抗菌肽對(duì)凡納濱對(duì)蝦生產(chǎn)性能與機(jī)體成分的影響

覃志彪 梁靜真 龍?zhí)K 牛志偉 賀常晶 黃鈞

摘要：【目的】研究抗菌肽對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長性能和機(jī)體成分的影響，為水產(chǎn)餌料抗菌肽添加劑的研發(fā)與應(yīng)用提供參考。【方法】以健康凡納濱對(duì)蝦蝦苗為試驗(yàn)動(dòng)物，在育苗池內(nèi)進(jìn)行養(yǎng)殖試驗(yàn)，分別在基礎(chǔ)餌料中添加1.0 mL/kg（1號(hào)組）、3.0 mL/kg（2號(hào)組）、5.0 mL/kg（3號(hào)組）、8.0 mL/kg（4號(hào)組）和12.0 mL/kg（5號(hào)組）的抗菌肽，以不添加抗菌肽為對(duì)照，每組設(shè)3個(gè)平行，對(duì)比不同水平抗菌肽對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長性能和機(jī)體營養(yǎng)成分的影響。【結(jié)果】投喂40 d后，抗菌肽對(duì)凡納濱對(duì)蝦的增重率、成活率、體長增長率及粗蛋白、粗脂肪和磷含量均有顯著影響（P<0.05，下同）。4號(hào)組和5號(hào)組凡納濱對(duì)蝦的增重率和體長增長率最高，顯著高于其他各組；2～5號(hào)組的凡納濱對(duì)蝦成活率均達(dá)100%，顯著高于對(duì)照組；4、5號(hào)組凡納濱對(duì)蝦的粗蛋白含量顯著高于對(duì)照組和1、2號(hào)組；3、4、5號(hào)組粗脂肪含量及各試驗(yàn)組磷含量均顯著低于對(duì)照組。抗菌肽對(duì)凡納濱對(duì)蝦的餌料系數(shù)及水分、粗灰分和鈣含量則無顯著影響（P>0.05）?！窘Y(jié)論】在餌料中添加抗菌肽可提高凡納濱對(duì)蝦蝦苗的增重率和成活率，并適當(dāng)改善凡納濱對(duì)蝦營養(yǎng)品質(zhì)，以添加量為5.0～8.0 mL/kg的效果最佳。

關(guān)鍵詞： 抗菌肽；凡納濱對(duì)蝦；生長性能；營養(yǎng)成分

中圖分類號(hào)： S963.73 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：2095-1191（2016）04-0674-05

0 引言

【研究意義】凡納濱對(duì)蝦（Penaeus vannamei）又名南美白對(duì)蝦，是原產(chǎn)于太平洋西海岸至墨西哥灣中部的大型對(duì)蝦，經(jīng)美國夏威夷海洋研究所進(jìn)行人工繁殖育苗和人工養(yǎng)殖成功后，逐步向世界推廣養(yǎng)殖。近年來，我國凡納濱對(duì)蝦養(yǎng)殖規(guī)模不斷擴(kuò)大，其養(yǎng)殖產(chǎn)量在對(duì)蝦品種中位居前列。但隨著其養(yǎng)殖業(yè)的快速發(fā)展、高密度集約化程度的增大，養(yǎng)殖病害問題逐年增加，抗生素等藥物濫用情況嚴(yán)重，致使部分對(duì)蝦產(chǎn)品中的藥物殘留量增加或嚴(yán)重超標(biāo)，不僅威脅到食品安全，還影響水產(chǎn)品出口，給我國對(duì)蝦養(yǎng)殖業(yè)造成了一定的經(jīng)濟(jì)損失。抗菌肽作為一種近年來推廣應(yīng)用的新型飼料添加劑，能夠被養(yǎng)殖動(dòng)物降解，無殘留物質(zhì)，對(duì)環(huán)境無任何污染，是一種無毒、無害、綠色環(huán)保的產(chǎn)品（汪以真等，2004）。若能在對(duì)蝦餌料中加以添加應(yīng)用，對(duì)促進(jìn)對(duì)蝦健康養(yǎng)殖技術(shù)推廣將有重要意義?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】至今，在畜禽和水產(chǎn)養(yǎng)殖飼料中添加抗菌肽的研究已有較多報(bào)道。畜禽養(yǎng)殖方面，溫劉發(fā)等（2001）研究發(fā)現(xiàn)，飼喂含抗菌肽飼料，可減輕斷奶仔豬腹瀉；覃小榮等（2011）研究表明，抗菌肽對(duì)保育豬生產(chǎn)性能和健康水平具有良好的促進(jìn)作用；宋士剛等（2012）、馬倩等（2012）研究表明，在日糧中添加適量抗菌肽，能提高雞的生產(chǎn)性能，并顯著提高血清總蛋白和血清總膽固醇水平。水產(chǎn)養(yǎng)殖方面，黃滄海等（2009）、王四新等（2011，2012）研究發(fā)現(xiàn)，在餌料中添加抗菌肽，對(duì)羅非魚、草魚、鯉魚的生長性能均有很好的促進(jìn)作用；陳冰等（2010）、宋理平等（2010）、柴仙琦等（2012）研究表明，抗菌肽能顯著提高凡納濱對(duì)蝦的抗病力?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】目前，有關(guān)抗菌肽在凡納濱對(duì)蝦中的應(yīng)用研究主要集中在生長和免疫方面，而針對(duì)抗菌肽影響凡納濱對(duì)蝦生長性能及肌肉常規(guī)營養(yǎng)成分的研究鮮見報(bào)道?！緮M解決的關(guān)鍵問題】研究飼料中添加不同濃度的抗菌肽對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長性能及機(jī)體常規(guī)營養(yǎng)成分的影響，旨在為水產(chǎn)餌料抗菌肽添加劑的研發(fā)與使用提供參考。

