化痰消瘀方對(duì)胃癌前病變大鼠PTEN、FAK及paxillin表達(dá)的影響

吳佳慧，劉　皓，郭亞云，魏睦新

(南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院，江蘇 南京 210029)

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化痰消瘀方對(duì)胃癌前病變大鼠PTEN、FAK及paxillin表達(dá)的影響

吳佳慧，劉皓，郭亞云，魏睦新

(南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院，江蘇 南京 210029)

[摘要]目的觀察化痰消瘀方對(duì)胃癌前病變大鼠PTEN、FAK及paxillin表達(dá)的影響，從分子生物學(xué)水平探討其逆轉(zhuǎn)胃癌前病變的作用機(jī)制。方法選擇90只4～5周齡SD雄性大鼠，隨機(jī)取15只作為空白組，其余大鼠均采用N-甲基-N’-硝基N-亞硝基胍綜合饑飽失常、濃鹽水灌胃的方法制備胃癌前病變大鼠模型。將造模成功大鼠隨機(jī)分為模型組，中藥高、中、低劑量組及維酶素組，每組13只?？瞻捉M正常飲食，余均造模成功后，模型組給予生理鹽水灌胃，中藥高、中、低劑量組分別給予3 mL/kg、2 mL/kg、1 mL/kg化痰消瘀方灌胃，維酶素組給予10 mL/kg維酶素灌胃，均灌胃8周。采用HE染色法觀察大鼠胃黏膜病理改變情況，應(yīng)用免疫組化法檢測(cè)胃黏膜組織中PTEN、FAK及paxillin的表達(dá)情況。結(jié)果HE染色顯示空白組大鼠胃黏膜無(wú)癌前病變改變，模型組均出現(xiàn)不同程度的胃癌前病變改變，中藥高、中劑量組和維酶素組胃黏膜癌前病變情況均較模型組明顯改善(P均<0.05)，且中藥高劑量組改善程度高于其他各給藥組(P均<0.05)。免疫組化結(jié)果顯示PTEN在空白組強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)；模型組鮮有表達(dá)；中藥高、中、低劑量組表達(dá)量逐漸降低，但高于模型組(P均<0.05)；中藥高劑量組PTEN表達(dá)量高于其他各給藥組(P均<0.05)。FAK、paxillin在空白組極少表達(dá)，模型組表達(dá)量較空白組顯著增加(P均<0.05)；中藥高、中、低劑量組二者表達(dá)量均明顯低于模型組(P均<0.05)，其中高劑量組表達(dá)量明顯低于其他各給藥組(P均<0.05)。結(jié)論中藥化痰消瘀方可顯著改善胃癌前病變大鼠胃黏膜組織病理學(xué)情況，其作用機(jī)制可能是激活抑癌基因PTEN，調(diào)節(jié) FAK的去磷酸化，通過(guò)FAK/Src 信號(hào)通路下調(diào)paxillin來(lái)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。

