反相高效液相色譜法測定香菊膠囊中迷迭香酸含量

孫　菲，孫　欣，金　榮

（黑龍江省雞西市食品藥品檢驗檢測中心，黑龍江雞西　158100）

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反相高效液相色譜法測定香菊膠囊中迷迭香酸含量

孫菲，孫欣，金榮

（黑龍江省雞西市食品藥品檢驗檢測中心，黑龍江雞西158100）

摘要：目的建立測定香菊膠囊中迷迭香酸含量的反相高效液相色譜（RP-HPLC）法。方法色譜柱采用Agilent Eclipse XDB-C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動相為甲醇-0.5%磷酸溶液（線性梯度洗脫），檢測波長330 nm，柱溫30℃，進樣量10 μL，流速1.0 mL/min。結(jié)果迷迭香酸進樣量在5.019×10-2～7.679×10-1μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，r=0.999 9（n=7）；平均加樣回收率為99.20%，RSD為0.35%（n=6）。結(jié)論該法操作快速、簡便、準(zhǔn)確、結(jié)果可靠，可用于香菊膠囊的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞：香菊膠囊；含量測定；迷迭香酸；高效液相色譜法

香菊膠囊由化香樹果序（除去種子）、夏枯草、野菊花、黃芪、辛夷、防風(fēng)、白芷、甘草、川芎9味中藥組方，具有辛散祛風(fēng)、清熱通竅之功效［1］，用于急、慢性鼻竇炎及鼻炎，療效顯著［2-3］。迷迭香酸為夏枯草中的有效成分［4］，現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)無對處方中主藥夏枯草的質(zhì)量控制，2010年版《中國藥典（一部）》［5］規(guī)定夏枯草中迷迭香酸的含量不能低于0.20%，故迷迭香酸含量可以作為香菊膠囊中夏枯草質(zhì)量評價的依據(jù)。目前，尚無相關(guān)文獻(xiàn)報道香菊膠囊中迷迭香酸的含量測定方法。因此，筆者建立了香菊膠囊中迷迭香酸的含量測定方法，專屬性強、準(zhǔn)確、可靠，可為完善該制劑的質(zhì)量控制提供參考。

1　儀器與試藥

1.1儀器

HP1100型高效液相色譜儀（包括四元泵，紫外檢測器，自動進樣器），HP1100工作站；CP225D型電子天平（Sartorius公司）；KQ-400KDE型高功率數(shù)控超聲波清洗器（功率為400 W，頻率為40 kHz）；UV-2550型紫外-可見分光光度計（蘇州島津公司）。

1.2試藥

迷迭香酸對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號為111871-201203，含量為98.8%）；香菊膠囊（山東步長制藥有限公司，批號為140416，140418，140312）；水為娃哈哈純化水；其他試劑均為色譜純。

2　方法與結(jié)果

2.1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱：Agilent Eclipse XDB-C18柱（250 mm× 4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇（A）-0.5%磷酸溶液（B），線性梯度洗脫，見表1；檢測波長：330 nm；進樣量：10 μL；柱溫：30℃；流速：1.0 mL/min。迷迭香酸峰與相鄰色譜峰間的分離度均大于1.5，理論板數(shù)以迷迭香酸峰計不低于9 000。在此條件下，色譜圖見圖1。

表1　線性梯度洗脫程序

圖1　高效液相色譜圖

2.2溶液制備

稱取五氧化二磷干燥24 h以上的迷迭香酸對照品10.16 mg（含量98.8%），精密稱定，置10 mL容量瓶中，加50%甲醇適量，超聲使完全溶解，放置至室溫，用50%甲醇稀釋至刻度，作為對照品貯備液。稱取樣品適量（相當(dāng)于1粒重），精密稱定，置50 mL容量瓶中，加50%甲醇35 mL，超聲處理，提取30 min，放至室溫，加50%甲醇至稀釋刻度，搖勻，微孔濾膜濾過，備用，得供試品溶液。按香菊膠囊的處方，不加夏枯草，依法制備陰性樣品，按供試品溶液制備的方法制備陰性對照品溶液。

2.3方法學(xué)考察

陰性干擾試驗：分別取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照品溶液適量，按擬訂色譜條件進樣，色譜圖見圖1。結(jié)果表明，陰性對照品溶液對測定無干擾。

