可控恒溫?zé)浦谱魍媒悄釤齻Ｐ偷难芯?/h1>

2016-05-30 00:40:14王永強(qiáng)路振莉

實(shí)用醫(yī)藥雜志訂閱 2016年2期 收藏

關(guān)鍵詞：動(dòng)物模型

王永強(qiáng)，袁　曄，路振莉，賈　雍，蔣　華

可控恒溫?zé)浦谱魍媒悄釤齻Ｐ偷难芯?/p>

王永強(qiáng)，袁曄，路振莉，賈雍，蔣華＊

［摘要］目的探討可控恒溫?zé)浦谱鞑煌潭韧媒悄釤齻Ｐ偷淖罴褏?shù)。方法成年新西蘭大白兔36只，隨機(jī)分為A、B、C 3組，每組12只（12眼），應(yīng)用溫度可控的電烙鐵燒灼角膜制作兔角膜熱燒傷模型。燒灼溫度：300℃。A、B、C組設(shè)定不同的燒灼時(shí)間：3 s，7 s，10 s，觀察各組制模后角膜燒傷程度及角膜形態(tài)學(xué)變化，并記錄制模后3 d各組角膜溶解情況和制模后14 d角膜燒傷區(qū)混濁程度，評(píng)估應(yīng)用可控恒溫?zé)撇煌瑫r(shí)間制作的角膜熱燒傷模型在角膜燒傷程度、角膜溶解程度、角膜混濁程度等方面是否存在差異。結(jié)果制模后各組角膜燒傷程度差異明顯（P＜0.01），制模后3 d各組角膜溶解情況差異明顯（P＜0.01），制模后14 d各組角膜混濁程度差異明顯（P＜0.01）。結(jié)論可控恒溫?zé)浦谱魍媒悄釤齻Ｐ托Ч己?，通過(guò)控制燒灼時(shí)間可制作不同燒傷程度的模型，所制作的模型具有良好的一致性。

［關(guān)鍵詞］兔角膜；角膜熱燒傷；可控恒溫；動(dòng)物模型

角膜熱燒傷是常見(jiàn)的眼外傷，多發(fā)生于金屬鑄造工業(yè)、戰(zhàn)傷及日常生活意外傷等。嚴(yán)重的角膜熱燒傷在臨床上缺乏有效的治療措施，常造成嚴(yán)重的后果［1，2］。近年來(lái)，對(duì)角膜熱燒傷發(fā)病機(jī)制及治療方法的研究越來(lái)越受到醫(yī)學(xué)界重視。但目前國(guó)內(nèi)外關(guān)于角膜熱燒傷實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的研究報(bào)道相對(duì)缺乏，限制了對(duì)角膜熱燒傷的研究。筆者采用可控恒溫電烙鐵燒灼兔角膜制作角膜熱燒傷模型，以期確定兔眼不同程度角膜熱燒傷模型制作的條件，為角膜熱燒傷實(shí)驗(yàn)研究中動(dòng)物模型的制作提供理論依據(jù)及指導(dǎo)。

1　材料與方法

1.1材料成年健康新西蘭大白兔36只，雌雄不限，體重2.0～2.5 kg，隨機(jī)分為A、B、C 3組，每組12只（12眼），隨機(jī)選取一眼作為制模眼。制模燒灼溫度300℃，并按分組設(shè)定不同的燒灼時(shí)間：A組3 s，B組7 s，C組10 s。裂隙燈檢查排除制模眼角膜病變。

1.2方法

1.2.1溫控電烙鐵的準(zhǔn)備恒溫溫控電烙鐵購(gòu)自廣州黃花電子工具有限公司，燒灼探頭由實(shí)驗(yàn)室根據(jù)家兔眼球結(jié)構(gòu)特點(diǎn)應(yīng)用導(dǎo)熱合金材料自行制作，探頭與角膜接觸面凹陷，與兔角膜突出度一致，可燒灼區(qū)域直徑7 mm（圖1）。實(shí)驗(yàn)前經(jīng)接觸式溫度計(jì)檢測(cè)，電烙鐵溫度屏顯示溫度與燒灼探頭表面實(shí)際溫度誤差≤3℃。制模前將燒灼溫度設(shè)定為300℃，接通電源預(yù)熱，電烙鐵指示燈顯示達(dá)到設(shè)定溫度以后再進(jìn)行熱燒傷模型制作。

1.2.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物麻醉鹽酸奧布卡因滴眼液點(diǎn)左眼表面麻醉，0.05%鹽酸氯胺酮注射液0.2 ml＋2%鹽酸賽拉嗪注射液0.2 ml兔后肢肌肉注射麻醉。

