高效液相色譜法測定醒神通竅膠囊中齊墩果酸含量

何雪冰，李作孝，熊　軍，張　昊，楊思進(jìn)

（1.西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院，四川瀘州　646000；2.西南醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院，四川瀘州　646000）

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高效液相色譜法測定醒神通竅膠囊中齊墩果酸含量

何雪冰1，李作孝1，熊軍1，張昊1，楊思進(jìn)2

（1.西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院，四川瀘州646000；2.西南醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院，四川瀘州646000）

摘要：目的建立測定醒神通竅膠囊中齊墩果酸含量的高效液相色譜法。方法色譜柱為phenomenex Proidigy DDS3 100A柱（250 mm× 4.6 mm，5 μm），流動(dòng)相為甲醇-0.4%磷酸（90∶10），檢測波長210 nm，柱溫30℃。結(jié)果齊墩果酸質(zhì)量濃度在12～240 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，線性回歸方程為Y=0.050 4 X-0.238 5，R2=0.999 3（n=6），平均回收率為97.98%，RSD為1.62%（n=9）。結(jié)論該法簡便、快速、準(zhǔn)確、可靠，可作為醒神通竅膠囊質(zhì)量控制的方法。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜法；醒神通竅膠囊；齊墩果酸；含量測定

醒神通竅膠囊是由川芎、石菖蒲、益智仁、葛根、女貞子等組方，具有調(diào)血脂、降血糖、益智之功效，臨床對(duì)血管性癡呆有良好的治療效果。為控制醒神通竅膠囊的質(zhì)量，筆者參照文獻(xiàn)中齊墩果酸含量測定方法［1-3］，建立了測定醒神通竅膠囊中齊墩果酸含量的高效液相色譜法?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1　儀器與試藥

1.1儀器

DIONEX U-3000型高效液相色譜儀（戴安中國有限公司）；威瑪通用多媒體色譜數(shù)據(jù)工作站（深圳深軟電子有限公司）；TG328A型電光分析天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司-天平儀器制造廠）；722型分光光度儀（上海精密科學(xué)儀器有限公司儀器總廠）。

1.2試藥

醒神通竅膠囊（西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院，批號(hào)為150313，150420，150425）；齊墩果酸對(duì)照品（中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)為110709-201206，供含量測定用）；甲醇（上海國藥集團(tuán)化學(xué)公司）為色譜純，其他試劑均為分析純。

2　方法與結(jié)果

2.1色譜條件

色譜柱：phenomenex Proidigy ODS3100A柱（250mm× 4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇-0.4%磷酸（90∶10）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：210 nm；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：20 μL。

2.2溶液制備

取齊墩果酸對(duì)照品約1.969 8 mg，精密稱定，置10 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液。取醒神通竅膠囊藥粉4.32 g，精密稱定，加100 mL甲醇，超聲提取30 min，取出，放至室溫，甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，用定量濾紙過濾，即得供試品溶液。按處方比例取不含女貞子的其他藥材，制成缺女貞子的陰性對(duì)照品，按供試品溶液制備方法制得陰性對(duì)照品溶液。

2.3方法學(xué)考察

陰性干擾試驗(yàn)：取2.2項(xiàng)下3種溶液，按擬訂的色譜條件進(jìn)樣測定。結(jié)果供試品溶液與對(duì)照品溶液色譜圖中具有相同保留時(shí)間的色譜峰，而陰性無干擾。色譜圖見圖1。

線性關(guān)系考察：分別精密取對(duì)照品貯備液適量，配制成12，24，48，96，144，240 μg/mL的系列質(zhì)量濃度溶液，分別進(jìn)樣20 μL，按擬訂色譜條件測定，以齊墩果酸的質(zhì)量濃度（X）為橫坐標(biāo)、峰面積積分值（Y）為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y=0.050 4 X-0.238 5，R2=0.999 3（n=6）。結(jié)果表明，齊墩果酸質(zhì)量濃度在12～240 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積積分值線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn)：取同一對(duì)照品溶液（質(zhì)量濃度為96 μg/mL），注入高效液相色譜儀，進(jìn)樣6次。結(jié)果的RSD為0.69%（n=6），表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：精密稱取同一批樣品（批號(hào)為150313）6份，按擬訂方法測定。結(jié)果含量分別為90.56，90.24，89.57，89.76，90.76，90.06 μg/mL，平均90.16 μg/mL，RSD為0.51%（n=6），表明方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密吸取同一供試品溶液（批號(hào)為150313）20 μL，分別于0，1，2，4，8，12，24 h時(shí)依法進(jìn)樣測定。結(jié)果峰面積積分值分別為90.879 4，90.777 2，90.7967，90.7551，90.1891，90.4671，90.3037，RSD為0.45%（n=7），表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

加樣回收試驗(yàn)：精密稱取已知齊墩果酸含量的樣品（批號(hào)為150313，含量為2.086 6 mg/g）適量，分別精密加入對(duì)照品溶液（質(zhì)量濃度為240 μg/mL）50，100，150 μL，按供試品溶液制備方法處理，測定含量，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