[關(guān)鍵詞]胃癌前病變；化痰消瘀方； PTEN；FAK；paxillin

胃癌是一種全球高發(fā)的消化系統(tǒng)惡性腫瘤，《五大洲癌癥發(fā)病率》第9卷[1]的統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，中國(guó)的胃癌病死率和發(fā)病率位于全球前20位，高于全世界平均水平，對(duì)人類(lèi)健康構(gòu)成嚴(yán)重威脅。我國(guó)對(duì)早期胃癌的診斷率僅為10%，這主要源于胃癌早期階段癥狀缺乏特異性，而中晚期出現(xiàn)明顯癥狀時(shí)已錯(cuò)過(guò)治療的最佳時(shí)機(jī)，從而導(dǎo)致患者生存率不足10%[2]。而大多數(shù)早期胃癌都有一個(gè)比較漫長(zhǎng)的胃癌前期過(guò)程，胃癌前期包括胃癌前狀態(tài)和胃癌前病變(PLGC)，前者包括慢性萎縮性胃炎(CAG)、胃腺瘤型息肉、殘胃炎、惡性貧血以及慢性胃潰瘍；后者指在慢性萎縮性胃炎基礎(chǔ)上伴發(fā)的不完全型腸上皮化生(IM)和/或中、重度異型增生(Dys)。中醫(yī)學(xué)中并無(wú)胃癌前病變的明確概念，而胃癌前病變通常由慢性萎縮性胃炎進(jìn)一步發(fā)展而來(lái)，故目前多數(shù)學(xué)者將胃癌前病變歸入中醫(yī)“胃痞”范疇。胃癌前病變是本虛標(biāo)實(shí)，寒熱錯(cuò)雜的病癥，病因多為外邪犯胃、飲食傷胃、情志不暢、脾胃素虛；病機(jī)關(guān)鍵是脾胃虛弱，痰瘀交阻。魏睦新教授通過(guò)大量的臨床實(shí)踐，總結(jié)出診療胃癌前病變的獨(dú)特方案，以“化痰活血消瘀法”為核心包括補(bǔ)氣健脾治其本，活血祛痰治其標(biāo)，凝練出了以“二陳湯”為主方加減的化痰消瘀方，隨癥加減，臨床療效顯著，達(dá)到化痰活血祛瘀、利水消腫兼以補(bǔ)虛、抗腫瘤、鎮(zhèn)痛、促進(jìn)免疫等作用[3]。本實(shí)驗(yàn)?zāi)康脑谟谔剿骰迪龇侥孓D(zhuǎn)胃癌前病變的分子作用機(jī)制。

1實(shí)驗(yàn)資料

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選用4～5周的SD雄性大鼠90只，體質(zhì)量80～100 g，由南京醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物許可證號(hào)：SYXK(蘇)2008-0007。

1.2藥物化痰消瘀方主要由陳皮12 g、法半夏10 g、豬苓10 g、莪術(shù)10 g、紫丹參15 g、炒薏苡仁30 g、白花蛇舌草15 g、半枝蓮15 g、仙鶴草15 g等組成，煎煮前將上述中藥迅速漂洗，冷水浸泡1 h后，加水沒(méi)過(guò)藥材約2 cm，煎煮40 min，過(guò)濾藥汁后將藥渣繼續(xù)加水煎煮取汁，合并，調(diào)節(jié)濃度至1 kg/L，-20 ℃保存?zhèn)溆谩-甲基-N’-硝基N-亞硝基胍(N-methyl-N’-nitro-N-nitrosoguanidine, MNNG)5 g，由日本東京化成工業(yè)株式會(huì)社生產(chǎn)；雷尼替丁0.15 g，江西匯仁藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，國(guó)藥準(zhǔn)字H36021340；維酶素片0.2 g，北海陽(yáng)光藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，國(guó)藥準(zhǔn)字H45021183。

1.3試劑兔抗人 PTEN、FAK、paxillin單克隆抗體購(gòu)于 ABcam公司；通用型SP試劑盒、DAB顯色試劑盒均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.4方法大鼠正常飲食適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)選擇15只作為空白組，其余大鼠均采用MNNG綜合饑飽失常及濃鹽水灌胃協(xié)同方法造模：配制MNNG濃度為150 μg/mL，避光低溫保存，每天造模大鼠自由飲用,以饑飽失常法(每周隔2 d禁食1 d)喂養(yǎng)大鼠0.03%雷尼替丁飼料，同時(shí)予15%濃鹽水于禁食日灌胃(2 mL/只)；同一天空白組予蒸餾水2 mL/只灌胃，正常飲食。分別于第10，16，24周隨機(jī)抽取2只造模大鼠麻醉取胃，分別從胃竇、胃體處取組織2～3塊，中性甲醛溶液固定，乙醇梯度脫水，石蠟包埋，連續(xù)4 μm厚度切片，蘇木精-伊紅(hematoxylin-eosin, HE)染色，中性樹(shù)膠封片，于實(shí)驗(yàn)第24 周在光鏡下觀察到胃黏膜出現(xiàn)慢性萎縮性胃炎、中重度異型增生、不完全型腸上皮化生，以此確定造模成功。將造模成功后存活大鼠隨機(jī)分為模型組，中藥高、中、低劑量組及維酶素組，每組13只。空白組保持正常飲食；模型組予生理鹽水2 mL/只灌胃；中藥高、中、低劑量組分別給予化痰消瘀方3 mL/kg、2 mL/kg、1 mL/kg灌胃；維酶素組給予維酶素混懸液10 mL/kg灌胃，均1次/d。灌胃8周后，將全部大鼠麻醉處死取胃組織，按檢測(cè)造模是否成功方法制備標(biāo)本。

