苯酚硫酸法和高錳酸鉀滴定法測定香菇多糖含量的比較

雷于國　王嘉銘　胡國元　雷遠征（. 湖北裕國菇業(yè)股份有限公司，湖北 隨州 44300；. 武漢工程大學化工與制藥學院，湖北 武漢 430074）

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苯酚硫酸法和高錳酸鉀滴定法測定香菇多糖含量的比較

雷于國1王嘉銘2胡國元2*雷遠征1
（1. 湖北裕國菇業(yè)股份有限公司，湖北 隨州 441300；2. 武漢工程大學化工與制藥學院，湖北 武漢 430074）

摘要為確定一種比較準確、方便的香菇多糖測定方法，比較了苯酚硫酸法和高錳酸鉀滴定法測定香菇多糖含量的差異：兩種方法均穩(wěn)定可行，重現性較好。但苯酚硫酸法測定香菇多糖含量高于高錳酸鉀滴定法，苯酚硫酸法不僅靈敏度高，而且回收率也高于高錳酸鉀滴定法；高錳酸鉀滴定法操作也較繁瑣。相對而言，苯酚硫酸法是測定香菇多糖較為理想的方法。

關鍵詞香菇多糖；苯酚硫酸法；高錳酸鉀滴定法；含量測定

目前，國內外對香菇多糖的研究比較深入，其測定的方法主要有比色法、滴定法、高效液相色譜法、薄層層析法等[1]。本試驗采用苯酚硫酸法和高錳酸鉀滴定法對同一批樣品香菇多糖含

量進行了比較研究，旨在為以香菇多糖為有效成分的香菇原料和香菇產品質量標準的制定提供理論依據。

1　材料與方法

1.1材料與設備

香菇子實體1號、2號、3號均由湖北裕國菇業(yè)股份有限公司提供。

試劑：硫酸、葡萄糖、無水乙醇、重蒸酚、鹽酸、硫酸鐵銨、硫酸銅、酒石酸鉀鈉、氫氧化鈉、高錳酸鉀等，均為分析純。

設備：Genesys 10s紫外可見分光光度計（美國Thermo Scientific），AL104電子分析天平（梅特勒-托利多（上海）有限公司），KQ2200E型超聲清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2方法

（1）樣品的制備。取經粉碎過2.00 mm篩的香菇樣品10 g加入200 mL水，沸水浴提取2.5 h，過濾收集濾液，濾渣加入200 mL水，沸水浴提取2 h，過濾收集濾液，合并2次濾液，濃縮至30 mL，加入90 mL95%乙醇，靜置后離心，棄去上清液，加入75%乙醇10 mL，離心，棄去上清液，用50 mL水將沉淀洗入燒瓶中，加入25%鹽酸15 mL，沸水浴2.5 h，過濾到100 mL容量瓶內，定容至刻度，備用。

（2）苯酚硫酸法。①標準曲線的繪制：參照中華人民共和國農業(yè)行業(yè)標準NYT 1676-2008《食用菌中粗多糖含量的測定》進行[2]。②香菇子實體多糖含量測定：3批香菇子實體干粉分別取10 g按1. 2（1）項下―樣品的制備‖方法制備樣品溶液，分別取1 mL樣品溶液，按中華人民共和國農業(yè)行業(yè)標準NYT 1676-2008《食用菌中粗多糖含量的測定》中的苯酚硫酸法測定[2]。③精密度試驗：在按1.2（2）中②項方法測定香菇1號樣品多糖含量時，連續(xù)測定6次考察儀器精密度。④穩(wěn)定性實驗：在按1.2（2）中②項方法測定香菇1號樣品多糖含量反應結束后0 min，5 min，10 min，20 min，40 min，60 min，120 min的吸光度[3]。⑤回收率實驗：分別量取3份香菇1號樣品溶液0.4 mL于試管中，依次添加100 mg/L的標準葡萄糖溶液0.36 mL，0.30 mL，0.24 mL，并加入水使體積達到1 mL，空白對照為水1 mL，測定多糖含量，計算回收率[3]。⑥重現性實驗：稱取同一批次香菇樣品3份，按照1.2（1）項下―樣品的制備‖方法和1.2（2）中②項下―樣品多糖含量測定‖方法進行操作，考察操作方法的重現性[3]。

