• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    精子形態(tài)可否預(yù)測(cè)精子其他參數(shù)和受精結(jié)局

    2016-06-07 08:39:04戢開麗郭江華梁輝洪關(guān)藝青娟江門市中心醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心廣東江門529030
    中國男科學(xué)雜志 2016年1期

    戢開麗 郭江華 梁輝洪 關(guān)藝青 婁 娟江門市中心醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心(廣東江門 529030)

    ?

    精子形態(tài)可否預(yù)測(cè)精子其他參數(shù)和受精結(jié)局

    戢開麗 郭江華 梁輝洪 關(guān)藝青 婁 娟
    江門市中心醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心(廣東江門 529030)

    摘要目的 探討精子形態(tài)在輔助生殖治療中對(duì)選擇授精方法時(shí)有否預(yù)測(cè)價(jià)值和意義。方法 回顧性分析2012年6月至2015年2月接受輔助生殖治療的1 951周期患者精液資料,根據(jù)《WHO人類精液檢查與處理實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)》(第五版)精子正常形態(tài)率參考值下限為4%,將患者的精子正常形態(tài)率分成3組:A組<1.0% 470周期,B組1%~4% 562周期,C組≥4% 919周期,分別采用常規(guī)體外受精(IVF)或卵胞漿內(nèi)單精子注射(ICSI)以及IVF受精失敗后補(bǔ)救ICSI(RICSI)授精方式,比較3組精子正常形態(tài)與其他精液參數(shù)相關(guān)性,與授精方式、受精率、優(yōu)質(zhì)胚胎率的關(guān)系。結(jié)果 除了頂體酶外,精子濃度、活力、前向運(yùn)動(dòng)率、DNA完整率在3組形態(tài)間都差異極顯著(P<0.01),而且它們與精子正常形態(tài)呈顯著的正相關(guān);授精方式上3組的IVF比例分別是72.3%、86.7%、96.8%,ICSI組27.7%、13.3%、3.2%,3組間授精方式差異極顯著(P<0.01),RICSI比例也隨著精子正常形態(tài)率升高而降低;受精結(jié)局上,只有IVF組3組形態(tài)間受精率(67.0%、70.0%和79.6%)差異極顯著(P<0.01),且和精子正常形態(tài)率趨勢(shì)一致;胚胎質(zhì)量反映在不同授精方式上趨勢(shì)各有不同。結(jié)論 精子正常形態(tài)與其他大部分的精液參數(shù)有正相關(guān)性,影響IVF的受精率,故在輔助生殖治療中對(duì)授精方式選擇有一定指導(dǎo)意義。

    關(guān)鍵詞受精,體外;精子形態(tài);DNA完整率;受精率

    Key woorrddss Fertilization In Vitro;sperm morphology;DNA integrity;fertilization rate

    近年來受環(huán)境和社會(huì)壓力等影響男性的生殖健康呈下降趨勢(shì),據(jù)統(tǒng)計(jì)全球約有10%~15%的不孕不育夫婦,其中近一半是男性因素導(dǎo)致不育,需要尋求輔助生殖技術(shù)幫助。在輔助生殖治療的過程中,精子與卵子結(jié)合是一個(gè)復(fù)雜的過程,影響因素很多,其中精子形態(tài)對(duì)受精率的影響一直存在著爭議。2010年《WHO人類精液檢查與處理實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)(第五版)》[1](以下簡稱WHO第五版)將精子正常形態(tài)率的參考值下限從第四版的15%下調(diào)至4%,這個(gè)重大的變化讓我們重新審視精子正常形態(tài)對(duì)生育力的預(yù)測(cè)。精子正常形態(tài)率低是否影響體外受精(In vitro fertilization,IVF)受精率呢?是否需要把精子正常形態(tài)作為卵胞漿內(nèi)單精子注射(Intracytoplasmic Sperm Injection,ICSI)的指征?目前有關(guān)精子形態(tài)相關(guān)的報(bào)道[2-7]大部分是遵循WHO第四版手冊(cè)的分類標(biāo)準(zhǔn)。本文根據(jù)WHO第五版精子正常形態(tài)率4%的參考值下限,將精子正常形態(tài)率分為3組:<1.0%, 1%~4%和≥4%,以探索精子形態(tài)是否可預(yù)測(cè)精子功能和輔助生殖技術(shù)(ART)治療的受精結(jié)局。

    材料與方法

    一、對(duì)象與分組

    選擇江門市中心醫(yī)院生殖中心2012年6月至2015 年2月接受ART治療1951周期,其中IVF治療的夫婦1 717 周期,ICSI治療的夫婦234周期,入選條件女方≤35歲,并排除全卵不熟和透明帶異常的周期。女方平均年齡(30.3±3.1)歲,男方平均年齡(32.9±4.1)歲。平均不育年限(4.1±2.7)年,其中原發(fā)不孕1173周期,繼發(fā)不孕778周期。按患者的精子正常形態(tài)率分成3組:A組 <1.0% 470周期,B組1%~4% 562周期,C組≥4% 919周期,分別采用常規(guī)IVF或ICSI授精方式。

