草莓葉葉黃素循環(huán)組分超高效液相色譜分析

陳敏氡 朱海生

摘 要 為建立草莓葉葉黃素循環(huán)組分超高效液相色譜（UPLC）的分析方法，優(yōu)化草莓葉葉黃素循環(huán)組分的提取條件，建立適宜的UPLC測(cè)定方法，通過(guò)研究強(qiáng)光下各組分含量的變化規(guī)律進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果表明，以丙酮為提取劑，不經(jīng)過(guò)皂化直接提取，采用C18色譜柱，以乙腈 ∶ 甲醇=9 ∶ 1為流動(dòng)相，流速0.5 mL/min，波長(zhǎng)445 nm，柱溫30 ℃能較好地分離及測(cè)定草莓葉葉黃素循環(huán)各組分，方法快速穩(wěn)定，檢測(cè)時(shí)間僅需1.2 min。強(qiáng)光下，玉米黃質(zhì)、葉黃素循環(huán)庫(kù)和脫環(huán)氧化程度均明顯升高而紫黃質(zhì)下降，符合葉黃素循環(huán)調(diào)控規(guī)律，證實(shí)此方法可靠?？梢?jiàn)，實(shí)驗(yàn)所建立的UPLC測(cè)定方法適合草莓葉葉黃素循環(huán)組分分析。