（3）高錳酸鉀滴定法。①香菇多糖含量的測定：3批香菇子實體干粉分別取10 g按1.2（1）項下―樣品的制備‖方法制備樣品溶液，分別取樣品溶液10 mL加入燒杯中，然后加入25 mL費林試劑甲液和乙液，加入40 mL蒸餾水。加熱溶液，使4 min內沸騰，然后保持沸騰2 min，趁熱過濾，用60 ℃100 mL蒸餾水洗滌三角瓶和沉淀，棄去濾液，取50 mL硫酸鐵銨溶液使濾紙上的沉淀溶解，然后用50 mL60 ℃熱水洗滌，取濾液，加入20 mL2 mol/L硫酸，用高錳酸鉀滴定至微紅色并保持30 s不褪色，記錄高錳酸鉀的消耗量，計算香菇多糖含量[4～6]。②回收率實驗：分別量取3份香菇1號樣品提取溶液4 mL于燒杯中，加入100 mg/L的標準葡萄糖溶液3.6 mL，3.0 mL，2.4 mL，加水使體積達到10 mL，按照1.2（3）中①項方法用高錳酸鉀進行滴定，計算香菇多糖含量[1,3]。③重現性實驗：稱取同一批次香菇樣品3份，按照1.2（1）項下―樣品的制備‖方法和1.2（3）中①項下―樣品多糖含量測定‖方法進行操作，考察操作方法的重現性[3]。

2　結果與分析

2.1苯酚硫酸法的實驗結果與分析

（1）標準曲線的繪制及回歸方程的建立。根據NYT 1676-2008《食用菌中粗多糖含量的測定》方法，制作的葡萄糖標準曲線如圖1所示。通過對數據的線性回歸，獲得吸光度與葡萄糖質量濃度的回歸方程：Y＝1.0097X－0.0085，相關系數R2＝0.9996，表明方程的擬合度較好。

圖1　苯酚硫酸法的標準曲線

（2）精密度的測定結果。精密度實驗結果（n=6），6次測定吸光度A分別為1.062，1.063，1.060，1.060，1.061，1.062，所測6次RSD為0.12%。

（3）穩(wěn)定性實驗的測定結果。穩(wěn)定性實驗結果，隨著放置時間的延長，吸光度逐漸減小，0 min，5 min，10 min，20 min，40 min，60 min，120 min的吸光度A分別為1.061，1.059，1.059，1.058，1.058，1.057，1.053。建議在40 min內完成實驗。

（4）香菇多糖含量的測定結果。香菇1號、2號、3號中多糖含量3次檢測均在3.5%以上（表1），符合無限極（中國）有限公司的驗收標準。

表1　苯酚硫酸法測定香菇多糖含量及重現性的結果

（5）回收率實驗的測定結果。通過加樣回收率的測定，可以考驗試驗方法的準確度。以葡萄糖標準樣品為對照，以苯酚硫酸法進行香菇多糖的含量分析結果，加樣平均回收率為101.07%，RSD為0.55（表2），所以本方法的可信度較高。

（6）重現性實驗的測定結果。為考察上述測定方法是否可靠，用苯酚硫酸法進行香菇多糖的含量分析，結果如表1所示，3批次樣品的RSD分別為0.20%，0.20%，0.12%，實驗重復性好，所得實驗結果可靠。

2.2高錳酸鉀滴定法實驗結果與分析

表2　苯酚硫酸法和高錳酸鉀滴定法的回收率實驗結果

注：（1）苯酚硫酸法樣品含量為42.36 μg，高錳酸鉀滴定法為14 mg；（2）平均回收率，苯酚硫酸法為101.07%，高錳酸鉀滴定法為93.0%；（3）RSD，苯酚硫酸法為0.55%，高錳酸鉀滴定法為3.2%。

（1）香菇多糖含量的測定結果。由表3可知，香菇1號和香菇2號3次檢測中1次符合無限極（中國）有限公司的驗收標準，香菇3號3次檢測中3次均符合無限極（中國）有限公司的驗收標準。