圖1　高效液相色譜圖

表1　齊墩果酸加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=9）

2.4樣品含量測定

取3批樣品，依法制備供試品溶液并測定，平行3次。結(jié)果批號(hào)為150313，150420，150425的樣品中齊墩果酸平均含量分別為2.086 6，2.272 2，1.914 6 mg/g。

3　討論

檢測波長選擇：取齊墩果酸對(duì)照品適量，用流動(dòng)相溶液溶解，于200～400 nm波長范圍內(nèi)掃描，結(jié)果于210 nm波長處齊墩果酸有最大吸收，且靈敏度高，故選擇210 nm作為檢測波長。

流動(dòng)相選擇：參考文獻(xiàn)［4-5］，在試驗(yàn)過程中，曾采用多種流動(dòng)相（包括甲醇-水、甲醇-水-冰醋酸-三乙胺等）進(jìn)行分離測試，結(jié)果色譜峰分離均不理想而未被采用。流動(dòng)相為甲醇-0.4%磷酸（90∶10）時(shí)分離效果較好，且保留時(shí)間較短，故選其為流動(dòng)相。

柱溫選擇：考察不同柱溫（10℃，25℃，35℃，40℃）對(duì)色譜分離效果的影響，結(jié)果各柱溫對(duì)分離效果保留時(shí)間的影響均有明顯區(qū)別，其中柱溫30℃分離效果好，因此確定柱溫為30℃。

醒神通竅膠囊為復(fù)方制劑，其組方中女貞子是重要成分，齊墩果酸具有調(diào)血脂、降血糖、抗炎、鎮(zhèn)靜、強(qiáng)心、利尿作用，同時(shí)還具有保護(hù)肝臟、利水滲濕等功效［4-6］，對(duì)于血管性癡呆患者極為有益［7-8］。故選擇測定齊墩果酸含量以控制醒神通竅膠囊的質(zhì)量，并建立高效液相色譜法測定含量，簡便、快速，結(jié)果可靠，可作為醒神通竅膠囊質(zhì)量控制的方法。

參考文獻(xiàn)：

［1］江麗，申國慶，龔春燕.HPLC法同時(shí)測定復(fù)方痤瘡膠囊中齊墩果酸和熊果酸的含量［J］.中國藥師，2011，14（8）：1 141-1 142.

［3］謝誼，李躍輝，唐純玉，等.HPLC法測定喉咽清口服液中齊墩果酸的含量［J］.中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2014，11（20）：110-113.

［4］黃其春，涂文升.高效液相色譜法測定六味五靈片中齊墩果酸含量［J］.中國藥業(yè)，2012，21（13）：19-20.

［5］王奇，蘆柏震.齊墩果酸的研究進(jìn)展［J］.中國藥房，2008，19（9）：711-712.

［6］石朗，王海龍，陳大忠，等.HPLC法測定齊墩果酸緩釋片中齊墩果酸的含量［J］.中國中醫(yī)藥科技，2011，18（6）：507.

［7］高風(fēng)超，陳翔，田新英.血管性癡呆危險(xiǎn)因素及發(fā)病機(jī)制的研究進(jìn)展［J］.醫(yī)學(xué)綜述，2014，20（6）：1 068-1 071.

［8］黃浩，唐士婷，藺心敬.血管性癡呆相關(guān)危險(xiǎn)因素分析［J］.醫(yī)學(xué)綜述，2012，18（19）：3 231-3 234.

Content Determination of Oleanolic Acid in Xingshen Tongqiao Capsule by HPLC

He Xuebing1，Li Zuoxiao1，Xiong Jun1，Zhang Hao1，Yang Sijin2
（1.Affiliated Hospital of the Southwest Medical University，Luzhou，Sichuan，China 646000；2.Affiliated Chinese Medicine Hospital of the Southwest Medical University，Luzhou，Sichuan，China 646000）

Abstract：Objective To establish the determination method of oleanolic acid in Xingshen Tongqiao Capsule by HPLC.Methods The separation was performed on a phenomenex Proidigy column（250 mm×4.6 mm，5 μm），the mobile phase consisted of methanol-0.4% phosphoric acid（90∶10），The detection wavelength was set at 210 nm，and the column temperature was 30℃.Results There was a good linearity between the peak areas and the quantity of oleanolic acid within the range of 12-240 μg/mL，the equation of linear regression was Y=0.050 4 X-0.238 5，R2=0.999 3（n=6）.The average recovery was 97.98%，RSD=1.62%（n=9）.Conclusion The established method is simple，quick，reliable and specific，and can be used in the determination of oleanolic acid in Xingshen Tongqiao Capsule.

Key words：HPLC；Xingshen Tongqiao；oleanic acid；content determination

中圖分類號(hào)：R284.1；R286.0

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1006-4931（2016）07-0052-03

作者簡介：何雪冰（1990-），在讀碩士研究生，研究方向?yàn)樯窠?jīng)免疫，（電子信箱）505351887@qq.com；李作孝（1964-），碩士研究生，教授，主任醫(yī)師，研究方向?yàn)樯窠?jīng)免疫，本文通訊作者，（電話）0830-3165660（電子信箱）lzx3235@sina.com。

收稿日期：（2015-10-14）