關(guān)鍵詞 草莓葉；葉黃素循環(huán)組分；UPLC

中圖分類號(hào) S668.4 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A

草莓（Fragaria ananassa Duch.）喜溫暖而不耐高溫強(qiáng)光，在越夏露地栽培時(shí)比一般果菜類更易發(fā)生光抑制，光損傷，嚴(yán)重影響其品質(zhì)及產(chǎn)量[1-3]。目前，有關(guān)葉黃素循環(huán)對(duì)草莓葉片光系統(tǒng)的保護(hù)作用成為研究者關(guān)注的熱點(diǎn)。徐凱等[4]研究了草莓葉片光合作用對(duì)強(qiáng)光的響應(yīng)，推測(cè)葉黃素循環(huán)在草莓葉片防御光損傷方面起著重要作用。張廣華等[5]發(fā)現(xiàn)，草莓葉片在光抑制過(guò)程中，依賴葉黃素循環(huán)的熱耗散是其排散過(guò)剩光能的重要途徑之一。鄭毅等[6]認(rèn)為，葉黃素循環(huán)是草莓葉片在溫度脅迫下主要的自我保護(hù)機(jī)制。葉黃素循環(huán)（Xanthophyll cycle）主要由玉米黃質(zhì)（Zeaxanthin，Z）、環(huán)氧玉米黃質(zhì)（Antheraxanthin，A）和紫黃質(zhì)（Violaxanthin，V）3種組分參與，明確Z、A和V含量以及葉黃素循環(huán)庫(kù)（V+A+Z）、葉黃素循環(huán)脫環(huán)氧化狀態(tài)（A+Z）/（V+A+Z）在光抑制中的變化特性是闡明葉黃素循環(huán)光保護(hù)機(jī)制的關(guān)鍵[7-9]。因此，在草莓上，急需建立一種快速、準(zhǔn)確的葉黃素循環(huán)組分（A、V和Z）的測(cè)定方法，分析各組分在光抑制中變化規(guī)律，這將對(duì)今后探索草莓葉黃素循環(huán)在保護(hù)光系統(tǒng)和抗逆中的作用產(chǎn)生重要意義。高效液相色譜法（High performance liquid chromatography，HPLC）是近年來(lái)分離及測(cè)定植物天然色素的主要方法，但在實(shí)際應(yīng)用中仍然存在分析時(shí)間長(zhǎng)，分離效果不佳等缺陷[10]。Cheng等[11]采用Zorbax-ODS色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），甲醇 ∶ 乙腈（75 ∶ 25）和甲醇 ∶ 乙酸乙酯（70 ∶ 30）為流動(dòng)相分離蘋果葉片中的紫黃質(zhì)、環(huán)氧玉米黃質(zhì)和玉米黃質(zhì)耗時(shí)20 min以上。韋朝領(lǐng)等[12]利用Spherisorb C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）對(duì)茶葉中葉黃素循環(huán)組分進(jìn)行分析，檢測(cè)時(shí)間15 min。崔海巖等[13]通過(guò)Spherisorb C18色譜柱（4.0 mm×250 mm，5 μm）可在8 min內(nèi)完成玉米葉片葉黃素循環(huán)組分的定性定量，然而流動(dòng)相中添加Tris-HCl緩沖液而存在管路堵塞的風(fēng)險(xiǎn)。超高效液相色譜法（Ultra performance liquid chromatography，UPLC）是基于HPLC推出的一種新型的液相色譜技術(shù)，它使用粒徑低于2 μm的小顆粒填充色譜柱提升樣品的分析效率，彌補(bǔ)了HPLC的缺陷，分離速度、靈敏度以及分離度高達(dá)HPLC的9、3、1.7倍，且在HPLC的基礎(chǔ)上兼具環(huán)境友好、成本低等特點(diǎn)，已逐漸成為食品分析檢測(cè)的有效工具[14-15]。目前，UPLC技術(shù)已經(jīng)應(yīng)用到草莓果實(shí)葉黃素、番茄紅素和β-胡蘿卜素等多種類胡蘿卜素的測(cè)定，測(cè)定時(shí)間僅5 min，比普通HPLC縮短約70%[16]。葉黃素循環(huán)的3種組分均屬于類胡蘿卜素，因此，同樣可以將UPLC技術(shù)運(yùn)用到葉黃素循環(huán)組分的測(cè)定，獲得快速、穩(wěn)定的草莓葉葉黃素組分分析方法。本試驗(yàn)通過(guò)優(yōu)化草莓葉片葉黃素循環(huán)組分的提取條件，建立適宜的UPLC分析方法，并通過(guò)研究強(qiáng)光下草莓葉片葉黃素循環(huán)組分含量的變化規(guī)律對(duì)此方法進(jìn)行驗(yàn)證，從而確定適合草莓葉葉黃素循環(huán)組分分析的方法，為今后進(jìn)一步研究草莓葉葉黃素循環(huán)在光系統(tǒng)和逆境中的作用提供技術(shù)支撐。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)材料與處理 試驗(yàn)于2014-2015年在福建省福清東張?jiān)囼?yàn)基地進(jìn)行，供試材料為自主選育草莓品種“福莓1號(hào)”。選取生長(zhǎng)健壯的三葉一心苗，移栽到直徑160 mm，高140 mm的塑料盆中，生長(zhǎng)期間保證水肥充足，常規(guī)管理。當(dāng)植株張至6～7片葉，選取大小和生長(zhǎng)狀態(tài)一致的草莓盆栽苗，將盆栽苗從室外移至室內(nèi)預(yù)培養(yǎng)一周，每天光照10 h，光源為鏑燈，接著取3盆長(zhǎng)勢(shì)一致的草莓苗進(jìn)行模擬強(qiáng)光脅迫（光強(qiáng)2 000 μmol/（m2·s），溫度（25±1）℃ 3 h，以未經(jīng)處理的盆栽為對(duì)照，試驗(yàn)重復(fù)3次，取大小相同的功能葉數(shù)片，放入液氮中速凍待測(cè)。

1.1.2 試劑 玉米黃質(zhì)、紫黃質(zhì)、環(huán)氧玉米黃質(zhì)為標(biāo)準(zhǔn)樣品（ChromaDex，USA），純度均為95%以上；乙腈和甲醇為色譜純（Fisher，USA）；甲醇、乙醇、丙酮、石油醚、乙酸乙酯、無(wú)水硫酸鈉均為分析純，購(gòu)自上海國(guó)藥集團(tuán)。

1.1.3 儀器 超高效液相色譜儀ACQUITY UPLC H-Class（Waters，USA），光電二極管矩陣檢測(cè)器eλPDA（Waters，USA），ACQUITY UPLC BEH C18色譜柱（2.1 mm×100 mm，1.7 μm）（Waters，USA），旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器RV10（IKA，Germany），紫外分光光度計(jì)Ultrospec1100 pro（Amersham，USA），超聲波粉碎儀VCX130PB（Sonics，USA）等。

1.2 方法

1.2.1 草莓葉葉黃素循環(huán)組分的提取 用液氮將草莓葉片研磨至粉末，準(zhǔn)確稱取0.1 g，加入5 mL丙酮提取劑，于4 ℃避光浸提5 min，低溫超聲提取2 min，12 000 r/min，4 ℃離心10 min，取上清液，重復(fù)操作1次，合并上清液，定容至10 mL，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀于40 ℃將其蒸干，用丙酮定容至5 mL，4 ℃避光放置。

