高效液相色譜法測定重感靈膠囊中安乃近含量

張芳，張波

（內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院，內(nèi)蒙古呼和浩特　010050）

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高效液相色譜法測定重感靈膠囊中安乃近含量

張芳，張波

（內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院，內(nèi)蒙古呼和浩特010050）

摘要：目的建立測定重感靈膠囊中安乃近含量的高效液相色譜（HPLC）法。方法色譜柱采用Eclipse Plus-C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），ODS預(yù)柱；流動(dòng)相為甲醇-0.5%庚烷磺酸鈉醋酸溶液（取庚烷磺酸鈉2.0 g，加冰醋酸10 mL，用水溶解并稀釋至400 mL，V∶V=60∶40），檢測波長264 nm，流速1.0 mL/min。結(jié)果安乃近進(jìn)樣量在0.2～1.2 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系（r=0.999 98，n=6），加樣回收率為100.53%，RSD為1.17%（n=9）。結(jié)論該法結(jié)果準(zhǔn)確，可用于測定重感靈膠囊中安乃近含量。

關(guān)鍵詞：重感靈膠囊；安乃近；含量；高效液相色譜法

重感靈膠囊是由毛冬青、葛根、馬鞭草、板藍(lán)根、青蒿、羌活、石膏、安乃近及馬來酸氯苯那敏與適量輔料加工而成的中西藥復(fù)方制劑，具有解表清熱、疏風(fēng)止痛的作用，用于表邪未解、郁里化熱引起的重癥感冒，癥見惡寒、高熱、頭痛、四肢酸痛、咽痛、鼻塞、咳嗽等。該制劑處方成分較為復(fù)雜，安乃近｛［（1，5-二甲基-2-苯基-3-氧代-2，3-二氫-1H-吡唑-4-基）甲氨基］甲烷磺酸鈉鹽一水合物｝為方中西藥成分，是本品發(fā)揮藥效的主要成分之一［1］。筆者按照國家藥品標(biāo)準(zhǔn)重感靈片（WS3-B-3641-98-2003）自制重感靈膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了研究，建立了測定方中安乃近含量的高效液相色譜法，現(xiàn)報(bào)道如下。

1　儀器與試藥

1.1儀器

Agilent 1100型高效液相色譜儀（美國安捷倫科學(xué)儀器有限公司），包括四元泵、在線脫氣機(jī)、柱溫箱、自動(dòng)進(jìn)樣器、VWD檢測器；HP化學(xué)工作站。

1.2試藥

安乃近對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號為0002-9504，供含量測定用）；重感靈膠囊樣品（自制，批號為130201，130202，130203）；乙腈為色譜純試劑，水為重蒸餾水，其他試劑均為分析純。

2　方法與結(jié)果

2.1色譜條件［2-5］

色譜柱：Eclipse Plus-C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），ODS預(yù)柱；流動(dòng)相：甲醇-0.5%庚烷磺酸鈉醋酸溶液（取庚烷磺酸鈉2.0 g，加冰醋酸10 mL，用水溶解并稀釋至400 mL，V∶V=60∶40）；檢測波長：264 nm；流速：1.0 mL/min；柱溫：室溫；進(jìn)樣量：10 μL。

2.2溶液制備［2-3］

供試品溶液：取裝量差異項(xiàng)下的本品內(nèi)容物，研細(xì)，取約0.4 g，精密稱定，置50 mL容量瓶中，加冰醋酸2 mL和流動(dòng)相43 mL，超聲處理（功率250 W，頻率20 kHz）15 min，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，移至具塞離心管中，離心10 min（轉(zhuǎn)速3 000 r/min），用注射器吸取上清液，注入經(jīng)預(yù)處理的Sep-Pak C18微柱（微柱預(yù)處理，分別用甲醇和水各10 mL沖洗，再注入空氣，盡量將殘留的水驅(qū)除，備用），流出速度為2～3 mL/min，棄去前10 mL的流出液，收集第11～15 mL的流出液，精密量取1 mL，置25 mL容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，在25℃以上室溫放置3 h，即得。