    二、方法

    (一)促排卵方案

    促排卵采用長方案、短方案、拮抗劑方案等,卵泡發(fā)育成熟后,注射HCG 5 000~ 10 000IU,于35~36h在超聲引導(dǎo)下經(jīng)陰道穿刺取卵。

    (二)精液分析及處理

    禁欲3~7d,手淫法獲取精液,按照WHO第五版操作程序,對(duì)原始精液標(biāo)本進(jìn)行精子的濃度、活率、頂體酶、DNA完整率等常規(guī)檢查和改良巴氏染色法精子形態(tài)學(xué)檢查。正常形態(tài)的精子是頭部光滑呈橢圓形,頂體占40%~70%;中段細(xì)長規(guī)則,長度與頭部相等;主段比中段細(xì),長約45μm[1]。精子正常形態(tài)率≥4%為形態(tài)正常的精子,2%~4%為輕度畸形精子,1~2%為中度畸形精子,<1%重度畸形精子。

    取卵日,精子濃度≤1×106/mL或活力<10%行ICSI,否則行IVF授精。精液采用密度梯度離心+上游法處理,調(diào)整精子濃度為1×106/mL進(jìn)行IVF授精。若處理后濃度低于0.2×106/mL,則改行ICSI。

    (三)體外受精與胚胎移植

    常規(guī)IVF:取卵后2~4h將卵冠丘復(fù)合體加入含精子的100μL受精滴中,3~4h后去除顆粒細(xì)胞,觀察卵子的第二極體排出情況以確定是否受精,如果疑似雙極體(2pb)≤25%,則行補(bǔ)救ICSI(Rescue ICSI,RICSI)。然后轉(zhuǎn)移到卵裂期胚胎培養(yǎng)液中,置于6%CO2、37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng),試劑采用Quinn’s Advantage序貫培養(yǎng)基(SAGE,美國)。

    ICSI:取卵后4~5h將卵冠丘復(fù)合體放在80IU/mL透明質(zhì)酸酶(SAGE,美國)消化30~60s,然后用拆卵針去除顆粒細(xì)胞,在顯微操作儀中行ICSI操作。

    授精后16~18h觀察原核,見雙原核(2PN)為正常受精,第二天、第三天觀察胚胎發(fā)育,根據(jù)發(fā)育速度、卵裂球大小均勻及碎片等情況評(píng)估胚胎質(zhì)量。第三天胚胎細(xì)胞數(shù)在6~9個(gè),碎片≤25%且均一或相對(duì)均勻的為優(yōu)質(zhì)胚胎。選擇第三天細(xì)胞數(shù)多且碎片少的胚胎進(jìn)行移植。

    三、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    用SPSS 18.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析、x2檢驗(yàn)和相關(guān)性分析,P<0.05表示差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    結(jié) 果

    一、我院精子正常形態(tài)率百分位數(shù)分布

    從表1中可見,我院患者群體的精子正常形態(tài)率檢查結(jié)果低于WHO第五版的調(diào)查數(shù)據(jù)。

    表1  我院精子正常形態(tài)率百分位數(shù)與WWHHOO第五版比較

    二、3組患者的基本情況比較

    對(duì)A組、B組、C組的女方年齡、男方年齡、不孕年限、基礎(chǔ)FSH值、基礎(chǔ)竇卵泡數(shù)和獲卵數(shù)等基本情況進(jìn)行比較,3組間均無顯著差異(P>0.05)(表2)。

    表2  3組患者的基本情況比較

    三、3組患者的精液常規(guī)比較和相關(guān)性分析

    A組、B組、C組3組形態(tài)的精液常規(guī)比較, 各組間濃度、活力、前向運(yùn)動(dòng)率、頂體酶、DNA完整率均差異顯著(P<0.01);而且除了頂體酶外,隨著精子正常形態(tài)率的升高,其他精液參數(shù)都呈上升趨勢(shì)。精子正常形態(tài)與其他精液參數(shù)的相關(guān)性分析也發(fā)現(xiàn),除了頂體酶外,都呈現(xiàn)正相關(guān),(表3)。

    四、3組患者的授精方式比較

    3組間IVF和ICSI的授精方式差異顯著(P<0.01),隨著精子正常形態(tài)率的升高,ICSI比例逐漸降低,A 組ICSI比例27.7%最高,C組極少部分行ICSI,只有3.2%。RICSI授精方式中,其比例也隨著正常形態(tài)率升高而降低,(表4)。

    表3  3組形態(tài)患者的精液常規(guī)比較和相關(guān)性分析

    表4  3組患者的授精方式比較

    五、3組形態(tài)患者受精結(jié)局和胚胎質(zhì)量比較

    在IVF組中,3組間受精率差異極顯著(P<0.01),隨著精子正常形態(tài)率的升高,受精率也逐漸提高,卵裂率差異不顯著,優(yōu)質(zhì)胚胎率差異極顯著(P<0.01),但其趨勢(shì)與精子正常形態(tài)相反。在ICSI組中,3組間受精率差異顯著(P<0.05),但受精率與精子正常形態(tài)率的趨勢(shì)不一致,卵裂率和優(yōu)質(zhì)胚胎率都差異不顯著(P>0.05)。在RICSI組中,3組間的受精率和優(yōu)質(zhì)胚胎率都差異不顯著(P>0.05),(表5)。