1 材料與方法

1. 1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)用對(duì)蝦蝦苗由廣西粵海公司苗場(chǎng)提供，暫養(yǎng)1周后正式分組試驗(yàn)?？咕模ㄒ簯B(tài)，主要成分為天蠶素，有效含量92%）購自瑞鑫百奧生物科技（深圳）科技有限公司?；A(chǔ)飼料為廣西粵海公司的市售凡納濱對(duì)蝦餌料，其蛋白質(zhì)含量為42%。試驗(yàn)用水使用鹵水調(diào)配而成，并經(jīng)充分曝氣。

1. 2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)在廣西大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院水產(chǎn)教學(xué)科研基地苗種車間進(jìn)行。凡納濱對(duì)蝦經(jīng)50 mg/L季銨鹽消毒15 min后隨機(jī)分組，分別養(yǎng)于6個(gè)大小相同、容積為120 cm×120 cm×80 cm的水族箱內(nèi)，每箱用篩絹網(wǎng)隔為3個(gè)大小相同的空間，水深保持在50 cm左右，以加熱棒配合恒溫控制系統(tǒng)，控制水溫在30～31 ℃。以箱為單位，每箱為1組，共設(shè)6個(gè)試驗(yàn)組，每組設(shè)3個(gè)平行，每個(gè)平行放養(yǎng)70尾蝦苗。試驗(yàn)期間，以配比0.5%魚肝油混合抗菌肽拌在基礎(chǔ)餌料中陰干后投喂，進(jìn)行對(duì)比養(yǎng)殖試驗(yàn)。各組抗菌肽添加量分別為1.0 mL/kg（1號(hào)組）、3.0 mL/kg（2號(hào)組）、5.0 mL/kg（3號(hào)組）、8.0 mL/kg（4號(hào)組）、12.0 mL/kg（5號(hào)組），對(duì)照組只添加0.5%魚肝油不添加抗菌肽。試驗(yàn)周期為40 d。

試驗(yàn)期間，每日投餌量為蝦體總重量的6%～8%，分別于9：00～10：00和17：00～18：00投喂，并根據(jù)天氣、攝食強(qiáng)度、水溫等變化情況及時(shí)調(diào)整餌料投喂量，每天投喂1.5 h后統(tǒng)計(jì)投喂量和殘餌數(shù)量，以計(jì)算其攝食量和餌料系數(shù)。采用微流水循環(huán)過濾交換，24 h連續(xù)充氣增氧，每隔5 d吸污1次，以保證良好的水質(zhì)環(huán)境。每日進(jìn)行常規(guī)的水質(zhì)指標(biāo)監(jiān)測(cè)，主要水質(zhì)指標(biāo)值為：水溫（30.5±0.5）℃，溶解氧6.0±0.5 mg/L，pH 8.4±0.2，氨氮0.03±0.01 mg/L，鹽度（5.5±0.1）‰。