表3　高錳酸鉀滴定法測定香菇多糖含量及重現性實驗結果

（2）回收率實驗測定結果。通過加樣回收率的計算，可以考察試驗方法的準確度。以葡萄糖標準品為對照，以高錳酸鉀滴定法進行香菇多糖含量的分析結果，回收率為93%（表2），RSD 為3.2%，可見本方法較為準確。

（3）重現性實驗的測定結果。為考察上述測定方法是否可靠，設計重現性實驗，用高錳酸鉀滴定法進行香菇多糖的含量分析，結果如表3所示，3批次樣品的RSD分別為0.12%，0.15%，0.44%，實驗重復性好，所得實驗結果可靠。

3　討　論

苯酚硫酸法的顯色化合物和香菇多糖的溶液均為橙黃色，易導致實測值偏高，建議先進行脫色處理再測定；苯酚易氧化，測定過程中要注意避光，操作要迅速。高錳酸鉀滴定法所測結果偏低，相對標準偏差大，操作較繁瑣。

實驗結果表明，2種方法的重現性均較理想。苯酚硫酸法的靈敏度比高錳酸鉀滴定法高，但特異性不夠強，容易出現假陽性。而高錳酸鉀滴定法的測定結果偏低，且靈敏度不夠高。苯酚硫酸法的回收率高于高錳酸鉀滴定法。

本研究認為苯酚硫酸法是測定香菇多糖較為理想的方法，較適用于基層單位使用，與文獻[1]報道的結論一致。

致謝感謝湖北裕國菇業(yè)股份有限公司的資助和武漢工程大學的支持！

參考文獻

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云南南華縣多措并舉大力發(fā)展野生食用菌產業(yè)

野生菌產品是云南南華縣產業(yè)發(fā)展的一大特色。近年來，該縣先后建成野生食用菌交易市場3個，培育野生食用菌收購經營戶100余個，成為中國西南地區(qū)重要野生食用菌交易集散地之一，從2003年起成功舉辦12屆“中國〃南華野生菌美食文化節(jié)”大力宣傳南華野生食用菌，并于2014年6月起創(chuàng)建中國〃南華野生菌信息港，吸引國內外客商前來品嘗生態(tài)美食、投資野生食用菌等產業(yè)，使野生食用菌通過網絡走向世界。產品出口日本、韓國、歐洲等國家和地區(qū)，2015年，全縣野生食用菌集散交易量6738噸，交易額4.08億元。

為了讓“山貨變商品，商品變精品，精品變高端”，南華縣努力打造野生食用菌品牌。2015年12月31日，“南華松茸”通過了國家地理標志產品保護形式審查。目前，該縣共有野生食用菌商標15件，其中彝香、雲蕈、宏怡3件為云南省著名商標。

（摘編自2016.2.22《中國食用菌商務網》http://www.vegnet.com.cn/News/1050011.html）

Comparison of the content of lentinan with the phenol sulfuric acid and the potassium permanganate titration method

Lei Yuguo1Wang Jiaming2Hu Guoyuan2*Lei Yuanzheng1

(Hubei Yuguo Gu Ye Co., Ltd., suizhou 441300, China; 2. School of Chemical Engineering & Pharmacy, Wuhan Institute of Technology , Wuhan 430074, China)

AbstractIn order to determine a more accurate and convenient method for the content determination of lentinan, the differences between the phenol sulfuric acid and the potassium permanganate titration method for the determination of content of lentinan were compared. The result showed that the determination value of the phenol sulfuric acid method was higher than the potassium permanganate titration method, and that the phenol sulfuric acid method was not only higher in sensitivity，but also was satisfied of restore rate, and that the operation of the potassium permanganate titration method was complicated. The two methods are stable and feasible, with good reproducibility. The phenol sulfuric acid method was more reliable and accurate by comparison，it can be considered as the optimum assay method for the content determination of lentinan.

Key wordsLentinan; the phenol sulfuric acid method; the potassium permanganate titration method; content determination

*通訊作者：胡國元（1965—），男，教授，博士，從事食藥用菌發(fā)酵及其代謝產物研究，E-mail：hgy701@163.com

作者簡介：雷于國（1966—），男，高級經濟師，從事企業(yè)管理

中圖分類號：S646

文獻標識碼：A

文章編號：2095-0934（2016）02-094-04