    表5  3組患者受精結(jié)局和胚胎質(zhì)量比較

    討 論

    受精過程中精卵結(jié)合是一個(gè)復(fù)雜的過程,包括卵母細(xì)胞成熟、精子成熟、精子獲能、精子穿過透明帶、配子融合、卵子激活等等,任何一個(gè)環(huán)節(jié)出錯(cuò)都可能導(dǎo)致受精失敗。在許多受精失敗的案例里,有時(shí)我們很難判定是卵子還是精子的原因。Ombelet等[8]認(rèn)為精子形態(tài)對(duì)精卵結(jié)合很重要,但一旦精子到達(dá)卵胞質(zhì)就失去預(yù)測(cè)的價(jià)值了,他還建議精確和嚴(yán)格的精子形態(tài)檢查對(duì)受精潛能是有預(yù)測(cè)價(jià)值的。這符合WHO第五版對(duì)精子形態(tài)正常率的修訂。但迄今為止,精子形態(tài)的預(yù)測(cè)作用仍存在爭議,許多研究[2-4,9-11]表明精子形態(tài)是影響IVF結(jié)局的一個(gè)重要指標(biāo),而有些研究[7,12-13]又認(rèn)為精子形態(tài)既不影響受精率也不影響妊娠結(jié)局。

    本研究結(jié)果顯示精子形態(tài)影響其他大部分精液常規(guī)的參數(shù),如精子濃度、活力、前向運(yùn)動(dòng)率、DNA完整率等,精子正常形態(tài)率與它們都呈顯著的正相關(guān)。Gandini 等[14]也認(rèn)為形態(tài)缺陷伴有DNA碎片的增加。正因?yàn)槿绱耍?組精子形態(tài)的ICSI比例、RICSI比例也隨著精子正常形態(tài)率升高而逐漸下降。IVF組中,3組間受精率差異顯著(P<0.01),并且隨著精子正常形態(tài)率的升高而上升,說明精子形態(tài)一定程度上影響IVF的受精(其結(jié)果與大部分報(bào)道[2-5,11]一致)。而在ICSI組中,3組間受精率雖然差異顯著(P<0.05),但與精子正常形態(tài)率的趨勢(shì)不一致,這可能是3組間ICSI的樣本量差異有關(guān),在C組中,ICSI比例只有3.2%(29周期),而A組ICSI比例是27.7%(130周期)。另外Li等[11]認(rèn)為胚胎學(xué)家在顯微鏡下盡可能選擇看起來形態(tài)正常的精子進(jìn)行ICSI操作,故受精的精子不能代表精子樣本總體形態(tài)情況,也可能是ICSI受精率與精子正常形態(tài)率不是一個(gè)規(guī)律性的變化。

    與精子形態(tài)對(duì)IVF沒有預(yù)測(cè)作用的報(bào)道比較發(fā)現(xiàn),第一個(gè)原因,可能跟IVF和ICSI的比例不同有關(guān),有些國家使用ICSI不到總周期的30%,有些超過50%甚至高達(dá)到90%以上,如美國2013年ICSI比例是67%[15],英國是52.6%[16]。ICSI比例的加大,IVF受精率受精子形態(tài)影響就弱化了。本文ICSI和RICSI的總比例是23.6%,不到30%。第二個(gè)原因,可能精子形態(tài)分組不一樣,王晟等[7]把精子正常形態(tài)率分為5%~10%、10%~15%和≥15% 3組,甚至沒有≤5%的數(shù)據(jù),故得出的結(jié)論是當(dāng)正常形態(tài)精子百分率>5%時(shí),精子形態(tài)對(duì)常規(guī)IVF的治療結(jié)局沒有影響。本文按照WHO第五版的標(biāo)準(zhǔn)和趨勢(shì),把精子形態(tài)分組細(xì)化,分節(jié)點(diǎn)為1%、4%,在極低的精子正常形態(tài)率中,對(duì)IVF受精的影響就凸顯出來了。

    胚胎質(zhì)量上無論IVF組還是ICSI組,優(yōu)質(zhì)胚胎率趨勢(shì)與精子正常形態(tài)率不相同,說明精子形態(tài)可能不影響胚胎質(zhì)量。但是即使本研究顯示精子形態(tài)對(duì)IVF受精率有影響,但是在A組(<1%)中受精率是67.0%,仍然較衛(wèi)生部規(guī)定的65%高[17]。故建議,精子形態(tài)在指導(dǎo)授精方式選擇的時(shí)候,還要結(jié)合精液常規(guī)的其他參數(shù),如DNA完整性,以及精子染色質(zhì)凝聚性、精子凋亡等等。

