視黃醇結(jié)合蛋白4和葡萄糖-6-磷酸異構(gòu)酶與糖尿病分型、并發(fā)癥的相關(guān)性

葉青躍　謝　軍　楊　楊　陳新勝　田勝蘭　邢曉磊　白如君　譚婷婷

(武漢科技大學附屬天佑醫(yī)院內(nèi)分泌科，湖北　武漢　430064)

?

視黃醇結(jié)合蛋白4和葡萄糖-6-磷酸異構(gòu)酶與糖尿病分型、并發(fā)癥的相關(guān)性

葉青躍1謝軍楊楊陳新勝田勝蘭邢曉磊白如君譚婷婷

(武漢科技大學附屬天佑醫(yī)院內(nèi)分泌科，湖北武漢430064)

〔摘要〕目的探討視黃醇結(jié)合蛋白(RBP)4和葡萄糖-6-磷酸異構(gòu)酶(GPI)與糖尿病(DM)并發(fā)癥發(fā)生發(fā)展及DM分型的相關(guān)性。方法選取2010年2月至2012年8月在武漢科技大學附屬天佑醫(yī)院內(nèi)分泌科240例住院和門診病人，健康體檢者160例。按要求隨機分為6組，即正常人群組、單純肥胖人群組、單純1型糖尿病(T1DM)組、肥胖T2DM組、肥胖2型糖尿病(T2DM)合并相應(yīng)并發(fā)癥(腎病、大血管病變、視網(wǎng)膜病變)組、T2DM合并感染(急性呼吸道感染、急性泌尿系感染)組，各組80例，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)方法分別檢測正常人群組、單純肥胖人群組、T2DM組、T2DM合并相應(yīng)并發(fā)癥(腎、大血管病變、視網(wǎng)膜病變)組四組RBP4含量。比較正常人群組、T2DM組、T1DM組、DM合并感染組GPI含量。檢測各組研究對象檢測空腹血糖(FBG)、餐后2 h血糖(2 h BG)、糖化血紅蛋白(HbA1c)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、收縮壓(SBP)、舒張壓(DBP)、體重指數(shù)(BMI)，并分別分析與RBP4的相關(guān)性。 結(jié)果①單純肥胖人群組與正常人群組RBP4含量均在正常范圍，前者較后者RBP4含量增加(t=6.70，P<0.01)。T2DM患者與肥胖患者比較RBP4含量增加(t=7.14，P<0.01)。T2DM合并相應(yīng)并發(fā)癥時RBP4含量明顯增加，與T2DM無并發(fā)癥者比較差異顯著(t=6.38，P<0.01)；②T2DM組、T1DM組GPI含量均較正常人群組高(t=15.37，t=11.90，P<0.01)，T1DM組比T2DM組GPI含量有增高趨勢，但兩組間無顯著差異(t=6.13，P=0.56)。一旦DM合并感染，如呼吸道感染、泌尿系感染時，與非感染T2DM患者比較，GPI含量增高明顯(t=12.76，P<0.01)。③高血糖、高血壓、血脂異常、體重增加均與RBP4顯著相關(guān)；T2DM組RBP4與GPI的相關(guān)性不強。結(jié)論糖代謝異常、血壓血脂異常、體重增加等與RBP4相關(guān)，RBP4也許可作為正常人進展為T2DM以及進一步并發(fā)慢性并發(fā)癥的動態(tài)監(jiān)測指標；GPI尚不能作為T1DM與T2DM鑒別的標志分子，也許可作為DM合并急性炎癥感染的判斷指標。

〔關(guān)鍵詞〕1型糖尿病(T1DM)；2型糖尿病(T2DM)；糖尿病并發(fā)癥；葡萄糖-6-磷酸異構(gòu)酶(GPI)；視黃醇結(jié)合蛋白(RBP)4

