高效液相色譜法測定麗康寶膠囊中蘆薈苷含量

汪楊麗

（重慶市食品藥品檢驗所·重慶市藥物過程與質(zhì)量控制工程技術(shù)研究中心，重慶　401121）

?

高效液相色譜法測定麗康寶膠囊中蘆薈苷含量

汪楊麗

（重慶市食品藥品檢驗所·重慶市藥物過程與質(zhì)量控制工程技術(shù)研究中心，重慶401121）

摘要：目的建立測定麗康寶膠囊中蘆薈苷含量的高效液相色譜法。方法色譜柱為Waters C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），流動相為甲醇-1%冰醋酸溶液（45∶55），流速為1.0 mL/min，檢測波長為355 nm。結(jié)果蘆薈苷進樣量在0.134 5～4.307 5 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系（r=0.999 9），加樣回收率為101.12%，RSD=1.12%（n=6）。結(jié)論該法簡便、準確，重復(fù)性好，可作為麗康寶膠囊中蘆薈苷的含量測定方法。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜法；麗康寶膠囊；蘆薈苷

麗康寶膠囊是猴頭菇、靈芝、蘆薈、珍珠粉4味中藥加工制成的復(fù)方制劑。猴頭菇和靈芝主要含蛋白質(zhì)、多糖、核苷酸、微量元素等成分，能增強免疫力、促進腸胃功能?，F(xiàn)代研究表明［1］，蘆薈具有抗癌、抗炎、增加免疫力、潤腸通便、保護皮膚等功效，其主要生物活性成分是蘆薈苷。筆者建立了測定麗康寶膠囊中蘆薈苷含量的高效液相色譜法，以期為其質(zhì)量標準制訂提供依據(jù)。

1　儀器與試藥

1.1儀器

Waters 2695型高效液相色譜儀（沃特世公司）；Agillent 1100型高效液相色譜儀（安捷倫公司）；Bp221s型電子天平（萬分之一，德國賽多利斯公司）；Mettler Toledo型電子天平（十萬分之一，瑞士）。

1.2試藥

蘆薈苷對照品（批號為110787-201206，純度95.0%，中國藥品生物制品檢定所）；麗康寶膠囊樣品（新西蘭安發(fā)保健品有限公司，批號為HPK23814，HPK18214，HPK24514）；甲醇為色譜純，水為純化水，其余試劑為分析純。

2　方法與結(jié)果

2.1色譜條件

色譜柱：Waters C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇-1%冰醋酸溶液（45∶55）；柱溫：25℃；流速：1.0 mL/min；檢測波長：355 nm；進樣量：5 μL。

2.2溶液制備

精密稱取蘆薈苷對照品適量，加流動相制成質(zhì)量濃度為0.861 5 g/L的對照品貯備液。取裝量差異項下的內(nèi)容物，研細，混勻，取約0.3 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲處理（功率450 W，頻率50 kHz）30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇補足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。取按處方及工藝制備的缺蘆薈陰性樣品0.3 g，照供試品溶液制備方法處理，得陰性對照品溶液。

2.3方法學(xué)考察

專屬性試驗：分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照品溶液各5 μL，注入色譜儀，按擬訂色譜條件進行測定，記錄色譜圖，見圖1?？梢?，在與蘆薈苷對照品相應(yīng)的保留時間處無色譜峰，說明陰性對照品溶液無干擾。

線性關(guān)系考察：精密吸取質(zhì)量濃度為0.861 5 g/L的蘆薈苷對照品貯備液5.0 mL，置10 mL容量瓶中，搖勻，逐級稀釋，分別得質(zhì)量濃度為0.430 8，0.215 4，0.107 7，0.053 8，0.026 9 g/L的對照品溶液。精密吸取上述對照品溶液各5 μL，注入高效液相色譜儀，按擬訂色譜條件測定，記錄峰面積，用最小二乘法進行線性回歸，得線性回歸方程Y=2×106X-12 683，r=0.999 9（n=5）。結(jié)果表明，蘆薈苷進樣量在0.134 5～4.307 5 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

精密度試驗：精密吸取同一對照品溶液（質(zhì)量濃度為0.215 4 g/L）5 μL，連續(xù)進樣6次，測定峰面積。結(jié)果的RSD為0.8%（n=6），表明儀器精密度良好。

圖1　高效液相色譜圖

重復(fù)性試驗：取同批樣品（批號HPK18214），按供試品溶制備方法制備6份溶液，依法測定并計算含量。結(jié)果蘆薈苷平均含量為44.7 mg/g，RSD為0.5%（n=6），表明方法重復(fù)性好。

