銀(PASM)、MASSON染色。腎組織冷凍切片以辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的兔抗人IgG、A、M、C3、4和C1q進(jìn)行免疫熒光染色。

表1　不同病理類型之間尿蛋白組分比較M(25th-75th)

NS：無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS17.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。計(jì)量資料呈非正態(tài)分布，用M(25th-75th)表示，采用Kruskal-Wallis檢驗(yàn)進(jìn)行多個(gè)樣本間的比較。兩個(gè)變量間的相關(guān)關(guān)系分析，服從雙變量正態(tài)分布，采用Pearson 直線相關(guān)分析，檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)α=0.05，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1不同病理類型的特點(diǎn)6例AGN患者光鏡均表現(xiàn)為彌漫性毛細(xì)血管內(nèi)增生性腎小球腎炎，其中1例腎小管輕度損傷，免疫熒光均有免疫復(fù)合物沉積，IgG沉積6例，C3沉積6例，IgM沉積2例，IgA沉積1例，免疫復(fù)合物主要沿腎小球毛細(xì)血管袢及系膜區(qū)呈顆粒狀沉積。35例MCD患者光鏡示腎小球基本正常，4例系膜區(qū)系膜基質(zhì)輕度增多，3例腎小管上皮細(xì)胞發(fā)生玻璃樣變性及脂肪變性，免疫熒光有1例IgM沉積，電鏡下均為足突融合，無(wú)電子致密物沉積。9例FSGS患者光鏡表現(xiàn)為病變腎小球呈局灶節(jié)段性分布，毛細(xì)血管袢硬化、球囊粘連、基底膜斷裂甚至消失，4例病變發(fā)生于血管極附近，1例發(fā)生于腎小球尿極，2例腎小管有不同程度的萎縮、壞死，免疫熒光有2例IgM沉積及C3沉積，電鏡下可見(jiàn)足細(xì)胞足突融合，重者可見(jiàn)足細(xì)胞與基膜分離。44例HSPN患者中Ⅱa型11例，Ⅲa型28例，Ⅲb型4例，Ⅳa型1例，腎小管輕度損傷3例。17例IgAN患者光鏡示4例毛細(xì)血管內(nèi)增生性IgAN，12例局灶增生性IgAN，1例輕度系膜增生性IgAN，3例腎小管輕度損傷。9例HUS患者光鏡下為微血管病變，可見(jiàn)內(nèi)皮細(xì)胞腫脹、脫落、內(nèi)皮細(xì)胞下間隙增寬，血管腔內(nèi)纖維素性血栓填塞，熒光下可見(jiàn)IgG、IgM及補(bǔ)體在血管壁沉積，2例腎小管損傷嚴(yán)重。

2.2各組指標(biāo)的比較不同病理類型之間比較β2-MG、溶菌酶、視黃醇結(jié)合蛋白(RBP)、游離輕鏈(free LC)、α1微球蛋白(α1-MG)、輕鏈二聚體(dimmer LC)、清蛋白(ALB)和轉(zhuǎn)鐵蛋白(TRF)所占比例差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.016、P=0.017、P=0.017、P=0.023、P=0.004、P=0.025、P=0.049、P<0.01)，見(jiàn)表1。

2.3各個(gè)指標(biāo)的相關(guān)關(guān)系小分子蛋白所占比例和尿β2-MG之間相關(guān)性良好(r=0.243,P=0.025)，其中小分子蛋白指相對(duì)分子質(zhì)量小于清蛋白的蛋白組分百分比的和。

3討論

腎小球疾病是指疾病起始于腎小球或主要病變位于腎小球的一組疾患，目前認(rèn)為其主要為免疫介導(dǎo)性疾病[1,4-5]。尿蛋白是腎小球疾病主要的臨床表現(xiàn)，尿蛋白的發(fā)生主要與腎小球?yàn)V過(guò)和腎小管的重吸收有關(guān)。正常情況下，腎小球基底膜可阻止高分子蛋白(指分子量大于15萬(wàn)，如IgM、α2-糖蛋白)通過(guò)，上皮細(xì)胞裂孔膜[6-7]可阻止中分子蛋白(分子量在5萬(wàn)～15萬(wàn)，如ALB、TRF)通過(guò)，對(duì)低分子蛋白二者均無(wú)屏障作用。漏出的低分子蛋白常由腎小管重吸收或分解，健康兒童由腎小球?yàn)V過(guò)的蛋白質(zhì)99%在近曲小管遠(yuǎn)端被重吸收。當(dāng)腎小球?yàn)V過(guò)功能和腎小管的再吸收功能障礙時(shí)，便可產(chǎn)生尿蛋白。

本文結(jié)果提示，不同病理類型之間尿蛋白組分所占比例不同，尿蛋白的組分反映了腎小球或腎小管損傷的部位及程度，不同的病理類型免疫物質(zhì)或補(bǔ)體的沉積部位不同，導(dǎo)致了尿蛋白的組分不同。