明確糖尿病(DM)分型、并發(fā)癥發(fā)生及其程度是有效治療DM的保障。目前，DM的流行狀況正發(fā)生著變化，2型糖尿病(T2DM)呈現(xiàn)年輕化，發(fā)病率逐年攀升，臨床上存在分型混亂和分型不清的現(xiàn)象〔1〕。DM并發(fā)癥日益嚴重地威脅著患者的生存質(zhì)量，當今研究多認為DM患者處于一種慢性、低度、非感染性炎癥的病理狀態(tài)，與免疫、炎癥損傷關(guān)系密切，因此致炎因子發(fā)生機制學說正被認識和認同〔2〕。如何提供更多證據(jù)明確1型糖尿病(T1DM)及T2DM，以及早期判斷并發(fā)癥及其程度，以便積極干預(yù)仍然是目前需要解決的問題。葡萄糖-6-磷酸異構(gòu)酶(GPI)是一種細胞因子和生長因子〔3〕，與自身免疫性疾病相關(guān)，目前作為類風濕關(guān)節(jié)炎的診斷指標〔4〕。視黃醇結(jié)合蛋白-4(RBP4)是炎癥標志分子，與血管、腎臟病變相關(guān)〔5〕。本研究旨為T1DM、T2DM的分型及并發(fā)癥發(fā)生及程度判斷提供新證據(jù)。

1對象與方法

1.1研究對象患者組：選取2010年2月至2012年8月在武漢科技大學附屬天佑醫(yī)院內(nèi)分泌科就診的240例住院和門診病人，其中T1DM、T2DM和DM合并相關(guān)慢性并發(fā)癥患者各80例，男性分別為42例、41例和45例，女性分別為38例、39例和35例，平均年齡分別為(23.51±5.78)歲、(59.43±10.71)歲和(61.12±11.21)歲，平均病程分別為(7.53±3.72)年、(8.04±3.93)年 和(8.34±4.02)年。正常人群組及單純肥胖組：選取我院行健康體檢者160例，各80例，男分別為43例和44例，女分別為37例和36例，平均年齡分別為(60.72±5.26)和(62.3±5.37)歲。各組年齡、病程、性別比(T1DM除外)差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

1.2診斷標準DM診斷標準均符合1999年世界衛(wèi)生組織(WHO)的DM的診斷標準；慢性并發(fā)癥分別以3次尿微量白蛋白排泄率>20 μg/min或>30 mg/24 h診斷為DM合并腎病，彩色多普勒提示頸動脈中層厚度增加或四肢多普勒提示踝肱指數(shù)(ABI)<0.9診斷為DM合并外周大血管病變，數(shù)字感覺閾值減低等診斷為糖尿病合并神經(jīng)損傷。肥胖的診斷標準均符合2003年《中國成人超重和肥胖癥預(yù)防控制指南》標準。

1.3排除標準患有嚴重心、腦、肺等疾病被排除。

1.4主要試劑人GPI ELISA試劑盒購自美國R&D公司，人RBP4酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)試劑盒購自美國 Uscn Life Science Inc。

1.5指標測定①檢測正常人群組、單純肥胖組、T2DM組、T2DM合并相應(yīng)并發(fā)癥(腎病、大血管病變、視網(wǎng)膜病變)組四組RBP4含量。②檢測正常人群組、T2DM組、T1DM組、DM合并感染組GPI含量。③檢測正常人群組、單純肥胖組、T2DM組、T2DM合并相應(yīng)并發(fā)癥(腎病、大血管病變、視網(wǎng)膜病變)組四組空腹血糖(FBG)、餐后2 h血糖(2 h BG)、糖化血紅蛋白膽固醇(HbA1c)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)及收縮壓(SBP)、舒張壓(DBP)、體重指數(shù)(BMI)。

1.6實驗方法ELISA方法檢測各組對象血清中GPI和RBP4含量按照試劑盒說明書所示方法操作進行。

1.7統(tǒng)計學分析采用SPSS13.0軟件行t檢驗或轉(zhuǎn)換后單因素ANOVA方差分析及多因素的ANOVA方差分析和線性相關(guān)性分析。

2結(jié)果

2.1RBP4含量情況正常人群組、單純肥胖組、T2DM組、T2DM伴并發(fā)癥組四組RBP4含量分別為：(6.68±1.78)，(19.24±5.73)，(60.67±15.83)，(116.23±21.35)ng/ml，結(jié)果表明，肥胖人群組與正常人群組RBP4含量均在正常范圍，但兩組比較差異顯著(P<0.01)。T2DM患者與肥胖患者比較，RBP4含量增加(P<0.01)。與無并發(fā)癥者比較，T2DM合并并發(fā)癥時RBP4含量明顯增加(P<0.01)。