1.2.3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物角膜燒灼實(shí)驗(yàn)操作在手術(shù)顯微鏡下進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物麻醉成功后，開(kāi)瞼器開(kāi)瞼，將角膜表面殘留液體拭干，將預(yù)熱好的電烙鐵探頭凹面貼緊角膜中央?yún)^(qū)域燒灼并同時(shí)計(jì)時(shí)，達(dá)到設(shè)定燒灼時(shí)間后立即移除電烙鐵，生理鹽水沖洗角膜。妥布霉素滴眼液點(diǎn)眼4次/d防止繼發(fā)感染。

1.3觀察指標(biāo)裂隙燈觀察并判定各組制模眼燒傷程度，每日觀察不同程度角膜燒傷區(qū)形態(tài)學(xué)變化。觀察并記錄各組角膜熱燒傷后3d角膜溶解情況，角膜燒傷后14 d角膜燒傷區(qū)混濁程度。

1.3.1角膜熱燒傷程度的判定標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照我國(guó)1982年眼外傷與職業(yè)性眼病協(xié)作小組制定的角膜熱燒傷分度標(biāo)準(zhǔn)，將角膜熱燒傷模型燒傷程度分為4度。Ⅰ度：上皮損傷，上皮混濁，但前彈力層及角膜基質(zhì)層未受損。Ⅱ度：僅基質(zhì)淺層水腫，未累及深層，深層仍保持透明。Ⅲ度：實(shí)質(zhì)淺層水腫，混濁顯著，角膜呈磨玻璃狀，角膜實(shí)質(zhì)較深層也受損傷，虹膜隱約可見(jiàn)。Ⅳ度：角膜全層受累，呈瓷白色混濁，看不見(jiàn)虹膜組織（圖2）。

圖2　不同程度角膜燒傷

1.3.2角膜溶解情況判定標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)角膜溶解嚴(yán)重程度的不同，將角膜溶解程度分為4個(gè)等級(jí)：0級(jí)：角膜無(wú)溶解。1級(jí)：出現(xiàn)淺層角膜潰瘍。2級(jí)：出現(xiàn)深層角膜潰瘍。3級(jí)：角膜溶解合并角膜穿孔（圖3）。

圖3　不同程度角膜溶解

1.3.3角膜混濁程度及角膜新生血管分級(jí)的判定標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)角膜混濁程度及角膜新生血管生長(zhǎng)程度的不同，將角膜混濁和角膜新生血管程度分為4個(gè)等級(jí)［3］：無(wú)明顯混濁（0級(jí)）：角膜透明或僅留薄霧狀痕跡，無(wú)明顯角膜新生血管生長(zhǎng)，能清楚看到虹膜紋理。輕度混濁（1級(jí)）：混濁淡并且界限欠清的、肉眼不易分辨，少量的角膜新生血管，透過(guò)混濁區(qū)可看到虹膜組織。中度混濁（2級(jí)）：混濁濃密而界限較清楚，大量角膜新生血管，透過(guò)混濁區(qū)僅能模糊所見(jiàn)虹膜組織。重度混濁（3級(jí)）：混濁更致密而呈瓷樣不透明，濃密的角膜新生血管，透過(guò)混濁區(qū)完全看不到虹膜組織（圖4）。

圖4　不同程度角膜混濁

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，各組角膜燒傷程度、制模后3d角膜潰瘍或穿孔情況、制模后14 d角膜混濁程度的差異均采用似然比χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1角膜燒傷程度及形態(tài)學(xué)觀察各組制模后角膜燒傷程度分別為：A組Ⅰ度燒傷1眼（8.33%），Ⅱ度燒傷10眼（83.33%），Ⅲ度燒傷1眼（8.33%）；B組Ⅲ度燒傷10眼（83.33%），Ⅳ度燒傷2眼（16.67%）；C組Ⅲ度燒傷3眼（25.00%），Ⅳ度燒傷9眼（75.00%）。本實(shí)驗(yàn)中不同燒傷程度的角膜形態(tài)學(xué)變化：Ⅰ度燒傷僅角膜上皮損傷脫落，3 d內(nèi)角膜創(chuàng)面愈合，無(wú)明顯混濁；Ⅱ度燒傷24 h內(nèi)出現(xiàn)淺層角膜潰瘍，4 d時(shí)角膜周邊少量角膜新生血管生長(zhǎng)，10 d內(nèi)角膜創(chuàng)面愈合，14 d時(shí)部分角膜新生血管回退，輕度混濁；Ⅲ度燒傷3 d內(nèi)出現(xiàn)深層角膜潰瘍，其中2眼出現(xiàn)角膜穿孔，4 d時(shí)角膜周邊新生血管持續(xù)生長(zhǎng)，14 d時(shí)角膜新生血管生長(zhǎng)明顯，中度混濁；Ⅳ度燒傷3 d內(nèi)出現(xiàn)深層角膜潰瘍，角膜溶解明顯，其中7眼出現(xiàn)角膜穿孔，4 d時(shí)角膜周邊新生血管持續(xù)生長(zhǎng)，14 d時(shí)大量角膜新生血管生長(zhǎng)，重度混濁。