提取劑的優(yōu)化：選擇7種不同極性的有機(jī)溶劑或組合，依次為：甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、丙酮石油醚（4 ∶ 1）、丙酮石油醚（1 ∶ 1）、石油醚。分析不同提取劑對(duì)草莓葉葉黃素循環(huán)各組分含量總和（即葉黃素循環(huán)庫(kù)）的提取效果，確定最適提取劑。

提取方法的優(yōu)化：采用非皂化和皂化2種方法對(duì)草莓葉葉黃素循環(huán)組分進(jìn)行提取，其中皂化提取參照草莓類胡蘿卜素的皂化方法[16]，通過(guò)分析二者對(duì)草莓葉葉黃素循環(huán)庫(kù)的提取效果，確定適用的提取方法。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制 將玉米黃質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)樣品用丙酮配制成濃度為20 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，紫黃質(zhì)和環(huán)氧玉米黃質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)樣品用乙醇分別配制成濃度為0.8和0.4 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，放置于-80 ℃?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3 UPLC色譜條件 色譜柱：ACQUITY UPLC BEH C18色譜柱（2.1 mm×100 mm，1.7 μm）；流動(dòng)相：乙腈 ∶ 甲醇=9 ∶ 1（V/V）；流速：0.5 mL/min；進(jìn)樣體積：10 μL；色譜柱溫度：30 ℃；樣品溫度：30℃；波長(zhǎng)掃描范圍：100～600 nm；檢測(cè)波長(zhǎng)：445 nm。

1.2.4 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的制備 將1.2.2配制3種標(biāo)準(zhǔn)溶液逐個(gè)稀釋成不同濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，按1.2.3的色譜條件進(jìn)行測(cè)定。以標(biāo)準(zhǔn)樣品濃度為橫坐標(biāo)（x），峰面積為縱坐標(biāo)（y），繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線并計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程以及相關(guān)系數(shù)，

1.2.5 精密度、重復(fù)性試驗(yàn) 將3種標(biāo)準(zhǔn)樣品的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液按1.2.3的色譜條件進(jìn)行5次連續(xù)進(jìn)樣，以各組分峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（Relative standard deviation，RSD），來(lái)檢測(cè)該方法的精密度。平行制備5份樣品，按照1.2.1的提取方法及1.2.3的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算各組分峰面積的RSD來(lái)考察方法的重復(fù)性。

1.2.6 加標(biāo)回收試驗(yàn) 稱取4份等量的草莓葉片粉末，其中3份如表3所示分別進(jìn)行3個(gè)水平的加標(biāo)，余下1份作空白對(duì)照。按1.2.1的方法提取樣品，按1.2.3的色譜條件分析樣品中葉黃素循環(huán)組分含量，計(jì)算回收率及回收率的RDS，試驗(yàn)平行測(cè)定3次。

1.2.7 草莓葉葉黃素循環(huán)組分含量的測(cè)定 利用1.2.3的色譜條件分別對(duì)強(qiáng)光脅迫處理及未處理的草莓葉片中玉米黃質(zhì)，紫黃質(zhì)和環(huán)氧玉米黃質(zhì)含量進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定樣品前用流動(dòng)相進(jìn)行稀釋，并經(jīng)0.22 μm濾膜過(guò)濾，試驗(yàn)平行測(cè)定5次。

1.3 數(shù)據(jù)分析

采用Excel 2010和SPSS 17.0軟件對(duì)測(cè)定的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 草莓葉片葉黃素循環(huán)組分提取條件的優(yōu)化

2.1.1 不同提取劑提取效果的比較 由圖1可以看出，7種提取劑的提取效果存在顯著差異，極性高的提取劑如甲醇、乙醇和丙酮等提取效果較好；反之，極性低的石油醚提取效果最差。其中，通過(guò)甲醇或丙酮所提取的葉黃素循環(huán)庫(kù)含量最高，與石油醚的提取效果存在顯著差異（p<0.05）。可見(jiàn)，需選擇極性高的提取劑來(lái)提取草莓葉葉黃素循環(huán)各組分。

