MACC1與C-met在食管癌組織中的表達(dá)及其臨床意義

楊紹廣

(天津市西青醫(yī)院 消化內(nèi)科，天津300383)

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MACC1與C-met在食管癌組織中的表達(dá)及其臨床意義

楊紹廣

(天津市西青醫(yī)院 消化內(nèi)科，天津300383)

我國(guó)食管癌的發(fā)病率和死亡率分別占全球食管癌發(fā)病和死亡人數(shù)的53.86%和49.26%[1]，早期診斷、治療對(duì)于延長(zhǎng)患者的生存期、提高生活質(zhì)量有著重要的意義。腸癌轉(zhuǎn)移相關(guān)基因1(Metastasis-associated in colon cancer 1，MACCl)是近年發(fā)現(xiàn)的與結(jié)腸癌浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)的基因，在結(jié)腸癌組織中表達(dá)明顯的升高[2]。研究表明，MACCl與結(jié)腸癌、卵巢癌以及肺腺癌等多種腫瘤的生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移以及復(fù)發(fā)的關(guān)系較為密切[3，4]。MACCl是肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子/肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體(HGF/C-met)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的調(diào)節(jié)因子，能夠獨(dú)立預(yù)測(cè)結(jié)腸癌形成、轉(zhuǎn)移。本研究檢測(cè)了食管癌組織及癌旁組織中C-met與MACC1的表達(dá)，并探討其表達(dá)的臨床意義，現(xiàn)報(bào)告如下。

1資料與方法

1.1一般資料選擇2013年6月至2015年5月我院病理科保存的診斷為食管癌的病理切片86例，另取癌旁組織(距離食管癌5 cm以上)的切除標(biāo)本86例?；颊咝g(shù)前均未接受過(guò)化療、放療以及內(nèi)分泌治療。其中男52例，女34例；年齡38-77歲，平均(48.6±7.3)歲；根據(jù)美國(guó)癌癥聯(lián)合會(huì)(AJCC)2009分段標(biāo)準(zhǔn)：胸上段18例，胸中段42例，胸下段26例；臨床病理分期按照食管癌國(guó)際TNM分期標(biāo)準(zhǔn)：Ⅰ期17例，Ⅱ期28例，Ⅲ期31例，Ⅳ期10例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移46例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移40例。

1.2主要試劑MACCl兔抗人多克隆抗體IgG由美國(guó)Sigma公司(稀釋濃度1∶300)生產(chǎn)，C-met兔抗人多克隆抗體IgG由北京博奧森生物技術(shù)有限公司(稀釋濃度1∶200)生產(chǎn)，兔超敏二步法免疫組織化學(xué)檢測(cè)試劑盒以及DAB顯色試劑盒均由北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)。

1.3方法使用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)：將組織進(jìn)行切片(4 μm)，65℃烘烤照30 min后，二甲苯脫蠟，梯度酒精水化。將組織切片置于pH6.0的檸檬酸鈉緩沖液中，微波抗原修復(fù)20 min，室溫下置于3%的過(guò)氧化氫甲醇溶液中滅活15 min。使用0.01 m/ml pH7.4的PBS緩沖液沖洗5 min，3次。干燥后，滴加兔抗人MACC1多克隆抗體以及兔抗人C-met多克隆抗體，4℃過(guò)夜。PBS沖洗3次，加入生物素化二抗工作液，室溫30 min。干燥后，加入DAB顯色劑，室溫5 min后終止顯色。Mayer氏蘇木精復(fù)染2 min，梯度乙醇脫水、樹(shù)脂封片。

1.4結(jié)果判斷陽(yáng)性對(duì)照用已知MACCl、C-met陽(yáng)性表達(dá)的結(jié)腸癌組織切片；陰性空白對(duì)照用PBS緩沖液代替一抗。對(duì)MACC1、C-met的表達(dá)水平進(jìn)行半定量的評(píng)估。顯微鏡下計(jì)算陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞所占的百分?jǐn)?shù)，并對(duì)染色的細(xì)胞進(jìn)行染色程度的得分評(píng)判。陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<5%時(shí)為陰性(-)；5%-25%為(+)；26%-50%為(++)；51%-75%為(+++)；超過(guò)75%為(++++)，分別記作0-4分。根據(jù)熒光的強(qiáng)度分為陰性(0分)，弱(1分)，中等(2分)以及強(qiáng)烈(3分)。

1.5觀察指標(biāo)測(cè)定組織中MACC1與C-met的表達(dá)水平，并分析其與食管癌病理特征的關(guān)系。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法使用SPSS17.0軟件系統(tǒng)分析所有的數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)；相關(guān)性分析采用Spearman秩相關(guān)檢驗(yàn)。若P<0.05則判斷差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1觀察組及對(duì)照組陽(yáng)性率食管癌組織標(biāo)本中MACCl、C-met表達(dá)的陽(yáng)性率均顯著高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