2.2各組角膜燒傷程度、角膜溶解情況及角膜混濁程度的比較制模后各組角膜燒傷程度情況見(jiàn)表1。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，各組角膜的燒傷程度有顯著性差異（χ2＝47.419，P＜0.01）。制模后3 d各組角膜溶解情況見(jiàn)表2，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，各組角膜溶解情況有顯著性差異（χ2＝50.470，P＜0.01）。制模后14 d各組角膜混濁程度見(jiàn)表3，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，各組角膜混濁程度有顯著性差異（χ2＝52.108，P＜0.01）。表明應(yīng)用可控恒溫電烙鐵燒灼不同時(shí)間制作角膜熱燒傷模型，在角膜燒傷程度、角膜溶解及混濁程度等方面均有明顯差異，各組內(nèi)具有良好的一致性。

表1　三組動(dòng)物模型角膜燒傷程度眼

表2　三組動(dòng)物模型角膜溶解情況（眼）

表3　三組動(dòng)物模型角膜混濁程度（眼）

3　討　論

角膜熱燒傷是眼科臨床上常見(jiàn)的眼外傷，多數(shù)角膜熱燒傷早期就會(huì)出現(xiàn)角膜組織的溶解，嚴(yán)重的病例甚至因角膜穿孔眼球內(nèi)容物脫出嚴(yán)重?zé)o法保留眼球，造成患者巨大的痛苦和沉重的醫(yī)療負(fù)擔(dān)。近年來(lái)，對(duì)于角膜熱燒傷的發(fā)病機(jī)理和臨床治療的研究雖然取得了一定進(jìn)展，但對(duì)于病情嚴(yán)重的角膜熱燒傷發(fā)病機(jī)理的研究和臨床治療仍未取得明顯突破，因此角膜熱燒傷造成的致盲率仍然較高。謝立信等［4］曾對(duì)山東省10年間角膜穿孔的病例做過(guò)統(tǒng)計(jì)，其中約4.8%病例是由于角膜熱燒傷引起。目前關(guān)于角膜熱燒傷的基礎(chǔ)研究報(bào)道相對(duì)較少，部分學(xué)者經(jīng)過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)或臨床研究得出了不同的結(jié)論，該研究領(lǐng)域尚需進(jìn)一步深入研究以期獲得突破性進(jìn)展，為角膜熱燒傷的臨床治療提供理論指導(dǎo)，較低角膜熱燒傷的致盲率，因此，制作模擬程度高，重復(fù)性良好的角膜熱燒傷實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，對(duì)于角膜熱燒傷發(fā)病機(jī)理、病情進(jìn)展、疾病治療等方面的研究顯得十分重要。

目前關(guān)于角膜熱燒傷的實(shí)驗(yàn)研究中，制作模型的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物主要是大鼠和兔，因?yàn)榇笫蠛屯醚劢悄づc人類(lèi)眼角膜的解剖結(jié)構(gòu)相似度較高，能夠較好地反映角膜熱燒傷的病理變化［5］。但大鼠和兔屬于嚙齒類(lèi)動(dòng)物，角膜內(nèi)皮再生能力很強(qiáng)，角膜具有較強(qiáng)的自我修復(fù)能力，這一方面與人類(lèi)差別較大［6，7］，這也增加了在制作角膜熱燒傷實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型時(shí)角膜損傷程度達(dá)到較高的一致性和可重復(fù)性的操作困難。對(duì)大鼠和兔眼進(jìn)行角膜熱燒傷模型制作時(shí)有較多的影響因素，例如燒灼溫度、時(shí)間，與角膜的接觸面積，是否合并眼瞼等眼表器官的損傷，受傷時(shí)淚液的分泌情況等，而在眾多的因素里，對(duì)燒灼溫度的控制使其保持恒定相對(duì)更加困難。目前關(guān)于角膜熱燒傷的實(shí)驗(yàn)研究中動(dòng)物模型的制作多采用鐵片或者不銹鋼燒烙釘加熱燒灼角膜，以及應(yīng)用沸油滴眼制作大鼠或者兔角膜熱燒傷模型［8-10］。但應(yīng)用這些方法制作動(dòng)物模型時(shí)，燒灼溫度的穩(wěn)定性受多種因素影響，例如操作時(shí)室內(nèi)溫度、眼球表面淚液含量、操作熟練程度等，進(jìn)而會(huì)影響角膜熱燒傷模型的制作效果和燒傷程度的一致性，造成模型制作的燒傷程度差別較大，可重復(fù)性較差。趙敏等［11］曾應(yīng)用帶半導(dǎo)體測(cè)溫儀的自制燒灼器制作大鼠角膜熱燒傷模型，可以將溫度變化控制在3℃之內(nèi)，但關(guān)于恒溫條件下制作兔角膜熱燒傷模型，目前國(guó)內(nèi)尚無(wú)報(bào)道。筆者選兔作為動(dòng)物模型，主要是因?yàn)榫哂幸韵聝?yōu)點(diǎn)：（1）兔具有較大的眼球，利于實(shí)驗(yàn)操作和觀察；（2）可以對(duì)同一兔左右眼進(jìn)行觀察和操作，避免個(gè)體差異［12］。但兔角膜比大鼠角膜厚，制作模型時(shí)對(duì)燒灼溫度的控制要求更高，制模過(guò)程中燒灼溫度的不恒定對(duì)模型燒傷程度的一致性影響更大。基于以上原因，筆者創(chuàng)新性地采用了可控恒溫條件下制作兔角膜熱燒傷模型，以期取得良好的制作效果。