2.1.2 不同提取方法提取效果的比較 由圖2可以看出，采用非皂化和皂化2種方法所提取的葉黃素循環(huán)庫(kù)含量差異較大，皂化處理明顯損耗草莓葉片葉黃素循環(huán)庫(kù)的含量。因此，確定不經(jīng)皂化而直接提取草莓葉片葉黃素循環(huán)各組分。

2.2 UPLC分析條件的優(yōu)化選擇

2.2.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 對(duì)玉米黃質(zhì)、環(huán)氧玉米黃質(zhì)和紫黃質(zhì)3種標(biāo)準(zhǔn)樣品的光譜掃描發(fā)現(xiàn)，3種標(biāo)準(zhǔn)樣品的吸收峰均集中在445 nm左右，玉米黃質(zhì)的最大吸收波長(zhǎng)為450 nm，紫黃質(zhì)為440 nm，環(huán)氧玉米黃質(zhì)為449 nm，并且考慮到前人在分析植物葉黃素循環(huán)組分時(shí)也有采用445 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)[11-12]。因此，選擇445 nm作為草莓葉葉黃素循環(huán)組分測(cè)定的檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.2.2 色譜條件的確定 由于葉黃素循環(huán)的3種組分均屬于類胡蘿卜素。因此，本實(shí)驗(yàn)參照草莓果實(shí)類胡蘿卜素UPLC方法的色譜條件[16]對(duì)三者進(jìn)行分析，結(jié)果3種組分的分離效果較好，說(shuō)明該色譜條件適用于葉黃素循環(huán)組分的分析，但由于本實(shí)驗(yàn)采用是柱長(zhǎng)為100 mm的色譜柱，較于原來(lái)柱長(zhǎng)50 mm的色譜柱分析時(shí)間明顯增加，因此通過(guò)改進(jìn)原來(lái)的色譜條件參數(shù)，包括提高進(jìn)樣體積、色譜柱溫度以及樣品溫度，從而縮短分析時(shí)間。最終確定的色譜條件為乙腈 ∶ 甲醇=9 ∶ 1（V/V）為流動(dòng)相，流速0.5 mL/min，進(jìn)樣體積10 μL，柱溫30 ℃，樣品溫度30 ℃，在此色譜條件下3種標(biāo)準(zhǔn)樣品可以完全分離，峰形對(duì)稱性好，并且分析時(shí)間較短（圖3）。

2.3 UPLC分析方法的可靠性分析

2.3.1 線性關(guān)系及檢出限、定量限測(cè)定 由表1可知，玉米黃質(zhì)、紫黃質(zhì)和環(huán)氧玉米黃質(zhì)的線性相關(guān)系數(shù)依次為0.995 0、0.999 5、0.999 9，表明3種標(biāo)準(zhǔn)樣品的進(jìn)樣濃度與峰面積具有良好的線性關(guān)系。以信噪比（S/N）為3所對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)樣品濃度為檢出限，以信噪比（S/N）為10所對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)樣品濃度為定量限，3種標(biāo)準(zhǔn)樣品的檢出限為0.003～0.01 μg/mL，定量限為0.005～0.02 μg/mL，說(shuō)明該方法具有較高的靈敏性。

2.3.2 精密度、重復(fù)性試驗(yàn) 由表2可知，玉米黃質(zhì)、紫黃質(zhì)和環(huán)氧玉米黃質(zhì)3種組分在精密度試驗(yàn)中對(duì)應(yīng)的RSD依次為0.3%、0.7%和1.2%，重復(fù)性測(cè)定中玉米黃質(zhì)、紫黃質(zhì)和環(huán)氧玉米黃質(zhì)3種組分對(duì)應(yīng)的RSD依次為0.5%、0.9%、1.3%，均小于2%，表明該方法具有良好的精密度和重復(fù)性。

2.3.3 加標(biāo)回收試驗(yàn) 由表3可得，玉米黃質(zhì)、紫黃質(zhì)和環(huán)氧玉米黃質(zhì)3種標(biāo)準(zhǔn)樣品的回收率為95.6%-104.9%，均在95%以上，并且回收率的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.9%～1.7%，均小于2%，表明此方法符合分析要求。

