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    草莓葉葉黃素循環(huán)組分超高效液相色譜分析

    2016-05-30 15:46:26陳敏氡朱海生
    熱帶作物學(xué)報(bào) 2016年9期

    陳敏氡 朱海生

    摘 要 為建立草莓葉葉黃素循環(huán)組分超高效液相色譜(UPLC)的分析方法,優(yōu)化草莓葉葉黃素循環(huán)組分的提取條件,建立適宜的UPLC測(cè)定方法,通過(guò)研究強(qiáng)光下各組分含量的變化規(guī)律進(jìn)行驗(yàn)證,結(jié)果表明,以丙酮為提取劑,不經(jīng)過(guò)皂化直接提取,采用C18色譜柱,以乙腈 ∶ 甲醇=9 ∶ 1為流動(dòng)相,流速0.5 mL/min,波長(zhǎng)445 nm,柱溫30 ℃能較好地分離及測(cè)定草莓葉葉黃素循環(huán)各組分,方法快速穩(wěn)定,檢測(cè)時(shí)間僅需1.2 min。強(qiáng)光下,玉米黃質(zhì)、葉黃素循環(huán)庫(kù)和脫環(huán)氧化程度均明顯升高而紫黃質(zhì)下降,符合葉黃素循環(huán)調(diào)控規(guī)律,證實(shí)此方法可靠??梢?jiàn),實(shí)驗(yàn)所建立的UPLC測(cè)定方法適合草莓葉葉黃素循環(huán)組分分析。

