高效液相色譜法同時測定復方黃連素片中芍藥苷和鹽酸小檗堿含量

李　靜，錢　江

（1.江蘇省揚州市食品藥品檢驗檢測中心，江蘇揚州　225009；2.揚州大學醫(yī)學院，江蘇揚州　225001）

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高效液相色譜法同時測定復方黃連素片中芍藥苷和鹽酸小檗堿含量

李靜1，錢江2

（1.江蘇省揚州市食品藥品檢驗檢測中心，江蘇揚州225009；2.揚州大學醫(yī)學院，江蘇揚州225001）

摘要：目的建立同時測定復方黃連素片中芍藥苷和鹽酸小檗堿含量的高效液相色譜法。方法色譜柱為Phenomenex Luna C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動相為0.4%磷酸溶液-乙腈（梯度洗脫），流速為1.0 mL/min，檢測波長為230 nm，柱溫為35℃，進樣量為10 μL。結果芍藥苷和鹽酸小檗堿的進樣質量濃度分別在1.496 1～187.016 0 μg/mL（r=0.999 9）和1.788 1～223.512 6 μg/mL （r=0.999 9）范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關系，平均回收率分別為100.58%（RSD=1.29%，n=6）和101.58%（RSD=1.76%，n=6）。結論該法簡便準確，可用于同時測定復方黃連素片中芍藥苷和鹽酸小檗堿的含量。

關鍵詞：高效液相色譜法；復方黃連素片；芍藥苷；鹽酸小檗堿

復方黃連素片由鹽酸小檗堿、木香、吳茱萸和白芍組方，具有清熱燥濕、行氣止痛、止痢止瀉的功效，收載于2015年版《中國藥典（一部）》［1］。筆者根據(jù)文獻［2-4］，簡化原標準中的實驗操作，并采用高效液相色譜法同時測定該制劑中芍藥苷和鹽酸小檗堿的含量，現(xiàn)報道如下。

1　儀器與試藥

1.1儀器

LC-20AB型高效液相色譜儀（日本島津公司）；XS205DU型電子分析天平（瑞士梅特勒公司）。

1.2試藥

芍藥苷對照品（批號為110736-201438，含量為96.4%），鹽酸小檗堿對照品（批號為110713-201212，含量為86.7%），使用前均不需干燥處理，均購自中國食品藥品檢定研究院，供含量測定用；復方黃連素片（市售品，批號分別為1402004，1409015，140501）；乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純。

2　方法與結果

2.1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱：Phenomenex Luna C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：以0.4%磷酸溶液為流動相A，以乙腈為流動相B，梯度洗脫（見表1）；進樣量：10 μL；柱溫：35℃；檢測波長：230 nm；流速：1.0 mL/min。在此條件下，色譜圖見圖1。

表1　流動相梯度洗脫程序表

2.2溶液制備

稱取芍藥苷、鹽酸小檗堿對照品適量，精密稱定，置同一50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，得混和對照品貯備液（含芍藥苷187.016 0 μg/mL和鹽酸小檗堿223.512 6 μg/mL）。取本品10片，除去糖衣，研細，取0.1 g，精密稱定，置100 mL容量瓶中，加甲醇適量，超聲處理30 min，放冷至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即為供試品溶液。按處方工藝制備不含芍藥苷、鹽酸小檗堿的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制得陰性對照品溶液。

2.3方法學考察

線性關系考察：精密量取混合對照品貯備液各2 mL，分別置250，200，100，50，25，10，5 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成不同質量濃度的混合對照品溶液。取混合對照品貯備液和上述不同質量濃度的混合對照品溶液依法測定。以峰面積（Y）為縱坐標、質量濃度（X，μg/mL）為橫坐標進行線性回歸，得芍藥苷的回歸方程為Y=6 394.2 X + 109.35，r=0.999 9（n=8）；鹽酸小檗堿為Y=47 212 X-32 442，r=0.999 9（n=8）。結果表明，芍藥苷和鹽酸小檗堿質量濃度分別在1.496 1～187.016 0 μg/mL和1.788 1～223.512 6 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關系。

