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    脂聯(lián)素在兔主動(dòng)脈動(dòng)脈粥樣硬化斑塊內(nèi)的表達(dá)研究*

    2016-06-04 07:02:42西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院心內(nèi)科西安710061王芝榮
    陜西醫(yī)學(xué)雜志 2016年1期
    關(guān)鍵詞:脂聯(lián)素主動(dòng)脈硬化

    西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院心內(nèi)科(西安710061) 王芝榮 舒 娟

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    脂聯(lián)素在兔主動(dòng)脈動(dòng)脈粥樣硬化斑塊內(nèi)的表達(dá)研究*

    西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院心內(nèi)科(西安710061)王芝榮舒娟

    摘要目的:探討脂聯(lián)素在兔動(dòng)脈粥樣硬化斑塊內(nèi)的分布特點(diǎn)。方法:選擇動(dòng)脈粥樣硬化新西蘭兔12只,對(duì)照組12只,處死每組動(dòng)物后取出主動(dòng)脈,觀察脂聯(lián)素在各組動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中的表達(dá)。結(jié)果:動(dòng)脈粥樣硬化兔血管壁脂聯(lián)素蛋白表達(dá)均顯著低于正常對(duì)照組(P<0.05)。結(jié)論:脂聯(lián)素蛋白在動(dòng)脈粥樣硬化兔血管壁表達(dá)顯著減低,脂聯(lián)素蛋白表達(dá)水平上調(diào)可抑制動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展。

    主題詞脈動(dòng)硬化/診斷細(xì)胞因子類/代謝膽固醇/代謝胰島素抗體 動(dòng)物,實(shí)驗(yàn)兔@脂聯(lián)素

    動(dòng)脈粥樣硬化(Atherosclerosis,AS)是一種大、中型動(dòng)脈血管的慢性非特異性炎癥病變,也是目前公認(rèn)為人群死亡的主要原因。脂聯(lián)素(Adiponectin,APN)是一個(gè)與胰島素抵抗關(guān)系最緊密的特異性細(xì)胞因子,由脂肪組織所表達(dá)和分泌,其功能為抑制脂質(zhì)的聚集、使巨噬細(xì)胞對(duì)脂質(zhì)吞噬減少、進(jìn)而抑制巨噬細(xì)胞向泡沫細(xì)胞轉(zhuǎn)化[1],從而延緩動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生、發(fā)展[2]。本研究擬探討兔動(dòng)脈粥樣硬化斑塊內(nèi)ANP表達(dá)的特點(diǎn),為人類動(dòng)脈粥樣硬化的預(yù)防和治療提供研究基礎(chǔ)。

    材料與方法

    1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及藥品選擇動(dòng)脈粥樣硬化新西蘭兔12只,對(duì)照組12只,均為雄性,1月齡,體重1.4~1.7kg,購(gòu)自西安交通大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。脂聯(lián)素抗體(Anti-Adiponectin)購(gòu)自北京博奧森生物技術(shù)有限公司。

    2標(biāo)本取材及留取用3%戊巴比妥鈉(30mg/kg)全身麻醉實(shí)驗(yàn)動(dòng)物后空氣栓塞處死動(dòng)物,取出各組動(dòng)物主動(dòng)脈,去除血管外組織,生理鹽水沖洗后用中性甲醛液固定。

    3免疫組化特異性染色免疫組織化學(xué)染色法觀察主動(dòng)脈血管內(nèi)皮脂聯(lián)素表達(dá)水平。結(jié)果判定:血管壁脂聯(lián)素蛋白的表達(dá)陽(yáng)性結(jié)果為血管壁染成棕黃色,顯微鏡顯影系統(tǒng)采集圖像,選擇血管壁隨機(jī)取3個(gè)視野(×400),計(jì)算機(jī)自動(dòng)測(cè)量并計(jì)算陽(yáng)性信號(hào)積分光密度(A值)。

    4 Western blot檢測(cè)主動(dòng)脈脂聯(lián)素蛋白的表達(dá)提取總蛋白,用BCA試劑盒測(cè)定蛋白總濃度及變性。以50ug/孔總蛋白上樣,行SDS-PAGE凝膠電泳,分離蛋白后轉(zhuǎn)膜,加入一抗(1∶250鼠抗兔ANP單克隆抗體或者1∶1000鼠抗兔β-actin)4℃孵育過(guò)夜。TBST浸洗后加入二抗(羊抗鼠IgG,1∶1000稀釋)4℃孵育過(guò)夜。應(yīng)用凝膠掃描成像系統(tǒng)中進(jìn)行掃描分析,以β-actin作為內(nèi)參。

    5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件處理所有數(shù)據(jù),對(duì)滿足正態(tài)分布的計(jì)量資料兩組間比較采用t檢驗(yàn),用Pearson法行相關(guān)分析,以P<0.05為有顯著性差異,P<0.01為有極顯著性差異。

    結(jié)果

    1兩組間AS斑塊面積比較動(dòng)脈粥樣硬化組AS斑塊面積與動(dòng)脈內(nèi)膜面積比值為(38.35±4.33)%,顯著高于正常對(duì)照組(0.00±0.00)%,兩組有顯著性差異(P<0.05)。

    2兩組間動(dòng)脈壁脂聯(lián)素特異性染色陽(yáng)性面積比較見(jiàn)圖1。動(dòng)脈粥樣硬化組血管壁脂聯(lián)素蛋白表達(dá)為0.465±0.045,顯著低于正常對(duì)照組(0.643±0.073),兩組有極顯著性差異(P<0.01)。

