RCAS1在食管癌中的表達(dá)及其臨床意義

劉　婷，李　晶，高　峰

(河北省優(yōu)撫醫(yī)院，河北 石家莊 050051)

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RCAS1在食管癌中的表達(dá)及其臨床意義

劉婷，李晶，高峰

(河北省優(yōu)撫醫(yī)院，河北 石家莊 050051)

[摘要]目的評(píng)估受體結(jié)合型腫瘤抗原(RCAS1)與人食管鱗癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系及臨床意義。方法選取61例食管鱗癌術(shù)后組織、34例癌旁非典型增生組織及21例正常黏膜上皮組織，采取免疫組化SP法測(cè)定各組織中RCAS1蛋白表達(dá)情況，分析RCAS1蛋白表達(dá)情況與食管鱗癌患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系。結(jié)果食管鱗癌患者RCAS1陽性表達(dá)率與年齡、性別無關(guān)(P均>0.05)，與腫瘤浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、組織分化程度相關(guān)(P均<0.05)。結(jié)論RCAS1在食管鱗癌組織中的異常表達(dá)與腫瘤的浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和組織分化程度有明顯的相關(guān)性，檢測(cè)RCAS1蛋白表達(dá)情況有助于食管癌的診斷、臨床治療及預(yù)后判斷。

[關(guān)鍵詞]食管癌；RCAS1蛋白；免疫組化

食管癌是一種發(fā)生在食管上皮組織中的惡性腫瘤,約占全部惡性腫瘤的2%[1]。自20世紀(jì)70年代至今,食管癌的發(fā)病率和病死率雖然有一定程度的下降,但是食管癌高發(fā)地區(qū)的發(fā)病率仍達(dá)478.87/10萬,標(biāo)化的病死率達(dá)19.90/10萬[2]。我國(guó)在世界上屬于食管癌的高發(fā)地域之一,其中又以河南省為最高。食管癌以食管鱗狀細(xì)胞癌(鱗癌)為最多,約占90%[3]。食管癌的發(fā)生發(fā)展過程比較復(fù)雜,其發(fā)生發(fā)展的機(jī)制目前尚未完全研究清楚,只是猜測(cè)可能與多個(gè)基因及分子水平的變化密切相關(guān)。受體結(jié)合型腫瘤抗原(receptor-binding cancer antigen expressed On SiSo cells，RCAS1)是一種人類腫瘤相關(guān)抗原，可以幫助腫瘤逃避免疫監(jiān)視，從而使腫瘤細(xì)胞得以生存。本研究探討了RCAS1在食管癌發(fā)生進(jìn)展中的作用，旨在為該病的診治及預(yù)后判斷提供一定依據(jù)。

1臨床資料

1.1一般資料選取我院2010年3月—2014年3月61例經(jīng)手術(shù)切除的食管鱗癌病理組織存檔蠟塊，其中男34例,女27例；年齡35～79(61.27±9.10)歲；手術(shù)前均未接受放化療和免疫制劑治療。每例標(biāo)本均于癌灶、癌旁組織和正常組織分別取材。癌旁非典型增生組織要求距癌灶邊緣3 cm內(nèi)；正常食管黏膜上皮組織自手術(shù)殘端組織獲取,要求距癌組織3 cm以上。共獲得癌旁組織標(biāo)本34例，正常食管黏膜組織標(biāo)本21例。61例食管鱗癌標(biāo)本中，浸潤(rùn)深度未侵及外膜35例，侵及外膜26例;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移29例，無轉(zhuǎn)移32例;分化程度為低分化26例，中分化19例，高分化16例。

1.2方法采取免疫組化SP法測(cè)定各標(biāo)本中RCAS1蛋白表達(dá)量。標(biāo)本均由10%中性福爾馬林固定,石蠟包埋,4 μm厚度連續(xù)切片。將石蠟切片置于由APES 處理過的載玻片上，55 ℃烤片，時(shí)間1 h。二甲苯脫蠟，梯度乙醇入水。PBS沖洗，3% H2O2溶液室溫下孵育20 min，以除去內(nèi)源酶。PBS沖洗，浸入pH值6.0的枸櫞酸緩沖液，微波抗原修復(fù)8 min。PBS沖洗，1∶50 PBS稀釋的正常山羊血清封閉，室溫下20 min。倒去血清，不洗，滴加特異性一抗，4 ℃下孵育過夜。PBS沖洗，滴加特異性生物素化二抗，覆蓋組織37 ℃下孵育30 min。PBS沖洗后，滴加過氧化物酶復(fù)合物，覆蓋組織37 ℃下孵育30 min。PBS沖洗，滴加DAB顯色試劑，覆蓋組織，室溫避光顯色5 min。PBS沖洗，雙蒸水沖洗終止顯色。蘇木素復(fù)染，PBS浸泡，直至切片變藍(lán)。梯度乙醇脫水，二甲苯透明，樹脂封片，鏡檢。染色時(shí)均設(shè)立陰性對(duì)照(以 PBS 液代替一抗)及陽性對(duì)照。