對照品溶液：取安乃近對照品適量，精密稱定，加流動(dòng)相制成每1 mL含40 μg的溶液，在25℃以上室溫放置3 h，即得。

陰性對照品溶液：按處方量制備缺安乃近的陰性樣品，取約0.4 g，精密稱定，按供試品溶液的制備方法制備，即得。

2.3方法學(xué)考察

系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：取供試品溶液、對照品溶液和陰性對照品溶液，在擬訂色譜條件下進(jìn)樣10 μL，記錄色譜圖，見圖1。可見，陰性對照品溶液色譜在安乃近峰位置無相應(yīng)峰出現(xiàn)，且安乃近和其他組分色譜峰可很好地分離，對安乃近的測定無干擾；在與安乃近對照品峰相對應(yīng)的位置上供試品溶液具有相應(yīng)色譜峰，且與相鄰峰的分離度大于1.5；安乃近峰理論板數(shù)（n）超過4 000，拖尾因子（T）為1.03。

圖1　高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察：精密吸取安乃近對照品溶液（質(zhì)量濃度為0.04 g/L）5，10，15，20，25，30 μL分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，測定其峰面積，以峰面積值（A）對進(jìn)樣量（C）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程A=2 555.535 6 C-9.894 8，r=0.999 98（n=6）。結(jié)果表明安乃近進(jìn)樣量在0.2～1.2 μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn)：精密量取同一對照品溶液10μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積。結(jié)果的RSD為0.073%（n=6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液（批號130202），分別于制備0，2，4，6，8 h時(shí)進(jìn)樣。結(jié)果的RSD為0.74% （n=5），表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批樣品（批號130201），依法制備6份供試品溶液，分別進(jìn)樣，測定峰面積并計(jì)算含量。結(jié)果平均含量為91.2%，RSD為0.31%（n=6），表明方法的重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：取已知含量的樣品（批號為130201）約0.2 g，共9份，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別按低、中、高量級加入安乃近對照品溶液（質(zhì)量濃度4 g/L），按供試品溶液制備方法操作，制備加樣回收供試品溶液，依法測定含量，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1　安乃近加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=9）

2.4樣品含量測定

取3批樣品，依法測定樣品含量，結(jié)果見表2。

表2　重感靈膠囊中安乃近的含量測定結(jié)果（n=3）

3　討論

在供試品溶液制備時(shí)，曾分別按原重感靈片國家標(biāo)準(zhǔn)（WS3-B-3641-98-2003）和2010年版《中國藥典（二部）》安乃近有關(guān)物質(zhì)項(xiàng)下方法試驗(yàn)，確定了文中的樣品制備方法。

選擇流動(dòng)相時(shí)，參照2010年版《中國藥典（二部）》安乃近有關(guān)物質(zhì)測定方法及原標(biāo)準(zhǔn)方法，考察了甲醇-0.5%庚烷磺酸鈉醋酸溶液（取庚烷磺酸鈉2.0 g，加冰醋酸10 mL，用水溶解并稀400 mL，V∶V=60∶40），磷酸鹽緩沖液［（磷酸二氫鈉6.0 g，加水1 000 mL，加三乙胺1 mL，用氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至7.0）-甲醇（75∶25）］，結(jié)果前者各成分可得到較好分離。

通過對精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性、回收率試驗(yàn)及樣品中安乃近的含量測定，證明本方法作為該藥品的含量測定方法，能夠保證藥品檢測時(shí)數(shù)據(jù)的真實(shí)性、可靠性，可作為保證藥品質(zhì)量的檢測依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

［1］陰健，郭力弓.中藥現(xiàn)代研究與臨床應(yīng)用［M］.北京：學(xué)苑出版社，1993：626.

［2］WS3-B-3641-98-2003，衛(wèi)生部頒藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑第（十九冊）［S］.

［3］國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典（二部）［M］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：286.

［4］楊興明，李娟.HPLC法測定安乃近滴鼻液中安乃近的含量［J］.中國藥師，2004，7（11）：907.

［5］張紅，王早斌.高效液相色譜法測定安乃近片的含量［J］.中國藥業(yè)，2008，17（15）：33.

中圖分類號：R927.2；R971+.1

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號：1006-4931（2016）07-0041-03

收稿日期：（2015-10-14）