2.4 草莓葉片葉黃素循環(huán)組分含量的測(cè)定

由圖4看出，在445 nm下可檢測(cè)到3種物質(zhì)，它們的保留時(shí)間與3種標(biāo)準(zhǔn)樣品的保留時(shí)間依次相差0.006、0.009、0.011 min。因此，確定3個(gè)物質(zhì)分別為紫黃質(zhì)、環(huán)氧玉米黃質(zhì)和玉米黃質(zhì)。由表4可得，未處理的草莓葉片中紫黃質(zhì)（V）、環(huán)氧玉米黃質(zhì)（A）和玉米黃質(zhì)（Z）的含量依次為80.2、24.1、475.1 μg/g，Z的含量分別約為V和A的5.9倍和19.7倍，可見(jiàn)Z是草莓葉黃素循環(huán)中的主要組分。強(qiáng)光脅迫后，葉片中的Z含量明顯升高，V含量下降，A含量基本不變，Z從475.1變?yōu)?51.3 μg/g，升高1.16倍，而V則從80.2降至53.9 μg/g。此外，葉黃素循環(huán)庫(kù)（A+V+Z）和脫環(huán)氧化狀態(tài)水平（A+Z）/（A+Z+V）也在強(qiáng)光處理后明顯升高，結(jié)果符合葉黃素循環(huán)調(diào)控規(guī)律，說(shuō)明該方法可用于草莓葉葉黃素循環(huán)組分的分析。

3 討論與結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)選擇極性不同的7種提取劑，即甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、丙酮 ∶ 石油醚（4 ∶ 1）、丙酮 ∶ 石油醚（1 ∶ 1）和石油醚，通過(guò)比較各個(gè)提取劑對(duì)草莓葉葉黃素循環(huán)組分的提取效果來(lái)獲得適合的提取劑。結(jié)果表明，7種提取劑的提取效果差異顯著，極性高的單一提取劑如甲醇、乙醇、丙酮的提取效果好，反之，極性低的石油醚效果差，推測(cè)可能與玉米黃質(zhì)、環(huán)氧玉米黃質(zhì)和紫黃質(zhì)中含有強(qiáng)極性的羥基、羰基、甲氧基或環(huán)氧化結(jié)構(gòu)有關(guān)[17]。在7種提取劑中，利用甲醇或丙酮所提取的葉黃素循環(huán)組分含量最高，可見(jiàn)，甲醇和丙酮均是提取草莓葉片中葉黃素循環(huán)組分較好的提取劑，但考慮到甲醇的毒性較大，因此建議使用丙酮進(jìn)行提取。目前，利用皂化和非皂化的方法提取植物葉片中的葉黃素循環(huán)組分均有報(bào)道[12，18]。皂化處理可以解決玉米黃質(zhì)在有機(jī)浸提過(guò)程中難以分離等問(wèn)題，然而皂化的過(guò)程常常會(huì)導(dǎo)致樣品中色素單量以及總量不同程度的損失，而在水果類物質(zhì)中類胡蘿卜素皂化提取的損失率約為10%～15%[19-21]。因此，需要比較2種方法對(duì)草莓葉片葉黃素循環(huán)組分的提取效果，以獲得最適的提取方法。結(jié)果表明，皂化處理會(huì)損耗草莓葉片中的葉黃素循環(huán)組分，直接提取效果更好。

針對(duì)葉黃素循環(huán)組分建立有效的測(cè)定方法是開(kāi)展草莓葉葉黃素循環(huán)調(diào)控作用研究的必備基礎(chǔ)。目前，絕大多數(shù)的測(cè)定手段還是以普通高效液相色譜（HPLC）為主，然而HPLC在實(shí)際應(yīng)用中存在耗時(shí)長(zhǎng)，分離度不佳等缺陷[11-13]。因此，尋求更高效的檢測(cè)方法是未來(lái)的研究重點(diǎn)。超高效液相色譜法（UPLC）是近年來(lái)發(fā)展較快，基于HPLC的新型液相色譜檢測(cè)技術(shù)。它的最大優(yōu)勢(shì)在于采用了2.0 μm以下顆粒度的色譜填料柱，以及耐受超高壓的色譜泵和色譜系統(tǒng)，現(xiàn)已成為蛋白組學(xué)、藥物分析、環(huán)境監(jiān)測(cè)等眾多高端領(lǐng)域的有效檢測(cè)方法[22-23]。眾多研究表明，將HPLC定量方法轉(zhuǎn)換并優(yōu)化為UPLC方法，在保證含量測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確的前提下，既提高了色譜峰分離度，加快了分析速度，達(dá)到了樣品分析的高通量，又減少了溶劑損耗及廢液處置費(fèi)用，降低了分析成本[24-25]。本試驗(yàn)利用UPLC分析了草莓葉葉黃素循環(huán)組分，相較于普通HPLC技術(shù)凸顯了2點(diǎn)優(yōu)勢(shì)：（1）分析時(shí)間明顯縮短。利用UPLC 僅僅在1.2 min內(nèi)就能檢測(cè)出葉黃素循環(huán)的3種組分，對(duì)比韋朝領(lǐng)[12]、季本華等[26]利用HPLC的分析時(shí)間，縮短近85%以上。（2）分析方法更簡(jiǎn)單、安全，成本降低。試驗(yàn)的流動(dòng)相只需要乙腈和甲醇，避免使用了Glimore等[27]和趙世杰等[28]方法中對(duì)色譜柱有害的Tris-HCl緩沖液；分析過(guò)程以乙腈 ∶ 甲醇=9 ∶ 1（V/V）等度洗脫即可，無(wú)需通過(guò)梯度洗脫，較于徐坤[29]，崔海巖等[13]報(bào)道中的提取過(guò)程更簡(jiǎn)單，此外還明顯減少了溶劑損耗，節(jié)約了分析成本。