    關(guān)鍵詞 草莓葉;葉黃素循環(huán)組分;UPLC

    中圖分類號(hào) S668.4 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A

    草莓(Fragaria ananassa Duch.)喜溫暖而不耐高溫強(qiáng)光,在越夏露地栽培時(shí)比一般果菜類更易發(fā)生光抑制,光損傷,嚴(yán)重影響其品質(zhì)及產(chǎn)量[1-3]。目前,有關(guān)葉黃素循環(huán)對(duì)草莓葉片光系統(tǒng)的保護(hù)作用成為研究者關(guān)注的熱點(diǎn)。徐凱等[4]研究了草莓葉片光合作用對(duì)強(qiáng)光的響應(yīng),推測(cè)葉黃素循環(huán)在草莓葉片防御光損傷方面起著重要作用。張廣華等[5]發(fā)現(xiàn),草莓葉片在光抑制過(guò)程中,依賴葉黃素循環(huán)的熱耗散是其排散過(guò)剩光能的重要途徑之一。鄭毅等[6]認(rèn)為,葉黃素循環(huán)是草莓葉片在溫度脅迫下主要的自我保護(hù)機(jī)制。葉黃素循環(huán)(Xanthophyll cycle)主要由玉米黃質(zhì)(Zeaxanthin,Z)、環(huán)氧玉米黃質(zhì)(Antheraxanthin,A)和紫黃質(zhì)(Violaxanthin,V)3種組分參與,明確Z、A和V含量以及葉黃素循環(huán)庫(kù)(V+A+Z)、葉黃素循環(huán)脫環(huán)氧化狀態(tài)(A+Z)/(V+A+Z)在光抑制中的變化特性是闡明葉黃素循環(huán)光保護(hù)機(jī)制的關(guān)鍵[7-9]。因此,在草莓上,急需建立一種快速、準(zhǔn)確的葉黃素循環(huán)組分(A、V和Z)的測(cè)定方法,分析各組分在光抑制中變化規(guī)律,這將對(duì)今后探索草莓葉黃素循環(huán)在保護(hù)光系統(tǒng)和抗逆中的作用產(chǎn)生重要意義。高效液相色譜法(High performance liquid chromatography,HPLC)是近年來(lái)分離及測(cè)定植物天然色素的主要方法,但在實(shí)際應(yīng)用中仍然存在分析時(shí)間長(zhǎng),分離效果不佳等缺陷[10]。Cheng等[11]采用Zorbax-ODS色譜柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),甲醇 ∶ 乙腈(75 ∶ 25)和甲醇 ∶ 乙酸乙酯(70 ∶ 30)為流動(dòng)相分離蘋果葉片中的紫黃質(zhì)、環(huán)氧玉米黃質(zhì)和玉米黃質(zhì)耗時(shí)20 min以上。韋朝領(lǐng)等[12]利用Spherisorb C18色譜柱(4.6 mm×250 mm,5 μm)對(duì)茶葉中葉黃素循環(huán)組分進(jìn)行分析,檢測(cè)時(shí)間15 min。崔海巖等[13]通過(guò)Spherisorb C18色譜柱(4.0 mm×250 mm,5 μm)可在8 min內(nèi)完成玉米葉片葉黃素循環(huán)組分的定性定量,然而流動(dòng)相中添加Tris-HCl緩沖液而存在管路堵塞的風(fēng)險(xiǎn)。超高效液相色譜法(Ultra performance liquid chromatography,UPLC)是基于HPLC推出的一種新型的液相色譜技術(shù),它使用粒徑低于2 μm的小顆粒填充色譜柱提升樣品的分析效率,彌補(bǔ)了HPLC的缺陷,分離速度、靈敏度以及分離度高達(dá)HPLC的9、3、1.7倍,且在HPLC的基礎(chǔ)上兼具環(huán)境友好、成本低等特點(diǎn),已逐漸成為食品分析檢測(cè)的有效工具[14-15]。目前,UPLC技術(shù)已經(jīng)應(yīng)用到草莓果實(shí)葉黃素、番茄紅素和β-胡蘿卜素等多種類胡蘿卜素的測(cè)定,測(cè)定時(shí)間僅5 min,比普通HPLC縮短約70%[16]。葉黃素循環(huán)的3種組分均屬于類胡蘿卜素,因此,同樣可以將UPLC技術(shù)運(yùn)用到葉黃素循環(huán)組分的測(cè)定,獲得快速、穩(wěn)定的草莓葉葉黃素組分分析方法。本試驗(yàn)通過(guò)優(yōu)化草莓葉片葉黃素循環(huán)組分的提取條件,建立適宜的UPLC分析方法,并通過(guò)研究強(qiáng)光下草莓葉片葉黃素循環(huán)組分含量的變化規(guī)律對(duì)此方法進(jìn)行驗(yàn)證,從而確定適合草莓葉葉黃素循環(huán)組分分析的方法,為今后進(jìn)一步研究草莓葉葉黃素循環(huán)在光系統(tǒng)和逆境中的作用提供技術(shù)支撐。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    1.1.1 試驗(yàn)材料與處理 試驗(yàn)于2014-2015年在福建省福清東張?jiān)囼?yàn)基地進(jìn)行,供試材料為自主選育草莓品種“福莓1號(hào)”。選取生長(zhǎng)健壯的三葉一心苗,移栽到直徑160 mm,高140 mm的塑料盆中,生長(zhǎng)期間保證水肥充足,常規(guī)管理。當(dāng)植株張至6~7片葉,選取大小和生長(zhǎng)狀態(tài)一致的草莓盆栽苗,將盆栽苗從室外移至室內(nèi)預(yù)培養(yǎng)一周,每天光照10 h,光源為鏑燈,接著取3盆長(zhǎng)勢(shì)一致的草莓苗進(jìn)行模擬強(qiáng)光脅迫(光強(qiáng)2 000 μmol/(m2·s),溫度(25±1)℃ 3 h,以未經(jīng)處理的盆栽為對(duì)照,試驗(yàn)重復(fù)3次,取大小相同的功能葉數(shù)片,放入液氮中速凍待測(cè)。

    1.1.2 試劑 玉米黃質(zhì)、紫黃質(zhì)、環(huán)氧玉米黃質(zhì)為標(biāo)準(zhǔn)樣品(ChromaDex,USA),純度均為95%以上;乙腈和甲醇為色譜純(Fisher,USA);甲醇、乙醇、丙酮、石油醚、乙酸乙酯、無(wú)水硫酸鈉均為分析純,購(gòu)自上海國(guó)藥集團(tuán)。