本研究6例AGN病理主要損傷部位在腎小球，為滲出性病變，可見(jiàn)內(nèi)皮細(xì)胞和系膜細(xì)胞增殖及炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，未見(jiàn)硬化壞死病變，基底膜受到不同程度的損害，其中1例腎小管輕度損傷；35例MCD光鏡及免疫熒光未見(jiàn)嚴(yán)重病變，3例腎小管上皮細(xì)胞發(fā)生玻璃樣變性及脂肪變性，未見(jiàn)腎小管萎縮、壞死等病變，電鏡下均為足突融合，無(wú)電子致密物沉積，提示基底膜、裂孔膜及腎小管輕度損傷，與本次研究結(jié)果AGN及MCD尿蛋白電泳集中于ALB及TRB段(85.9%、92.3%)，并可見(jiàn)少量小分子蛋白相符合。9例FSGS光鏡表現(xiàn)為病變腎小球呈局灶節(jié)段性分布，毛細(xì)血管袢硬化、球囊粘連、基底膜斷裂甚至消失，2例腎小管有不同程度的萎縮、壞死，電鏡下可見(jiàn)足細(xì)胞足突融合，重者可見(jiàn)足細(xì)胞與基膜分離，提示基底膜、裂孔膜及腎小管損傷較重，與本次研究結(jié)果FSGS尿蛋白電泳小分子和大分子比例均較高相符合。

HSPN 與IgAN[8]病理類型輕重不一，本次研究收集的主要病例24 h尿蛋白定量位于中下等，光鏡下44例HSPN≤Ⅲa型39例，腎小管輕度損傷3例；17例IgAN中輕度系膜增生性及局灶增生性占13例，3例腎小管輕度損傷，提示基底膜、裂孔膜及腎小管損害較輕，與本次研究結(jié)果尿蛋白電泳集中于ALB及TRB段(94.25%、80.6%)，并可見(jiàn)少量小分子蛋白相符合。

HUS為血栓性血管炎疾病，腎臟為主要受累器官。光鏡下為微血管病變，可見(jiàn)內(nèi)皮細(xì)胞腫脹、脫落、內(nèi)皮細(xì)胞下間隙增寬，血管腔內(nèi)纖維素性血栓填塞，熒光下可見(jiàn)IgG、IgM及補(bǔ)體在血管壁沉積，提示基底膜損傷較重，9例中有2例腎小管損害嚴(yán)重，與本次研究結(jié)果提示尿蛋白電泳小分子和大分子比例均較高相符合。

尿蛋白電泳中小分子所占比例與傳統(tǒng)的反應(yīng)腎小管損傷的尿β2-MG存在良好的相關(guān)性，提示小分子反應(yīng)腎小管的損傷與理論研究相符合。

3例MCD伴有急性腎小管的損傷，2例尿蛋白電泳出現(xiàn)小分子組分，1例未出現(xiàn)，可能與腎小管損傷程度有關(guān)。5例尿蛋白電泳出現(xiàn)小分子組分，而腎組織病理未提示腎小管損傷，可能與腎穿刺活檢的局限性有關(guān)。

尿蛋白電泳為一無(wú)創(chuàng)的檢測(cè)方法，且復(fù)查較方便，其對(duì)腎臟損傷部位的意義報(bào)道較多。本文結(jié)果提示不同的病理類型有不同的尿蛋白質(zhì)圖譜，尿蛋白電泳和腎組織病理相結(jié)合對(duì)疾病的診治有重要的意義。尿蛋白質(zhì)組學(xué)在腎小球疾病中的應(yīng)用是目前不成熟的一門(mén)新的學(xué)科，推測(cè)其對(duì)疾病的診斷、治療及其發(fā)病機(jī)制的意義重大[9-15]。那么，需要建立更多的健康人和患者的尿蛋白質(zhì)圖譜，將對(duì)腎小球疾病的發(fā)病機(jī)制做出巨大的貢獻(xiàn)。

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The correlation analysis of urinary protein electrophoresis and pathologic in children with glomerular diseases

Liu Junfei1,Wang Hua2

(1.Department of Kidney Rheumatism,Children′s Hospital of Zhengzhou,Zhengzhou,Henan 450000,China;2.Department of Pediatrics,the First Affiliated Hospital of Zhengzhou University,Zhengzhou,Henan 450000,China)

[Abstract]ObjectiveTo understand the significance of urinary protein components in children with different pathological types of glomerular diseases,to explore the significance to diagnosis and treatment of disease.MethodsTotally 120 children with glomerular diseases,from November 2010 to July 2012 in the First Affiliated Hospital of Zhengzhou University were collected,in which 6 children with acute glomerulo nephritis(AGN),35 children with minimal change disease(MCD),9 children with focal segmental glomerulosclerosis(FSGS),44 children with Nephritis of Schonlein-Henoch Purpura(HSPN),17 children with IgA nephropathy(IgAN) and 9 children with hemolytic uremic syndrome(HUS).Urine protein electrophoresis and urine β2-microglobulin(β2-MG)levels were investigated in different glomerular diseases.ResultsSignificant difference was detected in β2-microglobulin,lysozyme,retinol-binding protein,free light chain,α1-microglobulin,light chain dimmer,albumin and transferring levels in different glomerular diseases(P=0.016,P=0.017,P=0.017,P=0.023,P=0.004,P=0.025,P=0.049,P<0.01).A significant correlation was detected between low molecular weight protein and urine β2-microglobulin levels(r=0.243,P=0.025).ConclusionIt is significant for diagnosis and treatment of glomerular diseases to the combination of urine protein electrophoresis and renal pathology.Urinary protein profiles are different in different pathological types.Proteomics may be significant for the mechanism of glomerular diseases.

[Key words]child;glomerular disease;renal pathology;urine protein electrophoresis

doi:論著·臨床研究10.3969/j.issn.1671-8348.2016.11.026

作者簡(jiǎn)介：劉鈞菲(1986-)，醫(yī)師，碩士，主要從事兒科腎病研究。

[中圖分類號(hào)]R725

[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A

[文章編號(hào)]1671-8348(2016)11-1528-03

(收稿日期：2015-10-23修回日期：2016-01-04)