GnRH-A抗原主動免疫母羊?qū)ρ錖H激素濃度的作用

郭春艷

（招遠(yuǎn)市畢郭畜牧獸醫(yī)站，山東煙臺 264000）

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GnRH-A抗原主動免疫母羊?qū)ρ錖H激素濃度的作用

郭春艷

（招遠(yuǎn)市畢郭畜牧獸醫(yī)站，山東煙臺 264000）

［摘 要］目的：探討促性腺激素釋放激素的類物-A（GnRH-A）對動物生殖激素LH調(diào)節(jié)的效果和作用機(jī)理。方法：以EDC.HCL為耦合劑，將GnRH-A與BSA連接為復(fù)合物，再加入弗氏不完全佐劑制成抗原乳劑；30只小尾寒羊與山東省招遠(yuǎn)市本地羊雜交的F1代隨機(jī)分成6組，每組注射不同劑量的抗原，用ELISA法測定血清LH激素含量。

［關(guān)鍵詞］促性腺激素釋放類似物-A（GnRH-A） 抗原制備 LH 綿羊

1　實(shí)驗(yàn)材料和方法

1.1實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)動物

5～6月齡母綿羊30只，體重24.21±2.51kg，隨機(jī)均分為6組（n=5），分別標(biāo)記為EG-Ⅰ、EG-Ⅱ、EG-Ⅲ、EG-Ⅳ、EG-Ⅴ和CG（對照組）。預(yù)飼15d。

1.1.2試劑和藥物

（1）促性腺激素的釋放類似物GnRH-A

（2）1-乙基-（3-二甲基氨基丙酸）碳二亞胺鹽酸鹽（3）牛血清白蛋白

（4）弗氏不完全佐劑

（5）培養(yǎng)基：硫乙醇酸培養(yǎng)基、酪胨瓊脂培養(yǎng)基、葡萄糖白胨湯培養(yǎng)基

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1GnGH-A抗原的制備

以碳二亞胺鹽酸鹽為耦合劑，將促性腺激素釋放激素類似物與牛血清白蛋白連接為復(fù)合物，再加入弗氏不完全佐劑制成抗原乳劑。

對照液的制備除不使用促性腺激素釋放激素類似物外，其余方法與上述相同。

1.2.2抗原注射見表1

表1　各組實(shí)驗(yàn)綿羊抗原注射劑量和時(shí)間

1.2.3血樣采集

分別在0d、7d、14d、21d、28d、35d、45d、60d和70d頸靜脈采血。采血前動物禁食12h，采集的血樣立即以2005～3000r/min離心10～15min，分離血清，-20℃保存。

1.2.4檢測項(xiàng)目

（1）GnRH抗體效價(jià)測定用ELASA法測定。

（2）血清LH濃度測定 用綿羊LH酶聯(lián)免疫分析法（ELASA法）測定。

（3）用回歸方程計(jì)算濃度。

（4）數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析使用Spss18.0統(tǒng)計(jì)軟件包處理數(shù)據(jù)，用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（±SD）表示，以 Tukey LSD 進(jìn)行多重比較。P〈0.05表示差異顯著。

2　實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1測定值分析 見表1

從表1得出，EG-I、EG-II 、EG-III 、EG-IV、 EG-V，以及對照組在注射抗原起35d處理組之間無差異性，45d時(shí)EG-IV與EG-V 血清LH濃度差異顯著，EG-IV組LH水平高于EG-V；70d時(shí)血清LH濃度抗原組與對照組差異顯著，并且在70d抗原組LH濃度顯著高于對照組，猶以EG-3最為明顯。

2.2血清LH測定值

通過試驗(yàn)可看出各組LH濃度在注射抗原起到35d之間始終保持在一個(gè)穩(wěn)定的波動范圍內(nèi)，從35d起都開始上升，EG-III急劇上升，抗原組變動平穩(wěn)，但總體水平顯著高于對照組。在70dEGIIIEG-IVEG-V對照組都有所下降，但對照組下降更快，抗原各組總體水平顯著高于對照組，并且以黃線（EG-III）最顯著。

3　結(jié)論

自抗原注射起至45d，GnRH-A對綿羊機(jī)體無影響，實(shí)驗(yàn)的第 45d時(shí)GnRH-A加強(qiáng)免疫可以增強(qiáng)綿羊分泌LH激素；第70d時(shí)GnRH-A主動免疫綿羊?qū)ρ錖H激素的作用是增強(qiáng)的?！纒（ng/L）

表1　母羊血清LH測定值