    1.1.3 儀器 超高效液相色譜儀ACQUITY UPLC H-Class(Waters,USA),光電二極管矩陣檢測(cè)器eλPDA(Waters,USA),ACQUITY UPLC BEH C18色譜柱(2.1 mm×100 mm,1.7 μm)(Waters,USA),旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器RV10(IKA,Germany),紫外分光光度計(jì)Ultrospec1100 pro(Amersham,USA),超聲波粉碎儀VCX130PB(Sonics,USA)等。

    1.2 方法

    1.2.1 草莓葉葉黃素循環(huán)組分的提取 用液氮將草莓葉片研磨至粉末,準(zhǔn)確稱取0.1 g,加入5 mL丙酮提取劑,于4 ℃避光浸提5 min,低溫超聲提取2 min,12 000 r/min,4 ℃離心10 min,取上清液,重復(fù)操作1次,合并上清液,定容至10 mL,用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀于40 ℃將其蒸干,用丙酮定容至5 mL,4 ℃避光放置。

    提取劑的優(yōu)化:選擇7種不同極性的有機(jī)溶劑或組合,依次為:甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、丙酮石油醚(4 ∶ 1)、丙酮石油醚(1 ∶ 1)、石油醚。分析不同提取劑對(duì)草莓葉葉黃素循環(huán)各組分含量總和(即葉黃素循環(huán)庫(kù))的提取效果,確定最適提取劑。

    提取方法的優(yōu)化:采用非皂化和皂化2種方法對(duì)草莓葉葉黃素循環(huán)組分進(jìn)行提取,其中皂化提取參照草莓類胡蘿卜素的皂化方法[16],通過(guò)分析二者對(duì)草莓葉葉黃素循環(huán)庫(kù)的提取效果,確定適用的提取方法。

    1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制 將玉米黃質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)樣品用丙酮配制成濃度為20 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液,紫黃質(zhì)和環(huán)氧玉米黃質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)樣品用乙醇分別配制成濃度為0.8和0.4 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液,放置于-80 ℃?zhèn)溆谩?/p>

    1.2.3 UPLC色譜條件 色譜柱:ACQUITY UPLC BEH C18色譜柱(2.1 mm×100 mm,1.7 μm);流動(dòng)相:乙腈 ∶ 甲醇=9 ∶ 1(V/V);流速:0.5 mL/min;進(jìn)樣體積:10 μL;色譜柱溫度:30 ℃;樣品溫度:30℃;波長(zhǎng)掃描范圍:100~600 nm;檢測(cè)波長(zhǎng):445 nm。

    1.2.4 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的制備 將1.2.2配制3種標(biāo)準(zhǔn)溶液逐個(gè)稀釋成不同濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)溶液,按1.2.3的色譜條件進(jìn)行測(cè)定。以標(biāo)準(zhǔn)樣品濃度為橫坐標(biāo)(x),峰面積為縱坐標(biāo)(y),繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線并計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程以及相關(guān)系數(shù),

    1.2.5 精密度、重復(fù)性試驗(yàn) 將3種標(biāo)準(zhǔn)樣品的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液按1.2.3的色譜條件進(jìn)行5次連續(xù)進(jìn)樣,以各組分峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(Relative standard deviation,RSD),來(lái)檢測(cè)該方法的精密度。平行制備5份樣品,按照1.2.1的提取方法及1.2.3的色譜條件進(jìn)行測(cè)定,計(jì)算各組分峰面積的RSD來(lái)考察方法的重復(fù)性。

    1.2.6 加標(biāo)回收試驗(yàn) 稱取4份等量的草莓葉片粉末,其中3份如表3所示分別進(jìn)行3個(gè)水平的加標(biāo),余下1份作空白對(duì)照。按1.2.1的方法提取樣品,按1.2.3的色譜條件分析樣品中葉黃素循環(huán)組分含量,計(jì)算回收率及回收率的RDS,試驗(yàn)平行測(cè)定3次。