    另外,高洋等[2]提出雖然精子形態(tài)可以預(yù)測(cè)IVF受精率,但受實(shí)驗(yàn)條件、技術(shù)人員主觀差異的影響,各生殖中心應(yīng)建立自己的正常形態(tài)cut-off值作為常規(guī)IVF選擇。與WHO第五版比較,本中心精子正常形態(tài)率的百分位數(shù)分布顯示,整體精子正常形態(tài)率低很多,WHO第五版第50個(gè)百分位是15.0%,我們是3.86%,這都提示在精子正常形態(tài)的診斷中技術(shù)人員主觀性可能起了非常大的影響。印度為了降低技術(shù)人員的主觀差異專門組織174名實(shí)驗(yàn)工作人員進(jìn)行精子形態(tài)培訓(xùn)[18],這是非常必要的。此外,精子形態(tài)檢查還具有多態(tài)性,Nikolettos等[19]指出用光學(xué)顯微鏡行精子檢查只能提供有限的信息,精子的超微結(jié)構(gòu)更能說明形態(tài)對(duì)精子的影響。因此,胞質(zhì)內(nèi)形態(tài)學(xué)選擇精子注射(IMSI)和活動(dòng)精子細(xì)胞器形態(tài)學(xué)檢查(MSOME)技術(shù)的應(yīng)運(yùn)而生,希望能改善ICSI的臨床結(jié)局。

    總之,精子形態(tài)一定程度上預(yù)示著精子的功能,影響輔助生殖治療中IVF的受精結(jié)局。但在選擇IVF還是ICSI的授精方式時(shí),最好結(jié)合其他精液常規(guī),如精子濃度、活力和DNA完整率等,防止IVF完全不受精或ICSI的過度使用。

    參考文獻(xiàn)

    1 世界衛(wèi)生組織.谷翊群譯.世界衛(wèi)生組織人類精液檢查與處理實(shí)驗(yàn)室手冊(cè).北京:人民衛(wèi)生出版社,2011:45-86,192

    2 高洋,劉東云,張孝東,等.原發(fā)不育精子形態(tài)對(duì)常規(guī)體外受精(IVF)結(jié)局的影響.重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào) 2010;35(9):1427-1429

    3 張科,朱文兵,范立青,等.精子形態(tài)正常率與體外受精妊娠結(jié)局的關(guān)系.中南大學(xué)學(xué)報(bào)?醫(yī)學(xué)版 2010;35(7):738-742

    4 王賀,周亮,石敏,等.不育男性精子形態(tài)與體外受精妊娠結(jié)局的相關(guān)性研究.中國男科學(xué)雜志 2012;26(1):23-26

    5 陳靜華,張寧鋒,王文軍,等.精子正常形態(tài)百分率與體外受精胚胎移植臨床結(jié)局的相關(guān)性分析.中國男科學(xué)雜志 2011;25(12):34-37,41

    6 乜照燕,張娜,吳海峰,等.精子畸形程度對(duì)常規(guī)體外受精-胚胎移植治療的影響.中華泌尿外科雜志 2010;31(6):424-427

    7 王晟,鄶艷榮,賀占舉,等.精子形態(tài)對(duì)體外受精-胚胎移植治療結(jié)局的影響.中國性科學(xué) 2013;22 (3):3-6,12

    8 Ombelet W,Menkveld R,Kruger TF,et al.Sperm morphology assessment:historical review in relation to fertility.Hum Reprod Updat 1995;1(6):543-557

    9 張歡,潘承雙,吳永根,等.供精液參數(shù)對(duì)供精常規(guī)體外受精臨床結(jié)果的影響.生殖醫(yī)學(xué)雜志 2012;21(6):573-577

    10 Menkveld R,Holleboom CA,Rhemrev JP.Measurement and signifi cance of sperm morphology.Asian J Androl 2011;13(1):59-68

    11 Li B,Ma Y,Huang,Huang J,et al.Probing the effect of human normal sperm morphology rate on cycle outcomes and assisted reproductive methods selection.PLoS One 2014;9(11):e113392

    12 Ghirelli-Filho M1,Mizrahi FE,Pompeo AC,et al.Infl uence of strict sperm morphology on the results of classic in vitro fertilization.Int Braz J Urol 2012;38(4):519-528

    13 Van den Hoven L,Hendriks JC,Verbeet JG,et al.Status of sperm morphology assessment:an evaluation of methodology and clinical value.Fertil Steril 2015;103(1):53-58

    14 Gandini L,Lombardo F,Paoli D,et al.study of apoptotic DNA fragmentationg in human spermatozoa.Hum Reprod 2001;15(4):830-839

    15 The Society for Assisted Reproductive Technology.Clinic Summary Report[EB/OL].https://www.sartcorsonline.com/.2015

    16 Human Fertilization Embryology Authority.Fertility treatment in 2013:trends and fi gures[EB/OL].http:// www.hfea.gov.uk/.2015

    17 中華人民共和國衛(wèi)生部.人類輔助生殖技術(shù)規(guī)范.衛(wèi)科教發(fā)[2003]176號(hào)文件,2003.6.27

    18 Franken DR,Joshi C.Sperm morphology training in India.Andrologia 2015;47(8):932-934

    19 Nikolettos N,Küpker W,Demirel C,et al.Fertilization potential of spermatozoa with abnormal morphology.Hum Reprod 1999;14 Suppl 1:47-70

    (2015-06-15收稿)

    ·臨床經(jīng)驗(yàn)·

    Effects of sperm morphology on sperm function and fertilization outcomes

    Ji Kaili,Guo Jianghua,Liang Huihong,Guan Yiqing,Lou Juan
    Center for Assisted Reproduction,Jiangmen Central Hospital,Jiangmen 529030,Guangdong,China