本研究通過(guò)優(yōu)化葉黃素循環(huán)組分的提取條件，確定色譜條件以及線性關(guān)系、重復(fù)性、精密度、回收率試驗(yàn)等的考察獲得了最適的草莓葉葉黃素循環(huán)UPLC分析方法，即以丙酮為提取劑，不經(jīng)過(guò)皂化直接提取，同時(shí)采用ACQUITY UPLC BEH C18色譜柱，以乙腈 ∶ 甲醇=9 ∶ 1為流動(dòng)相，流速0.5 mL/min，波長(zhǎng)445 nm，色譜柱溫度30 ℃，樣品溫度30 ℃。此外，通過(guò)研究強(qiáng)光下葉黃素循環(huán)各組分含量的變化規(guī)律對(duì)該方法進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果符合葉黃素循環(huán)調(diào)控規(guī)律。因此，確定試驗(yàn)所建立的UPLC測(cè)定方法適合草莓葉葉黃素循環(huán)組分分析。

參考文獻(xiàn)

[1] 徐 凱. 草莓的光抑制特性及光質(zhì)對(duì)其生長(zhǎng)結(jié)果的影響[D]. 杭州： 浙江大學(xué)， 2005.

[2] 潘 剛. 不同光質(zhì)對(duì)草莓光抑制的影響[D]. 合肥： 安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)， 2006.

[3] 張廣華， 葛會(huì)波， 李青云， 等. SOD對(duì)草莓葉片光抑制的防御作用[J]. 果樹(shù)學(xué)報(bào)， 2004， 21（4）： 328-330.

[4] 徐 凱， 郭延平， 張上隆， 等. 草莓葉片光合作用對(duì)強(qiáng)光的響應(yīng)及其機(jī)理研究[J]. 應(yīng)用生態(tài)學(xué)報(bào)， 2005， 16（1）： 73-78.

[5] 張廣華. 弱光、 低溫脅迫對(duì)草莓光合作用的影響[D]. 保定： 河北農(nóng)業(yè)大學(xué)， 2004.

[6] 鄭 毅. 溫度脅迫對(duì)草莓葉片光合作用的影響[D]. 合肥： 安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)， 2005.

[7] Demming-Adams B， Adams WW III. Xanthophyll cycle and light stress in nature： uniform response to excess direct sunlight among higher plant species[J]. Planta， 1996， 198： 460-470.

[8] Vaz J， Sharma P K.Relationship between xanthophyll cycle and non-photochemical quenching in rice（Oryza sativa L.）plants in response to light stress[J]. Indian J Exp Biol， 2011， 49（1）： 60-70.

[9] Ma F， Cheng L. The sun-exposed peel of apple fruit has higher xanthophyll cycle-dependent thermal dissipation and antioxidams of the ascorbate-gluthathione pathway than the shaded peel[J]. Plant Science， 2003， 165（4）： 819-827.

[10] 劉麗娟， 吳 穎. UPLC法檢測(cè)食品中的番茄紅素[J]. 食品工業(yè)科技， 2009， 30（11）： 305-307.

[11] Cheng L. Xanthophyll cycle pool size and composition in relation to the nitrogen content of apple Leaves[J]. Journal of Experimental Botany， 2003， 24： 385-393.