1.5觀察指標(biāo)

1.5.1一般情況和病理表現(xiàn)觀察干預(yù)前后各組大鼠精神狀態(tài)、活動(dòng)情況、毛色、食欲、糞便及體質(zhì)量變化。制備好的HE染色標(biāo)本均由2位病理醫(yī)師采取雙盲法閱片，判斷各組大鼠胃癌前病變情況。

1.5.2胃黏膜組織中PTEN、FAK、paxillin表達(dá)情況采用免疫組化法檢測(cè)。配制PTEN一抗工作濃度為1∶300，F(xiàn)AK、paxillin一抗工作濃度均為1∶200，具體實(shí)驗(yàn)步驟按照通用型SP試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照，以已知的PTEN、FAK、paxillin胃腺癌組織切片作為陽(yáng)性對(duì)照。結(jié)果判讀以光鏡下細(xì)胞質(zhì)呈棕黃色或棕褐色細(xì)顆粒為染色陽(yáng)性。染色強(qiáng)度評(píng)分：無(wú)染色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。每張切片隨機(jī)選取5個(gè)高倍視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)評(píng)分：無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞為0分；<10%為1分；11%～50%為2分；51%～75%為3分；>75%為4分。根據(jù)染色強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)分別計(jì)分，總分為兩者之積， 0分計(jì)為(-)，1～3 分計(jì)為(+)，4～5 分計(jì)為()，≥6 分計(jì)為()。

2結(jié)果

2.1各組大鼠一般情況與空白組大鼠比較，造模大鼠精神差，活動(dòng)少，被毛枯槁稀疏，食少瘦削，糞便軟而不成形。與模型組大鼠相比，各給藥組大鼠精神活動(dòng)可，進(jìn)食增加，糞便漸而成形，體質(zhì)量均較模型組顯著增加(P均<0.05)，其中中藥高、中劑量組體質(zhì)量均明顯高于維酶素組(P均<0.05) 。見(jiàn)表1。

表1　各組大鼠干預(yù)前后體質(zhì)量變化情況±s，g)

注：①與空白組比較，P<0.05；②與模型組比較，P<0.05；③與維酶素組比較，P<0.05。

2.2各組大鼠胃黏膜病理表現(xiàn)與空白組相比，模型組胃黏膜充血水腫，有散在的潰瘍點(diǎn)，胃竇部黏膜變薄，以白相為主，甚至可見(jiàn)黏膜下血管分布，鏡下示大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，固有腺體減少，可見(jiàn)腸上皮腺體，或者不典型增生細(xì)胞出現(xiàn)，見(jiàn)圖1和圖2；與模型組相比，中藥高、中劑量組和維酶素組大鼠胃黏膜紅潤(rùn)有光澤，黏膜皺襞完整，鏡下少見(jiàn)萎縮，少有炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，偶見(jiàn)腺上皮增生，見(jiàn)圖3和圖4。各給藥組干預(yù)后癌前病變得到不同程度的逆轉(zhuǎn)，見(jiàn)表2。

圖1　空白組大鼠胃黏膜HE染色表現(xiàn)(×200)