2.2GPI含量情況正常人群組、T2DM組、T1DM組、DM合并感染組GPI含量分別為：(46.19±9.84)，(119.78±12.83)，(124.52±16.32)，(232.51±25.66)pg/ml，結(jié)果表明，T2DM組、TIDM組GPI含量均較正常人群組高(t=15.37，t=11.90，P<0.01)，T1DM組比T2DM組GPI含量有增高趨勢，但兩組間無統(tǒng)計學意義(t=6.13,P=0.56)。DM合并感染患者與非感染T2DM患者比較，GPI含量增高明顯(t=12.76,P<0.01)。

2.3RBP4與GLP的相關(guān)性正常人群組RBP4與GPI的相關(guān)性不強(r=0.53，P=0.669)，T2DM組RBP4與GPI的相關(guān)性不強(P=0.298)。即無論正常人群還是T2DM患者血清中RBP4與GPI無明顯相關(guān)關(guān)系。

2.4正常人群組、單純肥胖人群組、T2DM組、T2DM合并相應(yīng)并發(fā)癥組FBG、2 h BG、HbA1c、血壓、血脂、BMI與RBP4的相關(guān)性比較高血糖(FBG、2 h BG、HbA1c)、高血壓(SBP)、血脂異常(TC、TG、LDL-C)、體重增加(BMI)均與RBP4顯著相關(guān)(P均<0.05)。見表1。

表1　各組研究對象生化指標水平FBG、2 h BG、HbA1c、SBP、DBP比較

3討論

明確DM分型、并發(fā)癥及其程度是有效控制血糖、提高DM患者生存質(zhì)量的前提。過去兒童青少年以T1DM為主的傳統(tǒng)流行模式正發(fā)生變化，兒童青少年DM中T2DM的發(fā)病率在逐漸上升，其診斷尚缺乏標準〔6〕。目前研究多認為DM患者處于一種慢性、低度、非感染性炎癥的病理狀態(tài)，與免疫、炎癥損傷關(guān)系密切〔7〕。T1DM和T2DM一般根據(jù)急性并發(fā)癥、胰島功能及胰島細胞自身抗體等的檢測進行鑒別，但此類方法存在局限性，對DM很難作出全面衡量和判定。DM的并發(fā)癥也往往是根據(jù)臨床癥狀、影像學和部分血清學指標來診斷，一旦上述結(jié)果出現(xiàn)時病變已經(jīng)非常嚴重。因此，如何盡可能準確進行DM分型、力爭盡早發(fā)現(xiàn)并發(fā)癥及程度判定，如何有效控制患者血糖和提高其生活質(zhì)量等，尚需探討。

GPI是一種糖酵解酶，在6磷酸葡萄糖向6-磷酸果糖轉(zhuǎn)化并在糖酵解和糖異生過程中發(fā)揮重要作用。它存在于細胞質(zhì)中，是參與體內(nèi)葡萄糖代謝最主要的糖酵解途徑，它既參與合成代謝又參與分解代謝。糖酵解途徑依賴多種限速酶的調(diào)節(jié)，限速酶受控于許多異構(gòu)酶，GPI即為其中之一。新近研究表明它是一種多功能酶，具有細胞因子和生長因子的活性〔8〕，表明它可參與免疫、炎癥及細胞增殖過程。同時，近年來，人們逐漸認識到GPI是一種自身免疫性抗原，與自身免疫性疾病關(guān)系密切〔3〕。RBP4主要由肝臟分泌的一種蛋白質(zhì)，新近研究發(fā)現(xiàn)它也由脂肪細胞分泌，與脂質(zhì)代謝有關(guān)〔9〕。RBP4基因表達與炎癥標志分子相關(guān)〔4〕，其血清蛋白表達與心血管、腎臟疾病及DM其他并發(fā)癥關(guān)系密切。