1.3陽性判定標(biāo)準(zhǔn)參考文獻(xiàn)[1]方法，依據(jù)RCAS1免疫組織化SP法的染色程度來判定是否陽性表達(dá)，RCAS1免疫組化染色陽性細(xì)胞為細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞膜著色，呈棕黃色顆粒。按照染色強(qiáng)弱情況和免疫陽性細(xì)胞占腫瘤細(xì)胞總數(shù)的構(gòu)成比行綜合評(píng)分，陽性細(xì)胞所占比例<10%計(jì)為1分,10%～50%計(jì)為2分,>50%計(jì)為3分;染色陰性計(jì)為0分,淡黃色計(jì)為1分,中度黃色計(jì)為2分,棕褐色計(jì)為3分。上述二者乘積計(jì)為總分，總分<3分判定為陰性,總分>3分判定為陽性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采取SPSS 11.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。RCAS1陽性表達(dá)率的比較采用2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1食管鱗癌組織、癌旁非典型增生組織及正常食管黏膜上皮組織中RCAS1表達(dá)情況比較在正常食管黏膜組織、癌旁非典型增生組織及食管鱗癌組織中,RCAS1的陽性表達(dá)率呈依次升高趨勢(shì),分別為28.6%(6/21)，64.7%(22/34)和85.2%(52/61)，3組RCAS1蛋白陽性表達(dá)率比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)。RCAS1蛋白染色后陽性信號(hào)位于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜,呈現(xiàn)棕黃色顆粒；正常食管黏膜組織中僅有少量表達(dá)，癌旁非典型增生組織中有明顯表達(dá)，食管鱗癌組織中強(qiáng)陽性表達(dá)，見圖1～3。

圖1　正常食管黏膜中RCAS1蛋白表達(dá)情況(SP，×400)

2.2RCAS1表達(dá)與食管鱗癌臨床病理因素的關(guān)系RCAS1陽性表達(dá)率與患者性別、年齡無明顯關(guān)系，與腫瘤侵潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織分化程度明顯相關(guān)(P均<0.05)。見表1。

3討論

在臨床實(shí)踐中,雖然我國(guó)已經(jīng)對(duì)食管癌的綜合干預(yù)治療進(jìn)行了和正在進(jìn)行諸多有益與不懈的探索和努力，并且取得了相當(dāng)不錯(cuò)的成績(jī),但是，綜合評(píng)價(jià)目前的臨床療效仍然不夠理想,術(shù)后平均生存率仍為30%左右[4]。究其原因，主要是臨床治療過程中尚欠缺監(jiān)測(cè)與評(píng)估食管癌生物學(xué)行為方面的可靠有效指標(biāo),并且缺少更有效地預(yù)防和治療食管癌的方法與措施。

圖2　食管黏膜不典型增生組織中RCAS1蛋白表達(dá)情況(SP，×400)

圖3　食管鱗癌組織中RCAS1蛋白表達(dá)情況(SP，×400)

臨床病理參數(shù)n陽性2P年齡≤60歲>60歲253621(84.0)30(83.3)0.0170.849性別男女342729(85.3)22(85.2)0.0130.914浸潤(rùn)深度未及外膜侵入外膜352627(77.1)24(92.3)3.1180.029淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有無382336(94.7)15(65.2)3.6290.005組織分化程度低分化中分化高分化27181625(92.6)15(83.3)10(62.5)5.1890.036

腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中自始至終貫穿著癌基因、抑癌基因的改變。1999年Nakashima等[5]發(fā)現(xiàn)一個(gè)新的腫瘤相關(guān)抗原-SiSo細(xì)胞表達(dá)的RCAS1，它可以被單克隆抗體22-1-1識(shí)別，并發(fā)現(xiàn)該抗原正是由eba99編碼。RCAS1總共有213個(gè)氨基酸，其N端第8～27位的氨基酸屬于跨膜段，C端第179～206位的氨基酸為盤繞結(jié)構(gòu)，由此即可判斷出RCAS1歸為II型膜蛋白，能夠以盤繞結(jié)構(gòu)的形式構(gòu)成寡聚體。此外，RCAS1還有可溶性形式存在，可在細(xì)胞代謝過程中被分泌到細(xì)胞外[5]。RCAS1被發(fā)現(xiàn)之初是作為婦科腫瘤的標(biāo)志物，子宮頸鱗狀上皮細(xì)胞癌組織中RCAS1的表達(dá)率約為87%,子宮頸腺癌組織中RCAS1的表達(dá)率也為87%,而子宮內(nèi)膜腺癌中RCAS1的表達(dá)率約為66%,卵巢癌組織中RCAS1的表達(dá)率為58%；同時(shí)RCAS1在腫瘤細(xì)胞的胞膜與胞漿均有一定表達(dá)[6]。之后相關(guān)研究表明, RCAS1在多種惡性腫瘤中呈現(xiàn)高表達(dá)，如肺癌、乳腺癌、子宮腫瘤、膽管癌、肝癌、胃癌等，而且RCAS1蛋白表達(dá)程度與腫瘤的分化、轉(zhuǎn)移及預(yù)后相關(guān)[7-8]。免疫組織化學(xué)研究結(jié)果表明，約有98%的胃癌患者能檢測(cè)到RCAS1表達(dá)[7]。RT-PCR和免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果表明，在進(jìn)展期結(jié)腸癌中RCAS1呈現(xiàn)高水平表達(dá),在正常結(jié)腸組織中卻僅能檢測(cè)到微弱的表達(dá)[9]。近年有研究發(fā)現(xiàn)，RCAS1在胰腺癌、皮膚腫瘤及霍奇金淋巴瘤等許多腫瘤組織中均有一定表達(dá)[10]?；A(chǔ)研究指出免疫系統(tǒng)的一部分細(xì)胞可以表達(dá)出RCAS1受體，比如CD3+T細(xì)胞與NK細(xì)胞表面就有RCAS1受體分子存在，尤其是當(dāng)它們被某些因素激活后，RCAS1蛋白則作為配體與這些表達(dá)其受體的細(xì)胞結(jié)合，即T細(xì)胞、NK細(xì)胞，使細(xì)胞生長(zhǎng)周期出現(xiàn)停滯，或細(xì)胞顯示凋亡[1，11]。因而，腫瘤細(xì)胞可能是以表達(dá)RCAS1蛋白的方式來降低機(jī)體免疫系統(tǒng)的自我保護(hù)開啟程度，并逃避免疫監(jiān)視，這樣腫瘤細(xì)胞即能有條件生存。綜上，RCAS1有可能成為臨床上腫瘤基因治療的新的靶點(diǎn)。

本研究結(jié)果表明,在正常食管黏膜、癌旁非典型增生及癌組織中,RCAS1蛋白陽性表達(dá)率依次升高；RCAS1陽性表達(dá)率與患者的性別、年齡無關(guān)，而與腫瘤浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織分化程度有關(guān)。提示RCAS1在食管鱗癌組織中的異常表達(dá)與腫瘤的浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和組織分化程度有明顯的相關(guān)性，檢測(cè)RCAS1蛋白表達(dá)情況有助于食管癌的診斷、臨床治療及預(yù)后判斷。

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Expression of RCAS1 in esophageal carcinoma and its clinical significance

LIU Ting, LI Jing, GAO Feng

(Youfu Hospital of Hebei Province, Shijiazhuang 050051, Hebei, China)

Abstract:Objective It is to evaluate the relationship between the receptor-binding cancer antigen expressed on SiSo cells (RCAS1) with the occurrence and development of human esophageal squamous cell carcinoma and clinical significance. Methods 61 cases of esophageal squamous cell carcinoma tissues and 34 cases of paracancerous atypical hyperplasia tissues and 21 cases of normal mucosa tissue were selected, and the expression of RCAS1 protein were detected by immunohistochemical SP method. The relationship between the expression of RCAS1 protein and the clinicopathological parameters in patients with esophageal squamous cell carcinoma was analyzed. Results The rate of RCAS1 positive expression in patients with sex, age and has nothing to do with benign or malignant tumor related. The positive expression rate of RCAS1 in patients with esophageal squamous cell carcinoma was not related with age and sex (all P>0.05), and it was significantly related to the depth of tumor invasion, lymph node metastasis, and the degree of differentiation (all P<0.05). Conclusion the abnormal expression of RCAS1 in the esophageal squamous cell carcinoma tissue is significantly related to tumor invasion depth, lymph node metastasis and tissue differentiation degree, the detection of the RCAS1expression is helpful to the diagnosis, clinical treatment and prognosis of esophageal carcinoma.

Key words:esophageal cancer; receptor-binding cancer antigen expressed on SiSo cells protein; immunohistochemistry

[收稿日期]2015-10-10

[中圖分類號(hào)]R735.1

[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A

[文章編號(hào)]1008-8849(2016)15-1629-03

doi:10.3969/j.issn.1008-8849.2016.15.010

[作者簡(jiǎn)介]劉婷，女，主管檢驗(yàn)師，研究方向?yàn)獒t(yī)學(xué)檢驗(yàn)。