    AbstractObjectivee To investigate the infl uence of sperm morphology on sperm function and fertilization outcomes of in vitro fertilization (IVF),and explore its prediction value in choosing treatment methods on assisted reproductive technology(ART).Metthhooddss This study retrospectively analyzed 1951 cycles of infertile couples treated with conventional IVF,ICSI or rescue ICSI(RICSI) from June 2012 to February 2015,and according to 4% as the lower reference limits of sperm normal morphology provided by WHO laboratory manual for the Examination and processing of human semen (5th Edition),the cycles were divided into three groups:470 cycles with values<1.0% in A group;562 cycles with values ≥1.0% and <4% in B group;and 919 cycles with values ≥4.0% in C group.Ressuullttss There were extremely signifi cant differences in sperm concentration,total motility,progressive motility and DNA integrity among three groups (P<0.01),but no signifi cant difference in acrosin activity.There were positive correlations between sperm normal morphology and other parameters.Meanwhile,the percentage of IVF was 72.3%,86.7% and 96.8%,and the percentage of ICSI was 27.7%,13.3% and 3.2%,respectively,there were statistically signifi cant differences in treatment methods (P<0.01).the percentage of RICSI decreased by sperm normal morphology.Fertilization rate (67.0%,70.0% and 79.6%) had extremely signifi cant difference only in conventional IVF group(P<0.01),and with the increase in sperm normal morphology,fertilization rate increased;there was no consistent trend in embryo quality among different insemination ways.Concluussiioonn There is positive correlation between sperm normal morphology and most semen parameters,and sperm morphology infl uences IVF fertilization rate,which is some valuable indicatior to select IVF or ICSI on ART treatment.