2.3各組胃黏膜組織中PTEN、FAK、paxillin鏡下表現(xiàn)空白組PTEN染色深，呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，見(jiàn)圖5；模型組鮮有表達(dá)，見(jiàn)圖6；中藥高、中、低劑量組PTEN染色逐漸變淺，陽(yáng)性表達(dá)減少，見(jiàn)圖7；維酶素組PTEN染色強(qiáng)度低于中藥高劑量組而高于中劑量組，見(jiàn)圖8?？瞻捉MFAK鮮有表達(dá)，免疫組化染色幾乎不著色，見(jiàn)圖9；模型組FAK強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，染色呈深棕色，見(jiàn)圖10；中藥高、中、低劑量組FAK陽(yáng)性表達(dá)增加，免疫組化染色逐漸變深，見(jiàn)圖11；維酶素組FAK著色程度介于中藥高、中劑量組之間，見(jiàn)圖12?？瞻捉Mpaxillin免疫組化染色幾乎不著色，見(jiàn)圖13；模型組paxillin免疫組化染色呈棕黃色，強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，見(jiàn)圖14；中藥高、中、低劑量組paxillin免疫組化染色逐漸變深，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)增加，見(jiàn)圖15；維酶素組paxillin陽(yáng)性表達(dá)程度介于中藥高、中劑量組之間，見(jiàn)圖16。

圖2　模型組大鼠胃黏膜HE染色表現(xiàn)(×200)

圖3　中藥高劑量組大鼠胃黏膜HE染色表現(xiàn)(×200)

圖4　維酶素組大鼠胃黏膜HE染色表現(xiàn) (×200)

只

注：①與空白組比較，P<0.05；②與模型組比較，P<0.05；③與中藥高劑量組比較，P<0.05。

圖5　空白組PTEN免疫組化表現(xiàn)(×200)

圖6　模型組PTEN免疫組化表現(xiàn)(×200)

圖7　中藥高劑量組PTEN免疫組化表現(xiàn)(×200)

圖8　維酶素組PTEN免疫組化表現(xiàn)(×200)

圖9空白組FAK免疫組化表現(xiàn)(×200)

圖10　模型組FAK免疫組化表現(xiàn)(×200)

圖11　中藥高劑量組FAK免疫組化表現(xiàn)(×200)

圖12　維酶素組FAK免疫組化表現(xiàn)(×200)

圖13　空白組paxillin免疫組化表現(xiàn)(×200)

圖14　模型組paxillin免疫組化表現(xiàn)(×200)

圖15　中藥高劑量組paxillin免疫組化表現(xiàn)(×200)

圖16　維酶素組paxillin免疫組化表現(xiàn)(×200)

2.4各組胃黏膜組織中PTEN、FAK、paxillin表達(dá)情況模型組PTEN表達(dá)量明顯低于空白組(P<0.05)，F(xiàn)AK、paxillin表達(dá)量均明顯高于空白組(P均<0.05)。中藥高、中、低劑量組PTEN表達(dá)量表達(dá)量逐漸降低，但均高于模型組(P均<0.05)；中藥高劑量組PTEN表達(dá)量高于其他各給藥組(P均<0.05)。中藥高、中、低劑量組FAK、paxillin表達(dá)量均明顯低于模型組(P均<0.05)，其中中藥高劑量組表達(dá)量明顯低于其他各給藥組(P均<0.05)。見(jiàn)表3。

表3　各組胃黏膜組織中PTEN、FAK、paxillin表達(dá)情況

注：①與空白組比較，P<0.05；②與模型組比較，P<0.05；③與中藥高劑量組比較，P<0.05。

3討論

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為由胃癌前病變發(fā)展到胃癌是一個(gè)多階段的動(dòng)態(tài)演變過(guò)程。早在1975年，Correa等[4]便提出正常胃黏膜歷經(jīng)慢性萎縮性胃炎、中重度異型增生、不完全型腸上皮化生逐步發(fā)展到早期胃癌的過(guò)程。多數(shù)學(xué)者認(rèn)為患者胃黏膜一旦進(jìn)入胃癌前病變階段便難以逆轉(zhuǎn)，故現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)胃癌的研究焦點(diǎn)聚集在臨床中根據(jù)胃癌的TNM分期，采取不同的外科手術(shù)聯(lián)合化療方案綜合治療，主要以緩解癥狀為主，而對(duì)胃癌前病變的防治方法研究甚少。積極探索胃癌前期的防治方法，不僅能有效降低我國(guó)胃癌的發(fā)病率和死亡率，同時(shí)將對(duì)全球胃癌的防控做出重大貢獻(xiàn)。