1. 3 生長性能指標(biāo)測(cè)定

在試驗(yàn)開始及結(jié)束時(shí)，分別對(duì)各試驗(yàn)組對(duì)蝦記數(shù)，同時(shí)抽樣測(cè)量體長、稱重。試驗(yàn)開始時(shí)在暫養(yǎng)池中選擇個(gè)體生長均勻一致的蝦苗，隨機(jī)取樣測(cè)量（平均體重0.52±0.03 g，平均體長3.58±0.23 cm），平均分配至各試驗(yàn)組養(yǎng)殖，結(jié)束后每組取120尾對(duì)蝦（3個(gè)平行隨機(jī)各取40尾）測(cè)量。各項(xiàng)生長性能指標(biāo)按照如下公式分別計(jì)算：

成活率（%）=試驗(yàn)結(jié)束存活對(duì)蝦尾數(shù)/試驗(yàn)開始對(duì)蝦尾數(shù)×100

增重率（%）=（Wt-Wo）/Wo×100

餌料系數(shù)=FI/（Wt-Wo）

式中，Wt為試驗(yàn)結(jié)束時(shí)對(duì)蝦的平均體重（g）；Wo為試驗(yàn)開始時(shí)對(duì)蝦的平均體重（g）；FI為攝食量（g）；t為試驗(yàn)天數(shù)（d）。

1. 4 機(jī)體成分測(cè)定

將試驗(yàn)結(jié)束后測(cè)量體長、體重的各組凡納濱對(duì)蝦肌肉樣品置于烘箱中，65 ℃烘至恒重，參照張麗英等（2003）的方法測(cè)定水分、粗蛋白、粗脂肪、粗灰分及鈣、磷含量。其中，粗蛋白含量采用凱氏定氮法測(cè)定，粗脂肪含量采用索氏提取法測(cè)定，粗灰分含量采用馬福爐灼燒法（550 ℃）測(cè)定，鈣含量采用高錳酸鉀滴定法測(cè)定，磷含量采用鉬黃比色法測(cè)定。

1. 5 統(tǒng)計(jì)分析

采用SPSS 18.0軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。試驗(yàn)結(jié)果經(jīng)一元方差齊性分析后，方差齊性運(yùn)用LSD法進(jìn)行單因素方差多重比較；方差非齊性采用Tamhanes T2法進(jìn)行單因素方差分析，再進(jìn)行Duncans多重比較。

2 結(jié)果與分析

2. 1 投喂抗菌肽餌料對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長性能的影響

由表1可知，餌料中抗菌肽添加量≥3.0 mL/kg的2～5號(hào)組凡納濱對(duì)蝦成活率均為100%，顯著高于對(duì)照組（P<0.05，下同）；1號(hào)組凡納濱對(duì)蝦的成活率（93%）也高于對(duì)照組，但兩者間無顯著差異（P>0.05，下同）。投喂抗菌肽添加量≥8.0 mL/kg餌料的4號(hào)組和5號(hào)組凡納濱對(duì)蝦增重率分別為257.17%和266.96%，顯著高于其他處理組，但兩組間無顯著差異；抗菌肽添加量為5.0 mL/kg的3號(hào)組凡納濱對(duì)蝦增重率顯著高于對(duì)照組、1號(hào)組和2號(hào)組；以4號(hào)組和5號(hào)組餌料對(duì)凡納濱對(duì)蝦的增重效果最佳。4號(hào)組和5號(hào)組的凡納濱對(duì)蝦體長增長率分別為159.64%和161.20%，也顯著高于其他處理組，但兩者間差異不顯著；對(duì)照組與1、2、3號(hào)組間的體長增長率差異也不顯著。6個(gè)處理組間的餌料系數(shù)差異均不顯著，以抗菌肽添加量為12.0 mL/kg的5號(hào)組餌料系數(shù)最低。