    doi:10.3969/j.issn.1008-0848.2016.01.09

    中圖分類號(hào)R 321-33

    国模一区二区三区四区视频| 国内精品一区二区在线观看| 日韩视频在线欧美| 免费看日本二区| 久久草成人影院| 久久九九热精品免费| 亚洲丝袜综合中文字幕| 亚洲一区高清亚洲精品| 精品免费久久久久久久清纯| 99久久精品热视频| 伊人久久精品亚洲午夜| 九色成人免费人妻av| 亚洲国产欧美人成| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 黄色视频,在线免费观看| 久久久久久国产a免费观看| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 秋霞在线观看毛片| 国产精品99久久久久久久久| 亚洲欧美日韩无卡精品| 偷拍熟女少妇极品色| 最近的中文字幕免费完整| 亚洲天堂国产精品一区在线| 人人妻人人看人人澡| 亚洲电影在线观看av| 看非洲黑人一级黄片| 黄色视频,在线免费观看| 99热全是精品| 亚洲,欧美,日韩| 99国产极品粉嫩在线观看| 国国产精品蜜臀av免费| 日韩亚洲欧美综合| 看片在线看免费视频| av在线蜜桃| 日韩三级伦理在线观看| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 人人妻人人看人人澡| 国产三级中文精品| 精品久久久久久久久av| 美女内射精品一级片tv| 最近的中文字幕免费完整| 男人和女人高潮做爰伦理| 亚洲av一区综合| 国产成人a∨麻豆精品| a级毛色黄片| 国产色爽女视频免费观看| 久久久久免费精品人妻一区二区| 欧美区成人在线视频| 国产av在哪里看| 久久久成人免费电影| 色综合站精品国产| 欧美在线一区亚洲| 能在线免费观看的黄片| 亚洲久久久久久中文字幕| 欧美高清成人免费视频www| 亚洲av二区三区四区| 久久精品人妻少妇| 91麻豆精品激情在线观看国产| 成人漫画全彩无遮挡| 插阴视频在线观看视频| 欧美丝袜亚洲另类| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 网址你懂的国产日韩在线| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 久久久久久久久大av| 久久久久久大精品| 亚洲精品久久国产高清桃花| 婷婷色av中文字幕| 中国美白少妇内射xxxbb| 色哟哟哟哟哟哟| 哪个播放器可以免费观看大片| 床上黄色一级片| 99国产精品一区二区蜜桃av| 国产精华一区二区三区| 午夜爱爱视频在线播放| 精品人妻熟女av久视频| 国产精品伦人一区二区| 精品久久久久久成人av| 久久这里有精品视频免费| 国产精品乱码一区二三区的特点| 亚洲第一区二区三区不卡| 国产 一区精品| 亚洲国产欧美人成| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 特级一级黄色大片| 黄片wwwwww| 亚洲国产精品成人综合色| 中文字幕制服av| 国产精品.久久久| 国产高清激情床上av| 一区二区三区免费毛片| 免费观看精品视频网站| 又粗又爽又猛毛片免费看| 亚洲精品国产成人久久av| 秋霞在线观看毛片| 国产午夜精品论理片| 欧美日韩精品成人综合77777| 卡戴珊不雅视频在线播放| 内地一区二区视频在线| 永久网站在线| 欧美一区二区亚洲| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 成人特级黄色片久久久久久久| 日韩三级伦理在线观看| 色视频www国产| 精品少妇黑人巨大在线播放 | 亚洲精品自拍成人| 一区二区三区四区激情视频 | 久久精品影院6| 国产精品久久久久久精品电影小说 | 午夜爱爱视频在线播放| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 久久久成人免费电影| 99久久精品国产国产毛片| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| а√天堂www在线а√下载| 亚洲av电影不卡..在线观看| 亚洲第一区二区三区不卡| 亚洲国产欧美人成| 男人狂女人下面高潮的视频| 亚洲av第一区精品v没综合| 日韩亚洲欧美综合| 日韩国内少妇激情av| 最新中文字幕久久久久| 精品欧美国产一区二区三| 亚洲在线观看片| 欧美变态另类bdsm刘玥| 99国产精品一区二区蜜桃av| 久久久久性生活片| 免费观看精品视频网站| 国产午夜福利久久久久久| 日日啪夜夜撸| 精品人妻偷拍中文字幕| 我的老师免费观看完整版| 白带黄色成豆腐渣| 久久精品91蜜桃| 美女大奶头视频| 爱豆传媒免费全集在线观看| 两个人视频免费观看高清| 久久99热6这里只有精品| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 在线观看美女被高潮喷水网站| 亚洲成人精品中文字幕电影| 3wmmmm亚洲av在线观看| 国产视频首页在线观看| 美女cb高潮喷水在线观看| 晚上一个人看的免费电影| 亚洲精华国产精华液的使用体验 | 免费人成视频x8x8入口观看| 日本一本二区三区精品| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 性插视频无遮挡在线免费观看| 成人美女网站在线观看视频| 久久精品人妻少妇| 性插视频无遮挡在线免费观看| 国产色婷婷99| 国产真实伦视频高清在线观看| 中国美女看黄片| 精品国内亚洲2022精品成人| 美女大奶头视频| 国产成人影院久久av| 国产伦精品一区二区三区四那| 久久99蜜桃精品久久| 性插视频无遮挡在线免费观看| 青春草视频在线免费观看| 亚洲精品自拍成人| 男人的好看免费观看在线视频| 国产激情偷乱视频一区二区| 亚洲欧美成人综合另类久久久 | 一级毛片aaaaaa免费看小| 国产亚洲5aaaaa淫片| 久久6这里有精品| 观看免费一级毛片| 亚洲自拍偷在线| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 免费一级毛片在线播放高清视频| 精品人妻视频免费看| 男女视频在线观看网站免费| 午夜免费男女啪啪视频观看| 色吧在线观看| 男人狂女人下面高潮的视频| 国产高潮美女av| 免费大片18禁| 国内精品久久久久精免费| 最好的美女福利视频网| 亚洲av免费高清在线观看| 日韩在线高清观看一区二区三区| 亚洲av男天堂| 性欧美人与动物交配| 小说图片视频综合网站| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 免费看日本二区| 天堂中文最新版在线下载 | av专区在线播放| 日本色播在线视频| 精品久久久久久久末码| 亚洲人与动物交配视频| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 国内精品宾馆在线| 成人欧美大片| 在线天堂最新版资源| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 一区二区三区高清视频在线| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 