[12] 韋朝領(lǐng)， 江昌俊， 陶漢之， 等. 茶樹(shù)鮮葉中葉黃素循環(huán)組分的高效液相色譜法測(cè)定研究及其光保護(hù)功能鑒定[J]. 茶葉科學(xué)， 2004， 24（1）： 60-64.

[13] 崔海巖， 靳立斌， 李 波， 等. 大田遮陰對(duì)夏玉米光合特性和葉黃素循環(huán)的影響[J]. 作物學(xué)報(bào)， 2013， 39（3）： 478-485.

[14] 丁 雪， 石力夫， 楊 璐. 新型色譜分析技術(shù)在中藥指紋圖譜研究中的應(yīng)用[J]. 國(guó)際藥學(xué)研究雜志， 2008， 35（6）： 447-450.

[15] 鄭 潔， 趙其陽(yáng)， 張耀海， 等. 超高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定柑橘中主要酚酸和類黃酮物質(zhì)[J]. 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2014， 47（23）： 4 706-4 717.

[16] 陳敏氡， 朱海生， 溫慶放， 等. UPLC測(cè)定草莓果實(shí)中類胡蘿卜素含量[J]. 果樹(shù)學(xué)報(bào)， 2013， 30（4）： 706-711.

[17] 顏少賓， 張妤艷， 馬瑞娟， 等. 桃果實(shí)類胡蘿卜素測(cè)定方法的研究[J]. 果實(shí)學(xué)報(bào)， 2012， 29（6）： 1 127-1 133.

[18] 費(fèi)美娟， 趙世杰， 王曉云， 等. 葉黃素循環(huán)組分的分離鑒定及紫黃質(zhì)的大量制備[J]. 西北植物學(xué)報(bào)， 2004， 24（2）： 210-214.

[19] 王 星， 牛黎莉， 王曉璇， 等. 皂化工藝對(duì)枸杞皮渣中類胡蘿卜素提取效果的影響[J]. 食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào)， 2014（7）： 709-714.

[20] Minguez-Mosquera M I， Galvez A P. Study of lability and kinetics of the main carotenoid pigments of red pepper in the deesterification reaction[J]. J Agric Food Chem， 1998， 46： 566-569.

[21] Ittah Y， Kanner J. Hydrolysis study of carotenoid pigments of paprika （Capsicum annuum L.） variety Lehava）by HPLC photodiode array detection[J]. J Agric Food Chem， 1993， 41： 899-901.

[22] 湯建國(guó)， 袁大林. 超高效液相色譜法測(cè)定卷煙煙絲中7種水溶性糖含量[J]. 化學(xué)分析計(jì)量， 2012， 21（1）： 17-19.

[23] 曾祥林， 曾 智. 超高效/高分離度快速/超快速液相色譜技術(shù)在分析領(lǐng)域中的應(yīng)用[J]. 醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)， 2010， 29（7）： 909-912.

[24] 趙振霞， 劉永利， 王 敏， 等. HPLC、 UPLC法同時(shí)測(cè)定心可舒膠囊中4種成分的含量[J]. 中國(guó)醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)， 2014， 45（5）： 563-566.

[25] 鄭 潔， 趙其陽(yáng)， 張耀海， 等. 超高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定柑橘中主要酚酸和類黃酮物質(zhì)[J]. 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2014， 47（23）： 4 706-4 717.

[26] 季本華， 朱素琴， 焦德茂. 低溫強(qiáng)光脅迫下秈粳稻的PSⅡ光化學(xué)效率和膜脂過(guò)氧化表現(xiàn)[J]. 植物學(xué)報(bào)， 2002， 44（2）： 139-146.

[27] Glimore A M. Mechanistic aspects of xanthophyll cyce-dependent photoprotection on higher chloroplasts and Leaves[J]. Physiology Plant， 1997， 99： 197-209.

[28] 趙世杰， 孟慶偉， 許長(zhǎng)成， 等. 植物組織中葉黃素循環(huán)組分的高效液相色譜分析法[J]. 植物生理學(xué)通訊， 1995， 31（6）： 438-442.

[29] 徐 坤， 鄒 琦， 鄭國(guó)生. 強(qiáng)光下姜葉片的光呼吸及葉黃素循環(huán)[J]. 園藝學(xué)報(bào)， 2002， 29（1）： 47-51.