中醫(yī)強(qiáng)調(diào)辨病與辨證相結(jié)合，在腫瘤的癌前病變時(shí)期，中醫(yī)藥發(fā)揮治未病的優(yōu)勢(shì)，在逆轉(zhuǎn)胃癌前病變方面取得了一定的臨床療效。魏睦新教授指導(dǎo)的課題組近年來(lái)在胃癌前病變內(nèi)在機(jī)制研究以及防治策略方面積累了一定的經(jīng)驗(yàn)，一方面用化痰消瘀方對(duì)胃癌前病變患者進(jìn)行臨床治療，實(shí)現(xiàn)了癥狀改善，病理逆轉(zhuǎn)[5-7]；另一方面進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，證實(shí)逆轉(zhuǎn)機(jī)制可能與抑制Survivin、Livin表達(dá)，促進(jìn)細(xì)胞凋亡[8]；上調(diào)Caspase-3表達(dá)、下調(diào)CyclinD1及mTOR表達(dá)，調(diào)節(jié)細(xì)胞周期有關(guān)[9]。但腫瘤的發(fā)生是分子事件，多種基因協(xié)同調(diào)控細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)傳導(dǎo)通路，調(diào)控細(xì)胞周期，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，一旦基因表達(dá)異常，便會(huì)影響細(xì)胞的生長(zhǎng)發(fā)育。

PTEN是第10號(hào)染色體上同源缺失性磷酸酶和張力蛋白基因 (Phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten)，定位于人類(lèi)染色體10q23.3，也稱(chēng)TEP1或MMAC1基因，是使脂類(lèi)去磷酸化的唯一抑癌基因，在晚期原發(fā)性惡性腫瘤中表達(dá)多缺失[10]。Bronise 等[11]研究發(fā)現(xiàn)通過(guò)蛋白磷酸酶的作用，PTEN能使FAK去磷酸化，下調(diào)FAK活性，從而達(dá)到抑制腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移作用。有研究結(jié)果顯示在癌旁胃黏膜-腸化生-異型增生-胃癌的癌變進(jìn)展過(guò)程中，PTEN的陽(yáng)性率逐漸降低，且胃癌和異型增生中的陽(yáng)性率顯著低于癌旁胃黏膜和腸化生胃黏膜，提示胃黏膜上皮細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化與PTEN基因的異常遺傳學(xué)改變相關(guān)[12-13]。

FAK是一種非受體酪氨酸激酶，F(xiàn)AK基因定位于人體8q24，生物進(jìn)化過(guò)程高度保守，各物種間的同源性高達(dá)90%[14]。Tyr397是FAK自身磷酸化的主要位點(diǎn)[15]，與Src家族直接作用。研究發(fā)現(xiàn)FAK通過(guò)Tyr397活化后，可引起胃癌細(xì)胞的增生、遷移和侵襲[16]。諸多研究表明，F(xiàn)AK作為細(xì)胞內(nèi)重要的信號(hào)分子，被認(rèn)為是信號(hào)傳導(dǎo)的匯聚點(diǎn)，還可以促進(jìn)細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)和生長(zhǎng)，促進(jìn)細(xì)胞失巢凋亡，促使腫瘤細(xì)胞的增殖和遷移[17-20]。楊麗敏等[21]研究顯示FAK在胃腺癌組織中的表達(dá)水平與其分化程度、TNM分期明顯相關(guān)，且顯著高于正常胃黏膜組織。