欧美日本视频| 国产亚洲91精品色在线| 国产久久久一区二区三区| 男的添女的下面高潮视频| 亚洲七黄色美女视频| 中文字幕久久专区| 国产真实伦视频高清在线观看| 神马国产精品三级电影在线观看| 久久久久性生活片| 桃色一区二区三区在线观看| 一本久久精品| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线 | 一区二区三区免费毛片| av女优亚洲男人天堂| 国产精品久久电影中文字幕| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 亚洲综合色惰| 亚洲av不卡在线观看| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 日韩成人av中文字幕在线观看| 最近最新中文字幕大全电影3| 中文欧美无线码| 午夜免费激情av| 久久久久久久久久成人| 亚洲国产欧美人成| 国产色婷婷99| 久久中文看片网| 久久精品久久久久久久性| 九九在线视频观看精品| 免费搜索国产男女视频| 国产伦理片在线播放av一区 | 如何舔出高潮| 2022亚洲国产成人精品| 欧美色视频一区免费| 免费无遮挡裸体视频| 精品久久久久久久久av| 天堂网av新在线| 婷婷色综合大香蕉| 一进一出抽搐动态| 永久网站在线| 午夜免费激情av| 国产精品乱码一区二三区的特点| 一级二级三级毛片免费看| 国产乱人偷精品视频| 91久久精品电影网| 能在线免费看毛片的网站| 内射极品少妇av片p| 亚洲av成人av| 日韩欧美国产在线观看| 国产高清激情床上av| 青春草国产在线视频 | 午夜福利在线观看吧| 欧美高清成人免费视频www| 爱豆传媒免费全集在线观看| 精品人妻一区二区三区麻豆| 亚洲欧美精品专区久久| 热99re8久久精品国产| 美女脱内裤让男人舔精品视频 | 免费一级毛片在线播放高清视频| 亚洲18禁久久av| 人妻久久中文字幕网| 边亲边吃奶的免费视频| 一本久久中文字幕| 精品不卡国产一区二区三区| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 国产亚洲精品av在线| 国产成人精品婷婷| 午夜精品一区二区三区免费看| 少妇被粗大猛烈的视频| 国产v大片淫在线免费观看| 人妻夜夜爽99麻豆av| 国产黄片视频在线免费观看| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 国产三级中文精品| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 国产探花在线观看一区二区| 国产三级中文精品| 欧美成人a在线观看| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 国产成人精品久久久久久| 久久久久久久午夜电影| 国产69精品久久久久777片| 精品不卡国产一区二区三区| 国产成人福利小说| 少妇熟女欧美另类| 日本熟妇午夜| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 校园人妻丝袜中文字幕| 久久精品久久久久久久性| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 亚洲成人久久性| 一边亲一边摸免费视频| 99久国产av精品| 久久欧美精品欧美久久欧美| 国产淫片久久久久久久久| 国产高清不卡午夜福利| 亚洲精品影视一区二区三区av| 日韩国内少妇激情av| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 亚洲人成网站高清观看| 国产精品人妻久久久影院| 九九爱精品视频在线观看| 免费观看a级毛片全部| 在线免费观看不下载黄p国产| 欧美三级亚洲精品| 亚洲va在线va天堂va国产| 99久久九九国产精品国产免费| 偷拍熟女少妇极品色| 亚洲人成网站在线观看播放| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 看片在线看免费视频| 又粗又硬又长又爽又黄的视频 | 3wmmmm亚洲av在线观看| 免费看日本二区| 欧美日本亚洲视频在线播放| 啦啦啦啦在线视频资源| 久久99蜜桃精品久久| 美女 人体艺术 gogo| 日本黄大片高清| 能在线免费看毛片的网站| 久久久久久久久久久免费av| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 九草在线视频观看| 99久久无色码亚洲精品果冻| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 小说图片视频综合网站| 久久午夜福利片| 网址你懂的国产日韩在线| 狠狠狠狠99中文字幕| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 女同久久另类99精品国产91| 国产成人影院久久av| 亚洲成人av在线免费| 日日摸夜夜添夜夜爱| 久久鲁丝午夜福利片| 一级毛片久久久久久久久女| 伊人久久精品亚洲午夜| 99国产精品一区二区蜜桃av| 亚洲经典国产精华液单| 99久久无色码亚洲精品果冻| 国产高清不卡午夜福利| 美女cb高潮喷水在线观看| 美女脱内裤让男人舔精品视频 | 人妻制服诱惑在线中文字幕| 欧美在线一区亚洲| 国产高清不卡午夜福利| 春色校园在线视频观看| av在线蜜桃| 老司机影院成人| 久久精品91蜜桃| 男人的好看免费观看在线视频| 女同久久另类99精品国产91| 午夜亚洲福利在线播放| 最近最新中文字幕大全电影3| 高清日韩中文字幕在线| 极品教师在线视频| 国产三级中文精品| 欧美xxxx性猛交bbbb| 一进一出抽搐gif免费好疼| av女优亚洲男人天堂| 国产高潮美女av| 国产人妻一区二区三区在| 美女脱内裤让男人舔精品视频 | 国产日韩欧美在线精品| 身体一侧抽搐| 综合色av麻豆| 国产老妇伦熟女老妇高清| 99热精品在线国产| 国产爱豆传媒在线观看| 免费人成视频x8x8入口观看| 丝袜喷水一区| 亚洲真实伦在线观看| 午夜老司机福利剧场| 人人妻人人看人人澡| 国产私拍福利视频在线观看| 日本黄色片子视频| 免费观看在线日韩| 狠狠狠狠99中文字幕| 九草在线视频观看| 一边摸一边抽搐一进一小说| 全区人妻精品视频| 男人和女人高潮做爰伦理| 两个人的视频大全免费| 久久精品夜色国产| 深夜a级毛片| 久99久视频精品免费| 欧美高清成人免费视频www| 99久久人妻综合| 白带黄色成豆腐渣| 亚洲av免费在线观看| 青春草国产在线视频 | 五月伊人婷婷丁香| 能在线免费观看的黄片| www.av在线官网国产| 床上黄色一级片| 国产精品永久免费网站| 一进一出抽搐gif免费好疼| 国产高清有码在线观看视频| 成人午夜精彩视频在线观看| 国产一区二区在线观看日韩| 老司机影院成人| 九草在线视频观看| 变态另类丝袜制服| 久久久久久久久久久丰满| 国产精品福利在线免费观看| 国产精品野战在线观看| 97在线视频观看| 午夜福利成人在线免费观看| 国产极品精品免费视频能看的| 欧美一区二区亚洲| 免费av观看视频| 日韩三级伦理在线观看| 