    1.2.7 草莓葉葉黃素循環(huán)組分含量的測(cè)定 利用1.2.3的色譜條件分別對(duì)強(qiáng)光脅迫處理及未處理的草莓葉片中玉米黃質(zhì),紫黃質(zhì)和環(huán)氧玉米黃質(zhì)含量進(jìn)行測(cè)定,測(cè)定樣品前用流動(dòng)相進(jìn)行稀釋,并經(jīng)0.22 μm濾膜過(guò)濾,試驗(yàn)平行測(cè)定5次。

    1.3 數(shù)據(jù)分析

    采用Excel 2010和SPSS 17.0軟件對(duì)測(cè)定的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 草莓葉片葉黃素循環(huán)組分提取條件的優(yōu)化

    2.1.1 不同提取劑提取效果的比較 由圖1可以看出,7種提取劑的提取效果存在顯著差異,極性高的提取劑如甲醇、乙醇和丙酮等提取效果較好;反之,極性低的石油醚提取效果最差。其中,通過(guò)甲醇或丙酮所提取的葉黃素循環(huán)庫(kù)含量最高,與石油醚的提取效果存在顯著差異(p<0.05)。可見(jiàn),需選擇極性高的提取劑來(lái)提取草莓葉葉黃素循環(huán)各組分。

    2.1.2 不同提取方法提取效果的比較 由圖2可以看出,采用非皂化和皂化2種方法所提取的葉黃素循環(huán)庫(kù)含量差異較大,皂化處理明顯損耗草莓葉片葉黃素循環(huán)庫(kù)的含量。因此,確定不經(jīng)皂化而直接提取草莓葉片葉黃素循環(huán)各組分。

    2.2 UPLC分析條件的優(yōu)化選擇

    2.2.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 對(duì)玉米黃質(zhì)、環(huán)氧玉米黃質(zhì)和紫黃質(zhì)3種標(biāo)準(zhǔn)樣品的光譜掃描發(fā)現(xiàn),3種標(biāo)準(zhǔn)樣品的吸收峰均集中在445 nm左右,玉米黃質(zhì)的最大吸收波長(zhǎng)為450 nm,紫黃質(zhì)為440 nm,環(huán)氧玉米黃質(zhì)為449 nm,并且考慮到前人在分析植物葉黃素循環(huán)組分時(shí)也有采用445 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)[11-12]。因此,選擇445 nm作為草莓葉葉黃素循環(huán)組分測(cè)定的檢測(cè)波長(zhǎng)。

    2.2.2 色譜條件的確定 由于葉黃素循環(huán)的3種組分均屬于類胡蘿卜素。因此,本實(shí)驗(yàn)參照草莓果實(shí)類胡蘿卜素UPLC方法的色譜條件[16]對(duì)三者進(jìn)行分析,結(jié)果3種組分的分離效果較好,說(shuō)明該色譜條件適用于葉黃素循環(huán)組分的分析,但由于本實(shí)驗(yàn)采用是柱長(zhǎng)為100 mm的色譜柱,較于原來(lái)柱長(zhǎng)50 mm的色譜柱分析時(shí)間明顯增加,因此通過(guò)改進(jìn)原來(lái)的色譜條件參數(shù),包括提高進(jìn)樣體積、色譜柱溫度以及樣品溫度,從而縮短分析時(shí)間。最終確定的色譜條件為乙腈 ∶ 甲醇=9 ∶ 1(V/V)為流動(dòng)相,流速0.5 mL/min,進(jìn)樣體積10 μL,柱溫30 ℃,樣品溫度30 ℃,在此色譜條件下3種標(biāo)準(zhǔn)樣品可以完全分離,峰形對(duì)稱性好,并且分析時(shí)間較短(圖3)。

    2.3 UPLC分析方法的可靠性分析

    2.3.1 線性關(guān)系及檢出限、定量限測(cè)定 由表1可知,玉米黃質(zhì)、紫黃質(zhì)和環(huán)氧玉米黃質(zhì)的線性相關(guān)系數(shù)依次為0.995 0、0.999 5、0.999 9,表明3種標(biāo)準(zhǔn)樣品的進(jìn)樣濃度與峰面積具有良好的線性關(guān)系。以信噪比(S/N)為3所對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)樣品濃度為檢出限,以信噪比(S/N)為10所對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)樣品濃度為定量限,3種標(biāo)準(zhǔn)樣品的檢出限為0.003~0.01 μg/mL,定量限為0.005~0.02 μg/mL,說(shuō)明該方法具有較高的靈敏性。

