高效液相色譜法測(cè)定小兒復(fù)方麻黃堿桔梗糖漿中鹽酸麻黃堿含量

陸仕華，李丹鳳，黃興振

（1.廣西壯族自治區(qū)食品藥品審評(píng)查驗(yàn)中心，廣西南寧　530029；2.廣西壯族自治區(qū)食品藥品檢驗(yàn)所，廣西南寧　530021；3.廣西醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，廣西南寧　530021）

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高效液相色譜法測(cè)定小兒復(fù)方麻黃堿桔梗糖漿中鹽酸麻黃堿含量

陸仕華1，李丹鳳2，黃興振3

（1.廣西壯族自治區(qū)食品藥品審評(píng)查驗(yàn)中心，廣西南寧530029；2.廣西壯族自治區(qū)食品藥品檢驗(yàn)所，廣西南寧530021；3.廣西醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，廣西南寧530021）

摘要：目的建立測(cè)定小兒復(fù)方麻黃堿桔梗糖漿中鹽酸麻黃堿含量的高效液相色譜（HPLC）法。方法色譜柱采用Inertsil ODS-3 C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動(dòng)相為乙腈-含0.1%三乙胺的0.1%磷酸溶液（10∶90），流速1.0 mL/min，檢測(cè)波長205 nm，柱溫30℃，進(jìn)樣量20 μL。結(jié)果鹽酸麻黃堿質(zhì)量濃度在5.715 0～57.150 0 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系（r=0.999 8），平均加樣回收率為100.08%，RSD為0.76%（n=9）。結(jié)論該法簡便準(zhǔn)確、靈敏度高、結(jié)果可靠，重復(fù)性好，可作為小兒復(fù)方麻黃堿桔梗糖漿的質(zhì)量控制方法。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜法；小兒復(fù)方麻黃堿桔梗糖漿；鹽酸麻黃堿；含量測(cè)定

小兒復(fù)方麻黃堿桔梗糖漿是由鹽酸麻黃堿、桔梗、氯化銨、枸櫞酸鈉、枸櫞酸、薄荷腦、苯甲酸、茴香水、乙醇、蔗糖與水制成的糖漿劑，主要用于小兒感冒、支氣管炎引起的咳嗽、多痰等［1］。原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)采用紫外分光光度法對(duì)含量進(jìn)行測(cè)定，準(zhǔn)確度不夠高，專屬性不夠強(qiáng)［2-3］。為更好、更精確地控制藥品質(zhì)量，筆者采用高效液相色譜（HPLC）法測(cè)定方中鹽酸麻黃堿的含量?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1　儀器與試藥

Waters 2695-2998型高效液相色譜儀（DAD檢測(cè)器，Empower色譜工作站）；XD205DU型電子天平（瑞士梅特勒公司）。鹽酸麻黃堿對(duì)照品（中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)為171241-201007，供含量測(cè)定用）；小兒復(fù)方麻黃堿桔梗糖漿（廠家A，批號(hào)為40901，40902，40903）；乙腈為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純。

2　方法與結(jié)果

2.1色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)［4-5］

圖1　高效液相色譜圖

色譜柱：Inertsil ODS-3 C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；檢測(cè)波長：205 nm；流動(dòng)相：乙腈-含0.1%三乙胺的0.1%磷酸溶液（10∶90）；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣量：20 μL；柱溫：30℃。在上述色譜條件分別測(cè)定供試品溶液、對(duì)照品溶液、陰性對(duì)照品溶液，色譜見圖1。對(duì)照品溶液與供試品溶液色譜中鹽酸麻黃堿的保留時(shí)間基本一致，陰性對(duì)照品溶液色譜在相應(yīng)位置無相應(yīng)峰出現(xiàn)，與其他組分分離完全，按鹽酸麻黃堿峰計(jì)算理論板數(shù)應(yīng)不低于3 000。

2.2溶液制備

稱取鹽酸麻黃堿對(duì)照品10 mg，精密稱定，置100 mL容量瓶中，加0.1 mol/L鹽酸溶液適量，振搖使溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成每1 mL中含鹽酸麻黃堿0.1 mg的對(duì)照品貯備液。精密量取對(duì)照品貯備液5 mL，置25 mL容量瓶中，加0.1 mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，制成1 mL中含鹽酸麻黃堿20 μg的對(duì)照品溶液。精密量取樣品2.5 mL，置100 mL容量瓶中，加0.1 mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，得供試品溶液。將桔梗粉碎成粗粉，加常水煎煮2次，第1次2 h，第2次1 h，合并煎液，趁熱加入苯甲酸溶解，靜置24 h，濾取上清液，加蔗糖400 g制成糖漿；另取氯化銨15 g、枸櫞酸2 g、枸櫞酸鈉15 g加水溶解后，加入糖漿中，再將薄荷腦0.15 g溶于乙醇、氯仿混合液中，與茴香水4 mL混合后，緩緩加入上述糖漿中，隨加隨攪拌，最后加適量超純水使成1 000 mL，攪勻，濾過，分裝，即得陰性對(duì)照品溶液。

2.3方法學(xué)考察

線性關(guān)系與定量限考察：精密量取對(duì)照品貯備液0.5，1.0，2.0，4.0，5.0 mL，分別置10 mL容量瓶中，加0.1 mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，制成不同質(zhì)量濃度的對(duì)照品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。以峰面積（A）對(duì)其質(zhì)量濃度（C）作線性回歸，得回歸方程A=42 186 C-52 818（r=0.999 9）。結(jié)果表明，鹽酸麻黃堿質(zhì)量濃度在5.715 0～57.150 0 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。以信噪比為10計(jì)算，得出鹽酸麻黃堿定量限為15.33 ng/mL。