該實(shí)驗(yàn)中燒灼角膜應(yīng)用的電烙鐵帶有電子溫度感應(yīng)裝置，能夠自動(dòng)感應(yīng)并控制溫度，靈敏度高，能夠確保模型制作時(shí)燒灼溫度的恒定，并且根據(jù)兔眼角膜的突出弧度，應(yīng)用導(dǎo)熱性能良好的金屬材料制作了凹面與兔眼角膜弧度一致的燒灼探頭。同時(shí)，在操作時(shí)盡量避免其他不利因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，如保證實(shí)驗(yàn)室溫度24℃左右，燒灼前應(yīng)用開(kāi)瞼器撐開(kāi)眼瞼使角膜充分暴露，燒灼前拭干淚液及表麻藥液保證角膜表面相對(duì)干燥等。

在進(jìn)行兔角膜熱燒傷模型制作之前，通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)對(duì)燒灼溫度進(jìn)行了選擇，燒灼溫度≤200℃時(shí)需要較長(zhǎng)的燒灼時(shí)間，溫度≥400℃時(shí)角膜組織容易碳化結(jié)焦，確定燒灼溫度在300℃時(shí)制作效果最佳。該實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，通過(guò)控制不同的燒灼時(shí)間，可以獲得不同燒灼程度的兔角膜熱燒傷模型。當(dāng)燒灼溫度在300℃，燒灼時(shí)間分別在3 s、7 s、10 s時(shí)，絕大多數(shù)制模眼角膜燒灼程度分別為Ⅱ度、Ⅲ度、Ⅳ度。通過(guò)不同燒灼時(shí)間制模后角膜溶解情況、角膜混濁程度及新生血管生長(zhǎng)等情況觀察，確定有明顯差異。因此，應(yīng)用該模型制作方法，研究者可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇不同的燒灼時(shí)間制作相應(yīng)燒傷程度的動(dòng)物模型，在角膜熱燒傷實(shí)驗(yàn)研究領(lǐng)域具有重要的應(yīng)用和參考價(jià)值。

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［2015-08-16收稿，2015-09-14修回］［本文編輯：張鴻瑫］

Controllable homeothermy in the establishment of corneal thermal burn model in rabbit

WANG

Yong-qiang，YUAN Ye，LU Zhen-li，et al.
Department of Ophthalmology，Jinan Military General Hospital，Jinan，Shandong 250031，China

［Abstract］Objective To investigate the appropriate parameters in controllable homeothermy to induce different degrees of corneal thermal burn in rabbit.Methods Thirty-six healthy adult New Zealand white rabbits were randomly divided into three groups：A，B，C 12 rabbits（12 eyes）in each.Corneal thermal burn was induced by electric cautery with controllable homeothermy.The burning temperature of 300℃with durations of 4 s，7 s and 10 s were set for group A，B，C respectively.The degree of corneal burn and corneal morphology were observed.Corneal dissolved at 3 and opacity at 14 days after cautery were recorded respectively.The difference of corneal burn，dissolved and opacity induced by different burning duration with controllable homeothermy were evaluated.Results There existed obvious differences in the burned degrees between different groups quickly after operation，in corneal dissolved，at 3 days and corneal opacity at 14 of postoperative days，at all（P＜0.01）.Conclusion Satisfactory results in producing corneal burn model with controllable homeothermy could be achieved which different degrees of burn could be induced by different burning duration，and established models have excellent consistency.

［Key words］Rabbit cornea；Corneal thermal burn；Controllable homeothermy；Animal models

［中圖分類(lèi)號(hào)］R779.13

［文獻(xiàn)標(biāo)志碼］A

［作者單位］250031山東濟(jì)南，濟(jì)南軍區(qū)總醫(yī)院眼科（王永強(qiáng)，袁曄，路振莉，賈雍，蔣華）

［通訊作者］蔣華，Email：jianghua108＠126.com

DOI：10.14172/j.issn1671-4008.2016.02.026

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