在线播放国产精品三级| 男女啪啪激烈高潮av片| 精品久久久久久久末码| 亚洲国产精品合色在线| 精品久久国产蜜桃| 国产精品久久电影中文字幕| 国产精品一区二区性色av| 亚洲高清免费不卡视频| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 一级毛片久久久久久久久女| 色5月婷婷丁香| 免费大片18禁| 欧美人与善性xxx| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 亚洲成av人片在线播放无| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 赤兔流量卡办理| 亚洲欧洲日产国产| 免费人成在线观看视频色| 国产成人福利小说| 国产激情偷乱视频一区二区| 变态另类丝袜制服| 成人欧美大片| 成人特级av手机在线观看| 99久久精品一区二区三区| 亚洲av成人av| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| АⅤ资源中文在线天堂| 成人欧美大片| 欧美性猛交黑人性爽| 看黄色毛片网站| 综合色av麻豆| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 日日啪夜夜撸| 99热6这里只有精品| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 久久这里只有精品中国| 在线播放国产精品三级| 国产av不卡久久| 久久亚洲国产成人精品v| 日本爱情动作片www.在线观看| 国产黄片美女视频| av女优亚洲男人天堂| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 免费黄网站久久成人精品| 国产精品人妻久久久影院| 国产成人午夜福利电影在线观看| 日韩成人av中文字幕在线观看| 波野结衣二区三区在线| 好男人在线观看高清免费视频| 久久久午夜欧美精品| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 日韩欧美三级三区| 国产亚洲精品av在线| 一个人观看的视频www高清免费观看| 天堂中文最新版在线下载 | 在线播放无遮挡| 91久久精品国产一区二区成人| 欧美区成人在线视频| 熟女人妻精品中文字幕| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 久久精品国产亚洲av天美| 五月玫瑰六月丁香| 亚洲,欧美,日韩| 能在线免费看毛片的网站| 国产乱人视频| 中文字幕av成人在线电影| 麻豆av噜噜一区二区三区| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 国产探花在线观看一区二区| 日本av手机在线免费观看| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 成人av在线播放网站| 成人三级黄色视频| 国产在线精品亚洲第一网站| 青春草亚洲视频在线观看| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 欧美色视频一区免费| 亚洲欧美日韩无卡精品| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久 | 亚洲国产欧洲综合997久久,| 伦精品一区二区三区| 嫩草影院入口| 久久精品人妻少妇| 亚洲不卡免费看| 99在线视频只有这里精品首页| 日韩一本色道免费dvd| 嘟嘟电影网在线观看| 97超视频在线观看视频| 免费av观看视频| 免费搜索国产男女视频| 1000部很黄的大片| 国产单亲对白刺激| 看免费成人av毛片| 亚洲精品自拍成人| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 欧美日韩综合久久久久久| 搡女人真爽免费视频火全软件| 色播亚洲综合网| 日韩成人伦理影院| 精品一区二区免费观看| 一本一本综合久久| 国产精品99久久久久久久久| 国产一区二区在线观看日韩| 熟女人妻精品中文字幕| 日韩,欧美,国产一区二区三区 | 精品一区二区三区人妻视频| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 99久久人妻综合| 亚洲精品自拍成人| 一区二区三区免费毛片| 青春草视频在线免费观看| 亚洲综合色惰| 国产成人aa在线观看| 国产高清不卡午夜福利| 国产黄片视频在线免费观看| 国产午夜精品一二区理论片| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 少妇人妻精品综合一区二区 | av.在线天堂| 青青草视频在线视频观看| 久久精品国产亚洲av天美| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 好男人在线观看高清免费视频| 欧美激情国产日韩精品一区| 久久久久久国产a免费观看| 国产综合懂色| 亚洲欧美精品专区久久| 午夜爱爱视频在线播放| 亚洲欧美精品自产自拍| 六月丁香七月| 天天一区二区日本电影三级| 国产精品三级大全| 老女人水多毛片| 国产一区二区在线观看日韩| 99在线视频只有这里精品首页| 亚洲在久久综合| 国产av不卡久久| 99久久成人亚洲精品观看| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 99久国产av精品国产电影| 波野结衣二区三区在线| 久久久精品94久久精品| 乱码一卡2卡4卡精品| 草草在线视频免费看| 国产精品久久久久久久久免| 国产爱豆传媒在线观看| 日韩高清综合在线| 国产伦一二天堂av在线观看| 久久久久久久久久黄片| 久久99热6这里只有精品| 国内精品美女久久久久久| 国产黄色小视频在线观看| 国产激情偷乱视频一区二区| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 麻豆av噜噜一区二区三区| 寂寞人妻少妇视频99o| 一区二区三区免费毛片| 搞女人的毛片| 我要看日韩黄色一级片| 国产日韩欧美在线精品| 久久中文看片网| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 少妇被粗大猛烈的视频| 亚洲av不卡在线观看| 国产一区二区三区av在线 | 九草在线视频观看| 久久综合国产亚洲精品| 亚洲三级黄色毛片| av免费在线看不卡| 别揉我奶头 嗯啊视频| 亚洲成人中文字幕在线播放| 一级黄片播放器| 日本免费一区二区三区高清不卡| 一本久久精品| 国产精品一区二区三区四区免费观看| av在线天堂中文字幕| 国产午夜精品一二区理论片| 亚洲18禁久久av| 久久精品国产亚洲av天美| 男人舔女人下体高潮全视频| 成人二区视频| 少妇人妻一区二区三区视频| 在线免费观看不下载黄p国产| 男的添女的下面高潮视频| 国产真实乱freesex| 国内精品美女久久久久久| 亚洲精品国产av成人精品| 在线a可以看的网站| 毛片一级片免费看久久久久| 不卡视频在线观看欧美| 亚洲av一区综合| 国产成人午夜福利电影在线观看| 亚洲精品粉嫩美女一区|