精密度試驗(yàn)：取同一對(duì)照品溶液20 μL注入液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖。結(jié)果鹽酸麻黃堿峰面積的RSD為0.59%（n=6），表儀器明精密度較好。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同批樣品（批號(hào)為140901）6份，依法制成供試品溶液，進(jìn)樣20 μL，分別測(cè)定每份樣品的含量。結(jié)果鹽酸麻黃堿的平均含量為0.83 g/L，RSD為0.42%（n=6），表明方法的重復(fù)性較好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品（批號(hào)為140901）溶液，依法分別于0，1，2，4，6，8，10 h時(shí)進(jìn)樣20 μL測(cè)定。結(jié)果鹽酸麻黃堿的峰面積RSD為0.65%（n=7），表明供試品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn)：取已知含量的同批樣品（批號(hào)140901），按20 μg/mL質(zhì)量濃度1/2的80%，100%，120%共3個(gè)梯度分別加入對(duì)照品貯備液8.0，10.0，12.0 mL，每個(gè)質(zhì)量濃度平行配制3份，加0.1 mol/L鹽酸溶液溶解并稀釋至刻度，進(jìn)樣20 μL測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1　鹽酸麻黃堿加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=9）

2.4樣品含量測(cè)定

取3批樣品，按2.2項(xiàng)下方法制成供試品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，以外標(biāo)法通過峰面積計(jì)算含量。結(jié)果批號(hào)為140901，140902，140903的3批樣品中鹽酸麻黃堿的含量分別為0.83，0.81，0.82 g/L。

3　討論

目前，小兒復(fù)方麻黃堿桔梗糖漿中鹽酸麻黃堿的含量測(cè)定主要是采用分光光度法中的紫外吸收系數(shù)測(cè)定法進(jìn)行測(cè)定［6-7］。因復(fù)方制劑成分非常復(fù)雜，文獻(xiàn)［8］報(bào)道，紫外吸收系數(shù)測(cè)定法測(cè)定時(shí)會(huì)有吸收系數(shù)和供試品溶液吸光度引起的不確定度，后者有吸收度測(cè)定重復(fù)性的不確定度，其中包括吸收度測(cè)定結(jié)果的不確定度和由證書給出吸收度重復(fù)性的不確定度，故吸光度引起的不確定度占主導(dǎo)，與所使用的紫外分光光度計(jì)有關(guān)。筆者采用HPLC法測(cè)定小兒復(fù)方麻黃堿桔梗糖漿中鹽酸麻黃堿的含量，避免了因吸光度引起的不確定度，提高了檢驗(yàn)的專屬性。

對(duì)鹽酸麻黃堿對(duì)照品溶液進(jìn)行紫外全波段掃描，發(fā)現(xiàn)205 nm波長處的吸收強(qiáng)度最大，為近紫外光區(qū)，故選擇檢測(cè)波長為205 nm。

根據(jù)文獻(xiàn)［9-11］報(bào)道，本試驗(yàn)中對(duì)流動(dòng)相進(jìn)行了比較篩選，首先考察了乙腈-含0.1%三乙胺的0.1%磷酸溶液（5∶95），峰形對(duì)稱性不好，分離度一般。在此基礎(chǔ)上調(diào)整流動(dòng)相比例為乙腈-含0.1%三乙胺的0.1%磷酸溶液（10∶90），結(jié)果顯示，雜質(zhì)峰和色譜峰分離度良好，色譜峰對(duì)稱，基線平穩(wěn)，不用進(jìn)行復(fù)雜的梯度洗脫進(jìn)行分離。

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Content Determination of Ephedrine Hydrochloride in Child Compound Ephedrine Jiegeng Syrup by HPLC

Lu Shihua1，Li Danfeng2Huang Xingzhen1
（1.Guagnxi Food and Drug Evaiuation & Inspection Center，Nanning，Guangxi，China 530029；2.Guangxi Zhuang Autonomous Region Institute for Food and Drug Control，Nanning，Guangxi，China 530021；3.Pharmaceutical College Guangxi Medical University，Nanning，Guangxi，China 530021）

Abstract：Objective To establish an HPLC method for the determination of ephedrine hydrochloride in Child Compound Ephedrine Jiegeng Syrup.Methods The HPLC method was adopted on the Inertsil ODS-3 C18column（250 mm×4.6 mm，5 μm）with acetonitrile 0.1%phosphoric acid solution（containing 0.1%triethylamine）（10∶90）as the mobile phase.The flow rate was 1.0 mL/min and the column temperature was 30℃.The wavelength was 205 nm.Results The sample size of ephedrine hydrochloride in the range of 5.715 0-57.150 0 μg/mL showed the good linear relationship with the peak area（r=0.999 8），The average recovery rate was 100.08%（RSD=0.76%，n=9）.Conclusion This method is simple and rapid with good reproducibility，and can be used as one of the quality control standard for Child Compound Ephedrine Jiegeng Syrup.

Key words：HPLC；Child Compound Ephedrine Jiegeng Syrup；ephedrine hydrochloride；content determination

中圖分類號(hào)：R284.1；R286.0

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1006-4931（2016）05-0056-03

作者簡介：陸仕華，男，碩士研究生，藥師，主要從事藥物新制劑研究工作，（電子信箱）lushihua2318@163.com；黃興振，男，碩士研究生，藥師，主要從事藥物新制劑研究工作，本文通訊作者，（電子信箱）huangxingzhen@163.com。

收稿日期：（2015-07-13）