線性關(guān)系考察：精密量取對照品貯備液1mL，置20mL容量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，得對照品溶液（質(zhì)量濃度為50.19 μg/mL），按擬訂色譜條件，分別進樣1，2，4，6，8，10，15 μL，記錄色譜圖，以峰面積（Y）對進樣量（X，μg）進行回歸分析，得迷迭香酸回歸方程Y=2.199×103X-2.412，r=0.999 9（n=7）。結(jié)果表明，迷迭香酸進樣量在5.019×10-2～7.679×10-1μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗：精密量取同一對照品溶液適量，稀釋20倍，得質(zhì)量濃度為50.19 μg/mL的對照品溶液，按擬訂色譜條件，連續(xù)重復(fù)進樣5次，記錄色譜圖。結(jié)果的RSD為0.4%（n=5），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗：精密稱取樣品適量，依法制備供試品溶液，設(shè)定自動進樣器，分別于0，1，2，4，10，16，24 h時重復(fù)進樣，記錄色譜圖。結(jié)果的RSD為0.6%（n=7），表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗：取同一批香菊膠囊（批號為140416），依法制備供試品溶液5份，按擬訂色譜條件分別進樣，記錄色譜峰面積。結(jié)果迷迭香酸的平均含量為每粒1.356 mg，RSD為0.8%（n=5），表明方法重復(fù)性較好。

加樣回收試驗：稱取已知含量的香菊膠囊（批號140416）約0.16 g，稱取6份，精密稱定，分別置50 mL容量瓶中，分別精密加入對照品溶液（質(zhì)量濃度為339.1 μg/mL）各2.0 mL，加50%甲醇適量，超聲提取30 min，靜置至室溫，用50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，按擬訂色譜條件分別進樣，記錄色譜圖，測定含量，計算回收率。結(jié)果見表2。

表2　迷迭香酸加樣回收試驗結(jié)果（n=6）

2.4樣品含量測定

取本品10粒，取出內(nèi)容物，去除膠囊殼，精密稱定，研細(xì)，精密稱取本品（相當(dāng)于1粒），依法制備供試品溶液，平行制備3份，按擬訂色譜條件，用外標(biāo)法計算市售3批樣品中迷迭香酸的含量。結(jié)果見表3。

表3　樣品含量測定結(jié)果（n=3）

3　討論

3.1測定波長選擇

文獻(xiàn)［6］報道迷迭香酸檢測波長為330 nm，本試驗中采用紫外分光光度法，于200～700 nm波長范圍內(nèi)對迷迭香酸對照品溶液全波長掃描，結(jié)果迷迭香酸的最大吸收波長為330 nm。

3.2流動相選擇

曾考察乙腈-1.0%醋酸水溶液［7］、乙腈-0.1%磷酸溶液［8］和甲醇-0.5%磷酸溶液為流動相，梯度洗脫，結(jié)果表明3種流動相均能分離出迷迭香酸。綜合比較，采用甲醇-0.5%磷酸溶液為流動相，分離效果最好，且流動相成本、毒性相對較低。另外，流動相加入低濃度酸溶液，能有效抑制迷迭香酸解離，同時能減少拖尾現(xiàn)象，提高了分離效率。

3.3提取方法考察

曾考察以乙醇、50%乙醇、甲醇、50%甲醇、75%甲醇作溶劑超聲提取20，30，35，40 min，結(jié)果表明50%甲醇作溶劑提取效率最高，超聲30 min提取完全。

3.4操作避光

迷迭香酸屬多酚羥基化合物，溫度和pH對迷迭香酸的穩(wěn)定性影響較小，但光照和金屬離子對迷迭香酸穩(wěn)定性影響較大［8］，故試驗操作中盡量避光，全部采用棕色容量瓶。

3.5研究價值

迷迭香酸具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗炎、抗抑郁等藥理作用［9-10］，迷迭香酸是香菊膠囊處方中夏枯草中的有效活性成分，含量直接影響香菊膠囊藥效，因此本法的建立是對現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)的有效補充和提高。

參考文獻(xiàn)：

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Content Determination of Rosmarinicacid in Xiangju Capsules By HPLC

Sun Fei，Sun Xin，Jin Rong
（Jixi Food and Drug Testing Center，Jixi，Heilongjiang，China 158100）

Abstract：Objective To establish a RP-HPLC method for determination of Rosmarinicacid in xiangju capsules.Methods Using a column packed with Agilent Eclipse XDB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；The mobile phase was methanol-0.5%H3PO4by gradient elution and the detection wavelength was 330 nm；the flow rate was 1.0 mL/min，the injection volume was 10 μL，the column temperature was 30℃.Results The Linear response of rosmarinicacid ranged from 5.019×10-2-7.679×10-1μg（r=0.999 9，n=7）；the average recovery rate was 99.20%，RSD=0.35%（n=6）.Conclusion The method is convenient，quick and accurate，and can be used for the quality controL of Xiangju Capsules.

Key words：Xiangju Capsules；content determination；rosmarinicacid；HPLC

中圖分類號：R284.1；R286.0

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1006-4931（2016）07-0043-03

作者簡介：孫菲（1981-），女，副主任藥師，研究方向為藥品檢驗，（電話）0467-6103277（電子信箱）chenlizhu1980@163.com。

收稿日期：（2015-12-10；修回日期：2016-01-19）