    A 正常對(duì)照組                 B動(dòng)脈粥樣硬化組

    3 Western blot檢測(cè)兩組間主動(dòng)脈脂聯(lián)素蛋白的比較見(jiàn)圖2。經(jīng)Western blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)動(dòng)脈粥樣硬化組血管壁脂聯(lián)素蛋白表達(dá)為0.765±0.085,顯著低于正常對(duì)照組(1.610±0.173),兩組有顯著性差異(P<0.01)。

    圖2 兩組間 Western blot檢測(cè)主動(dòng)脈脂聯(lián)素蛋白的比較

    4 脂聯(lián)素蛋白與動(dòng)脈粥樣硬化斑塊面積與動(dòng)脈內(nèi)膜面積比值的相關(guān)性分析為了進(jìn)一步了解脂聯(lián)素蛋白與動(dòng)脈粥樣硬化的關(guān)系,行脂聯(lián)素蛋白與動(dòng)脈粥樣硬化斑塊面積與動(dòng)脈內(nèi)膜面積比值的相關(guān)分析,通過(guò)分析發(fā)現(xiàn)脂聯(lián)素蛋白與動(dòng)脈粥樣硬化斑塊面積與動(dòng)脈內(nèi)膜面積比值呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.573;P<0.001)。

    討論

    ANP是由脂肪細(xì)胞分泌的一種特異性蛋白質(zhì),具有保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞、抗動(dòng)脈粥樣硬化、調(diào)節(jié)胰島素抵抗的作用[3]。此外APN還可使內(nèi)皮細(xì)胞減少對(duì)白介素-8和組織因子等炎癥因子的表達(dá)[4],降低內(nèi)皮細(xì)胞和白細(xì)胞相互作用[5],抑制巨噬細(xì)胞向泡沫細(xì)胞轉(zhuǎn)化,減少對(duì)氧化的低密度脂蛋白攝取,降低脂質(zhì)在泡沫細(xì)胞內(nèi)堆積[6],從而保護(hù)血管結(jié)構(gòu),抑制AS的發(fā)生、發(fā)展。以上研究清楚地描述了脂聯(lián)素延緩動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生、發(fā)展的機(jī)制,并闡明脂聯(lián)素與AS密切相關(guān)。

    本研究結(jié)果顯示:動(dòng)脈粥樣硬化組主動(dòng)脈血管壁脂聯(lián)素蛋白表達(dá)顯著低于正常對(duì)照組,且脂聯(lián)素蛋白與動(dòng)脈粥樣硬化斑塊面積與動(dòng)脈內(nèi)膜面積比值呈顯著負(fù)相關(guān)。即主動(dòng)脈血管壁脂聯(lián)素蛋白表達(dá)陽(yáng)性面積水平上調(diào)可在一定程度上延緩動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展。隨著對(duì)AS發(fā)病機(jī)制分子水平研究的不斷深入,有ANP在抗AS中的作用將成為新的研究熱點(diǎn)。

    參考文獻(xiàn)

    [1] Ouchi N, Kihara S, Arita Y, et al. Adipocyte-derived plasma protein, adiponectin, suppresses lipid accumulation and classA scavenger receptor expression in human monocyte-derived macrophages [J]. Circulation,2001,103(8):1057-1063.

    [2] Zietz B, Herfarth H, Paul G, et al. Adiponectin represents an independent cardiovascular risk factor predicting serum HDL-cholesterol levels in type 2 diabetes [J]. FEBS Lelt, 2003, 545(2~3):103-104.

    [3] Vaiopoulos AG,Marinou K,Christodoulides C,et al.The role of adiponectin in human vascular physiology[J].Int J Cardiol, 2012,155(2) : 188-193.

    [4] Chen YJ, Zhang LQ, Wang GP,et al. Adiponectin inhibits tissue factor expression and enhances tissue factor pathway inhibitor expression inhuman endothelial cells[J]. Thromb Haemost,2008,100(2): 291-300.

    [5] Mahadev K, Wu X, Donnelly S, et al. Adiponectin inhibits vascular endothelial growth factor-induced migration of human coronary artery endo-thelial cells [J]. Cardiovasc Res, 2008,78(2) : 376-384.

    [6] Tian L, Luo N, Klein RL,et al. Adiponectin reduces lipid accumulation in macrophage foam cells [J]. Atherosclerosis,2009,202(1):152-161.

    (收稿:2015-08-20)

    The expression of adiponectin of aortic atherosclerosis plaque area in rabbits Department of Cardiology, The First Affiliated Hospital of Medicol College,

    Xi’an Jiaotong University(Xi’an710061) Wang ZhirongShu Juan

    ABSTRACTObjective:To investigate the expression of adiponectin of aortic atherosclerosis plaque area in rabbits. Methods:12 atherosclerotic rabbits and 12 normal rabbits were sacrificed. Aortic atherosclerotic lesion area, intimal thickness and intimal / media thickness ratio were measured. Expression of adiponectin of aortic atherosclerosis plaque area in rabbits were detected. Results: Protein expression of adiponectin in normal rabbits is greater than that in atherosclerotic rabbits (P<0.01).Conclusion:Accelerated levels of adiponectin can slow down the speed of atherosclerosis.

    KEY WORDSArteriosclerosis/diagnosisCytokines/metabolismCholesterol/ metabolismInsulin antibodiesAnimals,laboratoryRabbits@ Adiponectin

    【中圖分類號(hào)】R743.1

    【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

    doi:10.3969/j.issn.1000-7377.2016.01.002

    *陜西省科學(xué)技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(2004K17-G22)

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