paxillin基因定位于人類(lèi)染色體12q24，表達(dá)產(chǎn)物是磷酸蛋白，有許多潛在的絲/蘇氨酸或絡(luò)氨酸磷酸化位點(diǎn)，paxillin是黏著斑信號(hào)蛋白和細(xì)胞黏附分子，其磷酸化是一個(gè)動(dòng)態(tài)過(guò)程，受同時(shí)活化的FAK和Src的共同調(diào)控[22]。paxillin分子是介導(dǎo)信號(hào)傳導(dǎo)的重要位點(diǎn)，源于其含有和多種信號(hào)蛋白、結(jié)構(gòu)蛋白結(jié)合的結(jié)構(gòu)域，張春宏[23]認(rèn)為paxillin在正常胃黏膜中表達(dá)很少，在慢性胃炎、慢性萎縮性胃炎、中重度異型增生、胃腺癌中的表達(dá)呈逐漸增強(qiáng)的趨勢(shì)。

目前將 PTEN、FAK、paxillin三者一起研究的國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)甚少。Herlevsen等[24]和Haier 等[25]研究發(fā)現(xiàn)PTEN 與 paxillin有一定的作用關(guān)系。Van等[26]進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，PTEN調(diào)節(jié) FAK 去磷酸化，同時(shí)作為 FAK/Src 信號(hào)通路下游信號(hào)的paxillin被磷酸化激活，因此三者之間的內(nèi)在關(guān)系可能是PTEN通過(guò)FAK 而間接調(diào)節(jié) paxillin的表達(dá)。

本研究結(jié)果顯示，中藥化痰消瘀方能有效改善胃癌前病變大鼠一般狀況以及胃黏膜病理情況，在一定程度上逆轉(zhuǎn)胃癌前病變，達(dá)到胃癌的二級(jí)預(yù)防作用?；迪龇娇娠@著上調(diào)胃癌前病變大鼠胃黏膜組織中PTEN水平，抑制FAK及 paxillin的表達(dá)，且中藥高、中劑量組抑制效果優(yōu)于維酶素組。其作用的分子生物學(xué)機(jī)制可能為化痰消瘀方激活抑癌基因PTEN，調(diào)節(jié) FAK的去磷酸化，通過(guò)FAK/Src 信號(hào)通路下調(diào)paxillin來(lái)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。

[參考文獻(xiàn)]

[1]Parkin DM,Ferlay J,Curado MP,et al. Fifty years of cancer incidence:CI5 I-IX[J]. Int J Cancer,2010,127(12):2918-2927

[2]鄭朝旭，鄭榮壽，陳萬(wàn)青. 中國(guó)2009年胃癌發(fā)病與死亡分析[J]. 中國(guó)腫瘤，2013，22(5): 327-332

[3]郭亞云，冷秀梅，魏睦新. 化痰消瘀方用于胃癌癌前病變的療效觀察[J]. 現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2013，22(33)：3663-3665

[4]Correa P,Haenszel W,Cuello C,et al. A model for gastric cancer epidemiology[J]. lancet,1975,2(7924):58-60

[5]王平，魏睦新. 胃癌前病變的研究進(jìn)展及中西醫(yī)結(jié)合防治現(xiàn)狀[J]. 中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合消化雜志，2010，18(5):341-343

[6]范堯夫，魏睦新. 胃癌前病變的研究進(jìn)展及防治對(duì)策[J]. 世界華人消化雜志，2012，20(20)：1807-1812

[7]Wu Y,Fan Y,Jiang Y,et al. Analysis of risk factors associated with precancerous lesion of gastric cancer in patients from eastern China: a comparative study[J]. J Cancer Res Ther,2013,9(2): 205-209

[8]冷秀梅，劉皓，馮小可，等. 基于Survivin、Livin凋亡抑制蛋白探討化痰消瘀方逆轉(zhuǎn)胃癌癌前病變的作用機(jī)制[J]. 世界華人消化雜志，2014，22(33)：5047-5055