圖1　高效液相色譜圖

精密度試驗：精密吸取同一混合對照品溶液，連續(xù)進樣5次，測定峰面積。結果芍藥苷和鹽酸小檗堿峰面積的RSD分別為1.26%和0.17%（n=5），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗：取同一供試品溶液（批號為1402004），分別于制備0，2，4，6，8 h后進樣，測定峰面積。結果芍藥苷和鹽酸小檗堿峰面積的RSD分別為1.19%和0.33%（n=5），表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復性試驗：取同一批樣品（批號為1402004），依法平行制備6份供試品溶液，進樣測定含量。結果芍藥苷和鹽酸小檗堿含量的RSD分別為1.44%和0.99% （n=6），表明方法重復性良好。

加樣回收試驗：精密稱取芍藥苷對照品12.15 mg，置100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為芍藥苷對照品溶液。精密稱取鹽酸小檗堿對照品60.40 mg，置10 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為鹽酸小檗堿對照品溶液。取已知含量的樣品（批號為1402004）6份，每份約0.05 g，精密稱定，置100 mL容量瓶中，分別精密加入芍藥苷和鹽酸小檗堿加樣對照品溶液0.8，1.0，1.2 mL，平行2份，依法測定，計算回收率。結果見表2。

表2　加樣回收試驗結果（n=6）

2.4樣品含量測定

取3批樣品，按2.2項下方法制備供試品溶液，依法測定，計算樣品中芍藥苷和鹽酸小檗堿的含量。結果見表3。

表3　3批樣品每片含量測定結果

3　討論

2015年版《中國藥典（一部）》采用高效液相色譜法分別測定芍藥苷和鹽酸小檗堿的含量，溶液制備過程較煩瑣，尤其是鹽酸小檗堿的測定方法，增加了對結果的影響因素［1］。參考文獻［2-4］，對對照品和樣品制備過程進行改進，直接采用甲醇超聲處理，操作簡便、快速，結果重復性好。

由二極管陣列檢測器獲得的芍藥苷和鹽酸小檗堿紫外吸收光譜可知，芍藥苷峰于230 nm波長處有最大吸收，鹽酸小檗堿于231，265，351 nm波長處有最大吸收。綜合考慮，兩種物質于230 nm波長處均有較高吸收，且干擾峰較少，峰形良好，故選擇230 nm作為檢測波長。

綜上所述，采用高效液相色譜法同時測定復方黃連素片中芍藥苷和鹽酸小檗堿的含量，方法簡便、準確，可用于對復方黃連素片的質量控制。

參考文獻：

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）［M］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：1 243.

［3］李茂森.復方黃連素片中鹽酸小檗堿含量測定方法改進［J］.中國藥業(yè)，2013，22（14）：68-69.

［4］張采瓊，王秀萍，宋雨.HPLC法測定清熱寧腎膠囊中鹽酸小檗堿的含量［J］.成都大學學報：自然科學版，2014，33（2）：118-120.

Content Determination of Paeoniflorin and Berberine Hydrochloride in Compound Huangliansu Tablets by HPLC

Li Jing1，Qian Jiang2
（1.Yangzhou Municipal Food and Drug Inspecting and Testing Center，Yangzhou，Jiangsu，China 225009；2.Yangzhou University Medical Academy，Yangzhou，Jiangsu，China 225001）

Abstract：Objective To establish an HPLC method for the content determination of paeoniflorin and berberine hydrochloride in Compound Huangliansu Tablets.Methods The chromatographic column was Phenomenex Luna C18column（250 mm×4.6 mm，5 μm）；the mobile phase was composed of 0.4%phosphoric acid-acetonitrile；the flow rate was 1.0 mL/min；the detection wavelength was 230 nm；the column temperature was 35℃and the injection volume was 10 μL.Results The linear ranges of paeoniflorin and berberine hydrochloride were 1.496 1-187.016 0 μg/mL（r=0.999 9）and 1.788 1-223.512 6 μg/mL（r=0.999 9）respectively，and their average recovery rates were 100.58%（RSD=1.29%，n=6）and 101.58%（RSD was 1.76%，n=6）respectively.Conclusion The method is simple，accurate and suitable for determining the contents of paeoniflorin and berberine hydrochloride in Compound Huangliansu Tablets.

Key words：HPLC；Compound Huangliansu Tablets；paeoniflorin；berberine hydrochloride

中圖分類號：R284.1；R286.0

文獻標識碼：A

文章編號：1006-4931（2016）07-0061-03

作者簡介：李靜（1985-），女，主管藥師，主要從事藥品檢驗工作，（電子信箱）lijing320323@163.com。

收稿日期：（2015-09-14）