    2.3.2 精密度、重復(fù)性試驗(yàn) 由表2可知,玉米黃質(zhì)、紫黃質(zhì)和環(huán)氧玉米黃質(zhì)3種組分在精密度試驗(yàn)中對(duì)應(yīng)的RSD依次為0.3%、0.7%和1.2%,重復(fù)性測(cè)定中玉米黃質(zhì)、紫黃質(zhì)和環(huán)氧玉米黃質(zhì)3種組分對(duì)應(yīng)的RSD依次為0.5%、0.9%、1.3%,均小于2%,表明該方法具有良好的精密度和重復(fù)性。

    2.3.3 加標(biāo)回收試驗(yàn) 由表3可得,玉米黃質(zhì)、紫黃質(zhì)和環(huán)氧玉米黃質(zhì)3種標(biāo)準(zhǔn)樣品的回收率為95.6%-104.9%,均在95%以上,并且回收率的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.9%~1.7%,均小于2%,表明此方法符合分析要求。

    2.4 草莓葉片葉黃素循環(huán)組分含量的測(cè)定

    由圖4看出,在445 nm下可檢測(cè)到3種物質(zhì),它們的保留時(shí)間與3種標(biāo)準(zhǔn)樣品的保留時(shí)間依次相差0.006、0.009、0.011 min。因此,確定3個(gè)物質(zhì)分別為紫黃質(zhì)、環(huán)氧玉米黃質(zhì)和玉米黃質(zhì)。由表4可得,未處理的草莓葉片中紫黃質(zhì)(V)、環(huán)氧玉米黃質(zhì)(A)和玉米黃質(zhì)(Z)的含量依次為80.2、24.1、475.1 μg/g,Z的含量分別約為V和A的5.9倍和19.7倍,可見(jiàn)Z是草莓葉黃素循環(huán)中的主要組分。強(qiáng)光脅迫后,葉片中的Z含量明顯升高,V含量下降,A含量基本不變,Z從475.1變?yōu)?51.3 μg/g,升高1.16倍,而V則從80.2降至53.9 μg/g。此外,葉黃素循環(huán)庫(kù)(A+V+Z)和脫環(huán)氧化狀態(tài)水平(A+Z)/(A+Z+V)也在強(qiáng)光處理后明顯升高,結(jié)果符合葉黃素循環(huán)調(diào)控規(guī)律,說(shuō)明該方法可用于草莓葉葉黃素循環(huán)組分的分析。

    3 討論與結(jié)論

    本實(shí)驗(yàn)選擇極性不同的7種提取劑,即甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、丙酮 ∶ 石油醚(4 ∶ 1)、丙酮 ∶ 石油醚(1 ∶ 1)和石油醚,通過(guò)比較各個(gè)提取劑對(duì)草莓葉葉黃素循環(huán)組分的提取效果來(lái)獲得適合的提取劑。結(jié)果表明,7種提取劑的提取效果差異顯著,極性高的單一提取劑如甲醇、乙醇、丙酮的提取效果好,反之,極性低的石油醚效果差,推測(cè)可能與玉米黃質(zhì)、環(huán)氧玉米黃質(zhì)和紫黃質(zhì)中含有強(qiáng)極性的羥基、羰基、甲氧基或環(huán)氧化結(jié)構(gòu)有關(guān)[17]。在7種提取劑中,利用甲醇或丙酮所提取的葉黃素循環(huán)組分含量最高,可見(jiàn),甲醇和丙酮均是提取草莓葉片中葉黃素循環(huán)組分較好的提取劑,但考慮到甲醇的毒性較大,因此建議使用丙酮進(jìn)行提取。目前,利用皂化和非皂化的方法提取植物葉片中的葉黃素循環(huán)組分均有報(bào)道[12,18]。皂化處理可以解決玉米黃質(zhì)在有機(jī)浸提過(guò)程中難以分離等問(wèn)題,然而皂化的過(guò)程常常會(huì)導(dǎo)致樣品中色素單量以及總量不同程度的損失,而在水果類物質(zhì)中類胡蘿卜素皂化提取的損失率約為10%~15%[19-21]。因此,需要比較2種方法對(duì)草莓葉片葉黃素循環(huán)組分的提取效果,以獲得最適的提取方法。結(jié)果表明,皂化處理會(huì)損耗草莓葉片中的葉黃素循環(huán)組分,直接提取效果更好。