本研究提示應(yīng)關(guān)注DM的發(fā)生，應(yīng)減重、調(diào)脂和加強生活方式的干預(yù)。隨著DM的發(fā)生及其并發(fā)癥的發(fā)生和進展，其血清中RBP4含量亦隨著明顯增加，表明通過RBP4含量檢測，也許可作為DM發(fā)生發(fā)展及其并發(fā)癥程度的動態(tài)觀察指標之一。同時，檢測表明T2DM組、T1DM組GPI含量均較正常人群組增高，提示血清中GPI升高時，可能預(yù)示有糖尿病發(fā)生的潛在風險，但研究沒有檢測出T2DM和T1DM之間GPI含量的統(tǒng)計學差異，其機制有待進一步闡明，即本研究結(jié)果尚不能證明GPI可作為鑒別T2DM和T1DM的指標。另外，結(jié)果表明，一旦DM患者合并急性感染，如呼吸道感染、泌尿系感染時，患者血清中GPI含量則明顯增高，說明GPI也許可作為糖尿病合并急性感染的判斷指標之一。

綜上，本研究表明，RBP4可作為正常人進展為DM，以及DM慢性并發(fā)癥發(fā)生進展的動態(tài)監(jiān)測指標；GPI不能作為T1DM與T2DM鑒別的標志分子，但可作為判斷DM合并急性炎癥感染的指標，其機制尚需進一步研究。

4參考文獻

1Tripathi A，Rizvi AA，Knight LM，etal.Prevalence and impact of initial misclassification of pediatric type 1 diabetes mellitus〔J〕.South Med J，2012；105(10)：513-7.

2Reddy MA，Natarajan R.Role of epigenetic mechanisms in the vascular complications of diabetes〔J〕.Subcell Biochem，2012；61：435-54.

3Funasaka T，Hu H，Yanagawa T，etal.Down-regulation of phosphoglucose isomerase/autocrine motility factor results in mesenchymal-to-epithelial transition of human lung fibrosarcoma cells〔J〕.Cancer Res，2007；67(9)：4236-43.

4Dai L，Zhu LJ，Zheng DH，etal.Elevated serum glucose-6-phosphate isomerase correlates with histological disease activity and clinical improvement after initiation of therapy in patients with rheumatoid arthritis〔J〕.J Rheumatol,2010；37(12)：2452-61.

5Li ZZ，Lu XZ，Liu JB，etal.Serum retinol-binding protein 4 levels in patients with diabetic retinopathy〔J〕.J Int Med Res，2010；38(1)：95-9.

6Pinhas-Hamiel O，Zeitler P.Acute and chronic complications of type 2 diabetes mellitus in children and adolescents〔J〕.Lancet，2007;369 (9575)：1823-31.

7Hartge MM，Unger T，Kintscher U.The endothelium and vascular inflammation in diabetes〔J〕.Diab Vasc Dis Res，2007;4(2)：84-8.

8Matsumoto I，Zhang H，Yasukochi T，etal.Therapeutic effects of antibodies to tumor necrosis factor-alpha，interleukin-6 and cytotoxic T-lymphocyte antigen 4 immunoglobulin in mice with glucose-6-phosphate isomerase induced arthritis〔J〕.Arthritis Res Ther，2008；10(3)：R66.

9Vergés B，Guiu B，Cercueil JP，etal.Retinol-binding protein 4 is an independent factor associated with triglycerides and a determinant of very low-density lipoprotein-apolipoprotein b100 catabolism in type 2 diabetes mellitus〔J〕.Arterioscler Thromb Vasc Biol，2012；32(12)：3050-7.

〔2014-10-17修回〕

(編輯安冉冉/曹夢園)

基金項目：湖北省教育廳重點科研項目(No.D20101109)；湖北省教育廳教學項目(No.2008008)；武漢科技大學引進人才科研啟動基金(530012)

通訊作者：楊楊(1969-)，女，博士，教授，主任醫(yī)師，主要從事糖脂代謝與炎癥免疫研究。

〔中圖分類號〕R587.2

〔文獻標識碼〕A

〔文章編號〕1005-9202(2016)09-2124-03；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.09.033

1武漢科技大學附屬天佑醫(yī)院檢驗科

第一作者：葉青躍(1960-)，男，主管技師，主要從事臨床檢驗基礎(chǔ)專業(yè)研究。