2.2MACCl、C-met表達(dá)與食管癌臨床病理特征的關(guān)系MACCl表達(dá)與性別、年齡、腫瘤部位均無(wú)關(guān)(P>0.05)；與分化程度、浸潤(rùn)深度、TNM分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)。C-met表達(dá)與性別、年齡、腫瘤部位和浸潤(rùn)深度均無(wú)關(guān)(P>0.05)；與分化程度、TNM分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表1　兩組MACCl、C-met陽(yáng)性率比較(n/%)

注：與對(duì)照組比較，aP<0.05。

表2　MACCl、C-met表達(dá)與食管癌臨床病理特征的關(guān)系

2.3食管癌組織中MACCl、C-met表達(dá)的相關(guān)性

Spearman相關(guān)分析結(jié)果表明，食管癌組織中MACCl、C-met表達(dá)呈正相關(guān)相關(guān)(r=0.356，P=0.001)。見(jiàn)表3。

表3　食管癌組織中MACCl、C-met表達(dá)的相關(guān)性

3討論

由于食管癌早期的臨床癥狀不典型，就診時(shí)往往以處于中晚期，5年存活率僅為10%-20%。因此，尋找與其診斷、預(yù)后相關(guān)的特異分子指標(biāo)，對(duì)于提高食管癌患者的生存率十分重要。

MACC1是2009年由Stein等發(fā)現(xiàn)并命名，其與結(jié)腸癌的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，定位于人染色體7p21.1，含有7個(gè)外顯子、6個(gè)內(nèi)含子，MACC1蛋白的功能結(jié)構(gòu)域與細(xì)胞的信號(hào)傳導(dǎo)和凋亡有關(guān)，同時(shí)，還能結(jié)合MET啟動(dòng)子，激活HGF/MET信號(hào)傳導(dǎo)通路，使得C-met的表達(dá)明顯的提高[5，6]。研究表明，在胃癌、卵巢癌、肝癌、腦膠質(zhì)瘤以及肺癌中，MACCl的表達(dá)均異常增高，且與腫瘤的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移有密切的關(guān)系。C-met蛋白是一種跨膜蛋白，具有酪氨酸激酶活性，由原癌基因C-met編碼表達(dá)，被認(rèn)為是肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(hepatocyte growth factor,HGF)的唯一受體[7]。HGF廣泛分布于人體組織中，在傷口愈合、胚胎發(fā)育以及形態(tài)變化中均有著十分重要的作用。當(dāng)配體HGF較好C-met受體后，激活細(xì)胞外β亞基的相應(yīng)位點(diǎn)，信號(hào)傳導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi)，激活酪氨酸激酶(PTK)，使得C-met受體自身酪氨酸殘基(Tyr)磷酸化，多種信號(hào)通路被啟動(dòng)，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲與遷移[8，9]。

本研究結(jié)果表明，食管癌組織標(biāo)本中MACCl、C-met表達(dá)的陽(yáng)性率顯著高于癌旁組織標(biāo)本(P<0.05)；MACCl表達(dá)與分化程度、浸潤(rùn)深度、TNM分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)(P<0.05)；C-met表達(dá)與與分化程度、TNM分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)。Guo[10]等采用免疫組化法檢測(cè)了98例胃癌及癌旁組織中MACC1和C-met蛋白的表達(dá)，結(jié)果顯示，在原發(fā)腫瘤中MACC1和C-met蛋白的陽(yáng)性率分別為61.22%和59.18%，與癌旁組織相比，均具有顯著性差異(P<0.05)；MACC1和C-met的表達(dá)密切相關(guān)(P<0.05)；MACC1蛋白在胃癌組織中的表達(dá)與腹膜轉(zhuǎn)移、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及肝轉(zhuǎn)移的存在均有密切的關(guān)系(P<0.05)，而與性別、年齡、腫瘤大小及部位、臨床階段或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)(P>0.05)。張瑞濤[11]等研究結(jié)果顯示，在卵巢上皮性癌中，MACC1、HGF和C-met蛋白的表達(dá)異常升高，與臨床分期、組織分化以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P<0.05)；MACC1蛋白的表達(dá)與HGF和C-met蛋白的表達(dá)呈正相關(guān)，HGF蛋白與C-met蛋白表達(dá)呈正相關(guān)(P<0.05)。MACC1蛋白主要通過(guò)作用于C-met啟動(dòng)序列的Sp1位點(diǎn)，使得C-met的表達(dá)上調(diào)，增強(qiáng)HGF/C-met信號(hào)途徑的級(jí)聯(lián)放大作用[12，13]。

綜上所述，MACCl、C-met與食管癌的病理過(guò)程有著十分密切的關(guān)系，可以通過(guò)聯(lián)合檢測(cè)MACCl和C-met的表達(dá)作為食管癌的早期診斷、惡性程度評(píng)估及預(yù)后的臨床指導(dǎo)。

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文章編號(hào)：1007-4287(2016)05-0791-03

(收稿日期：2015-09-11)