    針對(duì)葉黃素循環(huán)組分建立有效的測(cè)定方法是開(kāi)展草莓葉葉黃素循環(huán)調(diào)控作用研究的必備基礎(chǔ)。目前,絕大多數(shù)的測(cè)定手段還是以普通高效液相色譜(HPLC)為主,然而HPLC在實(shí)際應(yīng)用中存在耗時(shí)長(zhǎng),分離度不佳等缺陷[11-13]。因此,尋求更高效的檢測(cè)方法是未來(lái)的研究重點(diǎn)。超高效液相色譜法(UPLC)是近年來(lái)發(fā)展較快,基于HPLC的新型液相色譜檢測(cè)技術(shù)。它的最大優(yōu)勢(shì)在于采用了2.0 μm以下顆粒度的色譜填料柱,以及耐受超高壓的色譜泵和色譜系統(tǒng),現(xiàn)已成為蛋白組學(xué)、藥物分析、環(huán)境監(jiān)測(cè)等眾多高端領(lǐng)域的有效檢測(cè)方法[22-23]。眾多研究表明,將HPLC定量方法轉(zhuǎn)換并優(yōu)化為UPLC方法,在保證含量測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確的前提下,既提高了色譜峰分離度,加快了分析速度,達(dá)到了樣品分析的高通量,又減少了溶劑損耗及廢液處置費(fèi)用,降低了分析成本[24-25]。本試驗(yàn)利用UPLC分析了草莓葉葉黃素循環(huán)組分,相較于普通HPLC技術(shù)凸顯了2點(diǎn)優(yōu)勢(shì):(1)分析時(shí)間明顯縮短。利用UPLC 僅僅在1.2 min內(nèi)就能檢測(cè)出葉黃素循環(huán)的3種組分,對(duì)比韋朝領(lǐng)[12]、季本華等[26]利用HPLC的分析時(shí)間,縮短近85%以上。(2)分析方法更簡(jiǎn)單、安全,成本降低。試驗(yàn)的流動(dòng)相只需要乙腈和甲醇,避免使用了Glimore等[27]和趙世杰等[28]方法中對(duì)色譜柱有害的Tris-HCl緩沖液;分析過(guò)程以乙腈 ∶ 甲醇=9 ∶ 1(V/V)等度洗脫即可,無(wú)需通過(guò)梯度洗脫,較于徐坤[29],崔海巖等[13]報(bào)道中的提取過(guò)程更簡(jiǎn)單,此外還明顯減少了溶劑損耗,節(jié)約了分析成本。

    本研究通過(guò)優(yōu)化葉黃素循環(huán)組分的提取條件,確定色譜條件以及線性關(guān)系、重復(fù)性、精密度、回收率試驗(yàn)等的考察獲得了最適的草莓葉葉黃素循環(huán)UPLC分析方法,即以丙酮為提取劑,不經(jīng)過(guò)皂化直接提取,同時(shí)采用ACQUITY UPLC BEH C18色譜柱,以乙腈 ∶ 甲醇=9 ∶ 1為流動(dòng)相,流速0.5 mL/min,波長(zhǎng)445 nm,色譜柱溫度30 ℃,樣品溫度30 ℃。此外,通過(guò)研究強(qiáng)光下葉黃素循環(huán)各組分含量的變化規(guī)律對(duì)該方法進(jìn)行驗(yàn)證,結(jié)果符合葉黃素循環(huán)調(diào)控規(guī)律。因此,確定試驗(yàn)所建立的UPLC測(cè)定方法適合草莓葉葉黃素循環(huán)組分分析。

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