[9]劉皓，王霞，范堯夫，等. 化痰消瘀方對(duì)胃癌前病變大鼠Caspase-3、Cyclind1及mTOR表達(dá)的影響[J]. 中醫(yī)學(xué)報(bào)，2014，29(7)：941-944

[10] Zhu XH,Qin X,Fei MG,et al. Combined phosphatase tensin homolog (PTEN) loss and fatty acid synthase(FAS) overexpression worsens the prognosis of Chinese patients with hepatocellular carcinoma[J]. Int J Mol Sci,2012,13(8):9980-9991

[11] Bronise A,Godlewiski J,Wallace JA,et al. Reprogramming of the tumor Microenvironment by stromal PTEN-regulated miR-320[J]. Nat cell Biol,2011,14(2):159-167

[12] 鄭華川，陳穎，況立革，等. PTEN編碼產(chǎn)物在胃癌發(fā)生發(fā)展不同階段中的表達(dá)及意義[J]. 中華腫瘤雜志，2003，25(1)：13-16

[13] 孫桂彬，楊景國(guó)，李永華，等. PTEN、p16和CyclinD1在胃癌及癌前病變中表達(dá)的研究[J]. 現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2012，21(15)：1614-1616

[14] Mitra SK,Hanson DA,Schlaepfer DD. Focal adhesion kinase: in command and control of cell motility[J]. Nat Rev Mol Cel Biol,2005,6(1):56-68

[15] Hamadi A,Bonuali M,Dontenwill M,et al. Regulation of focal adhesion dynamics and disassembly by phosphorylation of FAK at tyrosine 397[J]. J Cell Sci,2005,118(Pt19):4415-4425

[16] Lai IR,Chu PY,Lin HS,et al. Phosphorylation of focal adhesion kinase at Tyr397 in gastric carcinomas and its clinical significance[J]. Am J Pathol,2010,177(4):1629-1637

[17] Ryu SJ,ChoK A,Oh YS,et al. Role of Src-specific phosphorylation site on focal adhesion kinase for senescence associated apoptosis resistance[J]. Apoptosis,2006,11(3):303-313

[18] Duxbury MS,Ito H,Zinne MJ,et al. Focal adhesion kinase gene silencing promotes anoikis and suppresses metastasis of human pancreatic adenocarcinoma cells[J]. Surgery,2004,135(5):555-562

[19] Mian MF,Kang C,Lee S,et al. Cleavage of focal adhesion kinase is an early marker and modulator of oxidative stress induced apoptosis[J]. Chem Biol Interact,2008,171(1):57-66

[20] Xie P,Kondeti VK,Lin S,et al. Role of extracellular matrix renal tubulo-interstitial nephritis antigen(TINag) in cell survival utilizing integrin(alpha) vbeta3/focal adhesion kinase(FAK)/phosphatidylinositol 3-kinase(PI3K)/protein kinase B-serine/threonine kinase(AKT) signaling pathway[J]. J Biol Chem,2011,286(39):34131-34146

[21] 楊麗敏，王進(jìn). Paxillin、FAK 和PTEN在胃腺癌組織中的表達(dá)及其臨床意義[J]. 胃腸病學(xué)，2009，14(12)：734-737

[22] Sachdev S,Bu Y,Gelman IH. Paxillin-Y118 phosphorylation contributes to to the control of Src-induced anchorage-independent growth by FAK and adhesion[J]. BMC Cancer,2009,9(1):12

[23] 張春宏. 樁蛋白在胃上皮內(nèi)瘤變的表達(dá)及臨床意義[J]. 臨床醫(yī)藥實(shí)踐雜志，2008，17(S3)：749-751

[24] Herlevsen M,Oxford G,Ptak C,et al. A novel model to identify interaction partners of the PTEN tumor suppressor gene in human bladder cancer[J]. Biochem Biophys Res Commun,2007,352(2):549-555