穩(wěn)定性試驗：取同一供試品溶液（批號為HPK18214），分別于0，2，4，6，8，10，12 h時進樣5 μL，測定峰面積。結(jié)果的RSD分別為1.0%（n=7），表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收試驗：精密稱取蘆薈苷對照品適量，加甲醇制得質(zhì)量濃度為0.135 6 g/L的對照品溶液。精密稱取0.15 g已測定含量的樣品（批號為HPK18214，蘆薈苷含量為44.7 mg/g），共6份，分別置具塞錐形瓶中，精密加入50 mL蘆薈苷對照品溶液，按2.2項下方法制備供試品溶液，測定含量并計算回收率。結(jié)果見表1。

表1　蘆薈苷加樣回收試驗結(jié)果（n=6）

耐用性試驗：采用Agilent 1100型色譜儀、Agilent C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）和Waters 2695型色譜儀、Waters C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），按擬訂色譜條件，分別測定同批樣品（批號為HPK18214）。結(jié)果供試品溶液各組分色譜峰均得到很好的分離，蘆薈苷的含量為44.7 mg/g。

2.4樣品含量測定

取3批樣品，按2.2項下方法制備供試品溶液，依法測定。結(jié)果批號為HPK18214，HPK23814，HPK24514的樣品中蘆薈苷含量分別為44.7，45.7，45.8 mg/g。

3　討論

本試驗中采用甲醇［2］、稀乙醇、乙醇、無水乙醇4種提取溶劑對樣品進行超聲提取，結(jié)果甲醇提取效果好。還比較了提取10，20，30，45，60 min的效果，結(jié)果超聲30 min時提取完全，隨著超聲時間增加，蘆薈苷對熱不穩(wěn)定，含量降低。

試驗中曾選用了乙腈-水（25∶75）［3］、甲醇-水（45∶55）［2］和甲醇-1%冰醋酸（45∶55）［4］等流動相，結(jié)果甲醇-1%冰醋酸（45∶55）系統(tǒng)使樣品蘆薈苷色譜峰的對稱性好，分離度好，且保留時間適宜。

試驗中曾用甲醇、45%甲醇、水配制蘆薈苷對照品溶液，隨著時間的推移，蘆薈苷峰面積逐漸減少，出現(xiàn)1個色譜峰并且其峰面積逐漸增加。參考文獻［5］，蘆薈苷是以互為同分異構(gòu)體的蘆薈苷A和蘆薈苷B兩種形式存在，在一定條件下可以相互轉(zhuǎn)化。蘆薈苷在強酸性環(huán)境下穩(wěn)定［6］，故最終選擇以流動相甲醇-1%冰醋酸（45∶55）溶解蘆薈苷對照品，蘆薈苷穩(wěn)定性較好。

參考文獻：

［1］盧朝國，王紅專，李燕紅，等.高效液相色譜法同時測定蘆薈中蘆薈苷和蘆薈大黃素的含量［J］.鄭州大學(xué)學(xué)報：醫(yī)學(xué)版，2008，43（3）：584-586.

［2］劉桂花，何承輝，邢建國，等.HPLC法同時測定復(fù)方蘇潤江滴丸中秋水仙堿、蘆薈苷及蘆薈大黃素的含量［J］.藥物分析雜志，2013，33（3）：409-413.

［3］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）［M］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：152.

［4］黃麗英，陳敬華，林水森，等.RP-HPLC測定復(fù)方蘆薈膠囊中蘆薈苷、蘆薈大黃素、靛藍的含量［J］.中國中藥雜志，2006，31（15）：1 289-1 290.

［5］晏正，陳雙喜，寇正福，等.蘆薈苷在水中穩(wěn)定性的研究［J］.河南大學(xué)學(xué)報：自然科學(xué)版，2010，40（3）：287-290.

［6］潘虹，焦玉果，林穎慧.蘆薈甙提取方法及穩(wěn)定性研究［J］.中央民族大學(xué)學(xué)報：自然科學(xué)版，2008，17（2）：52-57.

Content Determination of Alion in Likangbao Capsules by HPLC

Wang Yangli
（Chongqing Institute For Food and Drug Control，Chongqing Engineering Technology Research Center for Pharmaceutical Process and Quality Control，Chongqing 401121）

Abstract：Objective To establish a HPLC method for simultaneous determination of alion in Likangbao Capsules.Methods The samples were separated on Waterst C18column（150 mm×4.6 mm，5 μm）by methanol-1%acetic acid solution（45∶55）as the mobile phase.The flow rate was 1.0 mL/min and the detection wavelength was 355 nm.Results The calibration curve showed good linearity in the range of 0.134 5-4.307 5 μg（r=0.999 9）.The average recovery rate was 101.12%（RSD=1.12%，n=6）.Conclusion The method is simple and accurate with good reproducibility.It can be conducive to the determination of Aloe in Likangbao Capsules.

Key words：HPLC；Likangbao Capsules；alion

中圖分類號：R284.1；R286.0

文獻標識碼：A

文章編號：1006-4931（2016）07-0059-02

作者簡介：汪楊麗，女，主管中藥師，碩士研究生，主要從事中藥分析工作，（電話）023-86072753（電子信箱）wangyangli81@163.com。

收稿日期：（2015-10-14）