2. 2 投喂抗菌肽餌料對(duì)凡納濱對(duì)蝦機(jī)體營養(yǎng)成分的影響

由表2可知，不同抗菌肽水平餌料對(duì)凡納濱對(duì)蝦機(jī)體的粗蛋白、粗脂肪和磷含量的影響顯著，而對(duì)水分、粗灰分和鈣含量無顯著影響。其中，5號(hào)組凡納濱對(duì)蝦肌肉的粗蛋白含量最高（88.74%），顯著高于其他處理組，4號(hào)組次之，顯著高于對(duì)照組、1號(hào)組和2號(hào)組，而對(duì)照組、1號(hào)組和2號(hào)組間無顯著差異；對(duì)照組凡納濱對(duì)蝦肌肉的粗脂肪含量為11.81%，顯著高于其他處理組，1號(hào)組和2號(hào)組的粗脂肪含量顯著高于4號(hào)組和5號(hào)組，但與3號(hào)組間無顯著差異；磷含量以對(duì)照組最高，顯著高于各試驗(yàn)組，而4號(hào)組的磷含量最低，顯著低于其余4個(gè)試驗(yàn)組，但1、2、3、5號(hào)組間差異不顯著。水分含量以5號(hào)組最高，1號(hào)組最低；粗灰分含量以對(duì)照組最高，2號(hào)組最低；鈣含量則以對(duì)照組最低，3號(hào)組最高。

3 討論

3. 1 抗菌肽作用及其對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長性能的影響

本研究結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，添加不同水平的抗菌肽對(duì)凡納濱對(duì)蝦增重率有不同程度的影響，其中添加量為5.0、8.0和12.0 mL/kg試驗(yàn)組的增重率均顯著高于對(duì)照組，但添加量≤3.0 mL/kg時(shí)，增重率與對(duì)照組無顯著差異，說明在餌料中適量添加抗菌肽，對(duì)凡納濱對(duì)蝦有顯著的增重效果，與宋理平等（2010）、柴仙琦等（2012）的研究結(jié)果一致。動(dòng)物的生長受環(huán)境中某些因子的影響，雖然不會(huì)導(dǎo)致動(dòng)物產(chǎn)生臨床癥狀或亞臨床癥狀，但對(duì)動(dòng)物的生長產(chǎn)生抑制作用，而被稱為抗生長因子（Zasloff，2002）?？?fàn)I養(yǎng)因子是天然飼料中存在的一些對(duì)動(dòng)物生長不利的因子，也屬于抗生長因子的范疇，有些是天然存在的化學(xué)成分，有些是在原料或飼料貯存過程中產(chǎn)生的毒素（趙東紅等，1999）。有研究證明，抗菌肽可中和細(xì)菌產(chǎn)生的內(nèi)毒素，從而抑制內(nèi)毒癥的產(chǎn)生（Matsuzaki et al.，1998）。許培玉和周洪琪（2004）在凡納濱對(duì)蝦餌料中添加小肽及李偉前（2009）添加胰多肽于肉鴨飼料中的研究結(jié)果表明，小肽和胰多肽均可提高試驗(yàn)動(dòng)物的消化酶活性。據(jù)此推測(cè)，在餌料中添加一定量的抗菌肽對(duì)凡納濱對(duì)蝦具有良好的促長作用，可能與抗菌肽可抑制腸道內(nèi)有害菌的生長并降低抗生長因子影響，同時(shí)通過提高動(dòng)物消化道各類消化酶的活性以促進(jìn)凡納濱對(duì)蝦的消化吸收能力有關(guān)，具體原因有待進(jìn)一步探究。

在添加抗菌肽的各試驗(yàn)組中，除1.0 mL/kg試驗(yàn)組的凡納濱對(duì)蝦成活率為93%以外，其余各組成活率均達(dá)100%，與Lü等（2007）研究奧尼羅非魚的結(jié)果相似。添加抗菌肽能夠提高養(yǎng)殖動(dòng)物成活率，可能是提高了動(dòng)物體內(nèi)免疫力的結(jié)果。王廣軍等（2005）的研究結(jié)果顯示，添加抗菌肽能顯著提高凡納濱對(duì)蝦抗病力。抗菌肽具有與抗菌素相同的抑制病原微生物特性，但其在抗菌機(jī)理、產(chǎn)生機(jī)制、組成、分子結(jié)構(gòu)和作用方式等方面與傳統(tǒng)的抗菌素存在明顯差異（問鑫和高鳳仙，2013）。與傳統(tǒng)抗生素相比，抗菌肽最大的優(yōu)點(diǎn)在于其作用迅速，直接作用于細(xì)菌的細(xì)胞膜，通過改變細(xì)菌的膜結(jié)構(gòu)殺死細(xì)菌，且不易誘導(dǎo)細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性，而傳統(tǒng)抗生素大多通過細(xì)菌體內(nèi)的某些酶起作用，一般需經(jīng)過數(shù)天才見效（蘇月菊，2008）。抗菌肽還能在餌料或水體中對(duì)水中的微生物加以控制，殺滅如弧菌等致病微生物（姜蘭等，2002）。本研究結(jié)果表明，添加3.0 mL/kg以上的抗菌肽可顯著提高凡納濱對(duì)蝦成活率，說明添加小劑量的抗菌肽即可提高凡納濱對(duì)蝦生產(chǎn)效益。