[25] Haier J,Nicolson GL. PTEN regulates tumor cell adhesion of coloncarcinoma cells under dynamic conditions of fluid flow[J]. Oncogene,2002,21(9):1450-1460

[26] Van Slambrouck S,Jenkins AR,Romero AE,et al. Reorganization of the integrin alpha2 subunit controls cell adhesion and cancer cell invasion in prostate cancer[J]. Int J Oncol,2009,34(6):1717-1726

Effects of Huatan Xiaoyu decoction on expressions of PTEN, FAK and paxillin in rats with precancerous lesions of gastric cancer

WU Jiahui, LIU Hao, GUO Yayun, WEI Muxin

(The First Affiliated Hospital with Nanjing Medical University, Nanjing 210029, Jiangsu, China)

Abstract:Objective It is to observe the influence of Huatan Xiaoyu decoction (HTXYD) on expressions of PTEN, FAK and paxillin in rats with precancerous lesions of gastric cancer (PLGC), and explore the mechanism of reversing the precancerous lesions of gastric cancer from the level of molecular biology. Methods Ninety male SD rats of 4 to 5-week-old were randomly divided into blank group, model group, high dose Chinese medicine group, medium dose Chinese medicine group, low dose Chinese medicine group, and Vitacoenzyme group. Except for blank group, all the other groups mainly used N-methyl-N’-nitro-N-nitrosoguanidine (MNNG), irregular diet and emotional stimuli to establish PLGC rat models. After successful modeling, the animals in the model group were given normal saline, and different dose HTXYD and Vitacoenzyme in the corresponding treat groups. 8 weeks later, the pathological changes of gastric mucosa was observed by HE staining, and the expressions of PTEN, FAK and paxillin was detected by immunohistochemistry. Results HE staining showed that there was no precancerous lesion in the gastric mucosa of the rats in the blank group, but had different degree of precancerous lesion of gastric cancer in the model group. Compared with the model group, the gastric mucosal precancerous lesion of the high does and the middle dose Chinese medicine group and the Vitacoenzyme group were significantly improved (all P<0.05); and the improvement of the high dose Chinese medicine group was better than that of the other treatment groups (all P<0.05). The immunohistochemistry results showed that PTEN was strongly expressed in the blank group; there was little expression in model group; the expressions of the high does, the medium does and the low dose Chinese medicine group were gradually decreased, but were significantly higher than that of the model group (all P<0.05), and the expression of PTEN in the high dose group was significantly higher than that in the other treatment groups (all P<0.05). Paxillin, FAK was very little expression in the blank group, but the expressions in the model group were significantly increased than that in the blank group (all P<0.05); their expression levels in the high does, the medium does and the low does Chinese medicine group were significantly lower than those in the model group (all P<0.05), and which in the high dose Chinese medicine group was significantly lower than that in the other treatment groups (all P<0.05). Conclusion HTXYD can significantly improve the pathological conditions of gastric mucosa to reverse the PLGC rats, the possible mechanism is to activate tumor suppressor gene PTEN, to regulate the dephosphorylation of FAK, and to down-regulate the paxillin through FAK/Src signaling pathway in aim to induce apoptosis.

Key words:precancerous lesions of gastric cancer; Huatan Xiaoyu decoction; PTEN; FAK; paxillin

[收稿日期]2015-12-15

[中圖分類(lèi)號(hào)]R-332

[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A

[文章編號(hào)]1008-8849(2016)15-1611-06

doi:10.3969/j.issn.1008-8849.2016.15.005

[基金項(xiàng)目]江蘇省中醫(yī)藥局科技基金資助項(xiàng)目(YB2015163)；江蘇省中醫(yī)藥管理局基金資助項(xiàng)目(JD11040)

[作者簡(jiǎn)介]吳佳慧，女，碩士研究生，主要從事中西醫(yī)結(jié)合治療消化病的基礎(chǔ)和臨床研究。[通信作者]魏睦新，E-mail: weimuxin@njmu.edu.cn