3. 2 抗菌肽對(duì)凡納濱對(duì)蝦機(jī)體營養(yǎng)成分的影響

肌肉中蛋白質(zhì)和脂肪含量是評(píng)價(jià)養(yǎng)殖動(dòng)物營養(yǎng)價(jià)值和各類添加劑效果的重要指標(biāo)。本研究結(jié)果顯示，隨著餌料中抗菌肽添加量的提高，各試驗(yàn)組凡納濱對(duì)蝦肌肉的粗蛋白含量相應(yīng)增加；抗菌肽添加量≥8.0 mL/kg的試驗(yàn)組凡納濱對(duì)蝦肌肉的粗蛋白含量顯著高于對(duì)照組，說明添加一定量的抗菌肽有助于蛋白質(zhì)、氨基酸等營養(yǎng)物質(zhì)的消化、吸收及機(jī)體內(nèi)蛋白質(zhì)的合成和沉淀，但最佳添加量及抗菌肽對(duì)機(jī)體內(nèi)蛋白質(zhì)合成的影響機(jī)理有待進(jìn)一步探究。本研究中，隨著餌料中抗菌肽添加量大于5.0 mL/kg，凡納濱對(duì)蝦肌肉中的粗脂肪含量較對(duì)照組顯著下降，表明不同水平的抗菌肽對(duì)凡納濱對(duì)蝦脂肪代謝的影響顯著。這可能與抗菌肽通過影響一系列的酶活性，導(dǎo)致凡納濱對(duì)蝦機(jī)體內(nèi)的脂肪分解代謝加強(qiáng)，脂肪酸合成速度被抑制，最終降低了體脂沉積有關(guān)。有研究證明，當(dāng)肌肉中脂肪含量為3.5%～4.5%時(shí)適口性良好（劉世祿等，2002）。在餌料中添加一定量的抗菌肽能顯著提高凡納濱對(duì)蝦肌肉中的蛋白質(zhì)含量并顯著降低脂肪含量，符合現(xiàn)代人高蛋白低脂肪的飲食和營養(yǎng)需求。

鈣和磷是動(dòng)物機(jī)體重要的營養(yǎng)元素，具有重要的生理功能。鈣和磷代謝的主要場(chǎng)所是動(dòng)物腸道，因此，腸道自身的微環(huán)境變化對(duì)鈣、磷吸收和排泄具有重要的影響（王彥波，2010）。本研究結(jié)果表明，餌料中抗菌肽的添加量達(dá)12.0 mL/kg時(shí)對(duì)凡納濱對(duì)蝦肌肉的鈣含量無明顯影響，但添加少量（1.0 mL/kg）卻顯著降低肌肉的磷含量，說明抗菌肽進(jìn)入機(jī)體后會(huì)在一定程度上降低磷在凡納濱對(duì)蝦肌肉中的沉積，在試驗(yàn)期內(nèi)并未發(fā)現(xiàn)凡納濱對(duì)蝦因缺磷而表現(xiàn)出的相關(guān)病癥，各試驗(yàn)組的成活率均高于對(duì)照組，其中4號(hào)組和5號(hào)組凡納濱對(duì)蝦肌肉磷含量顯著低于對(duì)照組，但增重率和體長增長率顯著高于對(duì)照組，因此認(rèn)為，添加12.0 mL/kg抗菌肽餌料投喂40 d所引起的凡納濱對(duì)蝦肌肉磷含量降低不會(huì)影響凡納濱對(duì)蝦的正常生長。有關(guān)抗菌肽對(duì)機(jī)體內(nèi)磷代謝的影響機(jī)制及因磷的缺乏導(dǎo)致凡納濱對(duì)蝦生長受影響時(shí)的抗菌肽添加量尚需進(jìn)一步研究。

4 結(jié)論

在餌料中添加抗菌肽可提高凡納濱對(duì)蝦蝦苗的增重率和成活率，并適當(dāng)改善凡納濱對(duì)蝦營養(yǎng)品質(zhì)，以添加量為5.0～8.0 mL/kg的效果最佳。

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（責(zé)任編輯 羅 麗）