血清TNF-α和sEC的表達(dá)與原發(fā)性肝癌侵襲和轉(zhuǎn)移的關(guān)系*>

袁　林，沈世強(qiáng)

(1.柳州市人民醫(yī)院普通外科，廣西 柳州 545006；2.武漢大學(xué)人民醫(yī)院普通外科)

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血清TNF-α和sEC的表達(dá)與原發(fā)性肝癌侵襲和轉(zhuǎn)移的關(guān)系*>

袁林1，沈世強(qiáng)2

(1.柳州市人民醫(yī)院普通外科，廣西 柳州 545006；2.武漢大學(xué)人民醫(yī)院普通外科)

摘要：目的 探討檢測(cè)原發(fā)性肝癌患者手術(shù)治療前后外周血腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和血清可溶性E-鈣粘蛋白(sEC)的表達(dá)及侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)系。方法 檢測(cè)66例原發(fā)性肝癌患者手術(shù)前后及50例健康人TNF-α、sEC和AFP的水平，分析術(shù)前TNF-α、sEC和AFP水平與臨床病理特征的關(guān)系。結(jié)果 原發(fā)性肝癌患者術(shù)前TNF-α、sEC水平顯著高于健康人，手術(shù)1周后TNF-α、sEC水平較術(shù)前顯著下降。術(shù)前TNF-α水平與腫瘤分級(jí)、TNM分期密切相關(guān)(P<0.01)，與腫瘤大小、有無門靜脈癌栓、有無包膜相關(guān)(P<0.05)，與年齡、性別、有無腹水無關(guān)(P>0.05)。術(shù)前sEC水平與腫瘤分級(jí)、TNM分期密切相關(guān)(P<0.01)，與有無門靜脈癌栓、有無包膜、有無腹水相關(guān)(P<0.05)，與年齡、性別、腫瘤大小無關(guān)(P>0.05)。結(jié)論 TNF-α和sEC參與原發(fā)性肝癌的侵襲和轉(zhuǎn)移，在肝癌的惡性進(jìn)展中起著重要作用，可作為一種肝細(xì)胞癌預(yù)后和復(fù)發(fā)預(yù)測(cè)因子。

關(guān)鍵詞：腫瘤壞死因子-α；可溶性E-鈣粘蛋白；原發(fā)性肝癌；侵襲；轉(zhuǎn)移

原發(fā)性肝癌(primary hepatic carcinoma，PHC)是危害人類健康的常見消化道惡性腫瘤之一，其致死率位居所有腫瘤的第 3位[1]。目前治療通常首選手術(shù)切除和肝臟移植，但因該病發(fā)展隱匿，早期診斷困難，且術(shù)后的復(fù)發(fā)率高[2]。惡性腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移是影響腫瘤手術(shù)等治療及預(yù)后的關(guān)鍵，現(xiàn)經(jīng)證實(shí)，腫瘤細(xì)胞間粘附的喪失是腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵環(huán)節(jié)[3],而上皮細(xì)胞-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial- mesenchymal transition，EMT)又是細(xì)胞間粘附的基本環(huán)節(jié)。腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-alpha，TNF-α)是一種重要的細(xì)胞因子，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在許多腫瘤生長(zhǎng)的微環(huán)境中都有TNF-α的表達(dá)，同時(shí)TNF-α活化的 NF-κB 和 ROS 均可以在某些細(xì)胞引起EMT，其中E-鈣粘蛋白(E-cadherin)的下調(diào)似乎是關(guān)鍵事件?？扇苄?E-鈣粘蛋白(sEC)為E-cadherin生成的可溶性裂解片段，檢測(cè)sEC可反應(yīng)組織中E-cadherin狀態(tài)。我們的前期研究[4]發(fā)現(xiàn)，PHC患者肝癌組織中E-cadherin表達(dá)缺失，且在外周血中檢測(cè)sEC，有利于PHC的早期診斷和監(jiān)測(cè)術(shù)后的復(fù)發(fā)。本研究進(jìn)一步測(cè)定PHC患者術(shù)前、術(shù)后外周血TNF-α和sEC水平，同時(shí)檢測(cè)血甲胎蛋白(alpha-fetoprotein，AFP)水平，探討檢測(cè)外周血TNF-α和sEC水平對(duì)PHC侵襲和轉(zhuǎn)移的預(yù)測(cè)作用。

1資料與方法

1.1一般資料選取2012年12月至2015年6月間在本院監(jiān)測(cè)對(duì)象取自PHC行根治性切除術(shù)者75例，其中9例患者接受姑息性手術(shù)或術(shù)后因并發(fā)癥死亡或恢復(fù)期臨床癥狀未改善或者數(shù)據(jù)不完整，故將此9例病例剔除，最終入組患者66例，男39例，女27例，年齡33～77歲，平均52.3歲。PHC診斷以UICC[5]為標(biāo)準(zhǔn)，所有研究對(duì)象均為初治病例，術(shù)前均未接受過任何藥物治療或放療。同時(shí)收集同期健康體檢者50例作為對(duì)照，其中男29例，女21例，年齡26～63歲，平均49.2歲。健康體檢者血細(xì)胞計(jì)數(shù)、血脂、肝腎功能均正常范圍。

1.2血清樣本收集與處理患者手術(shù)前與手術(shù)后第7～9d，空腹8～12 h后于清晨取肘靜脈血立即放入4℃冰箱靜置20 min。4℃4 000 r/min離心15 min分離血清。將血清轉(zhuǎn)移到新的離心管中，放入-80℃冰箱保存。檢測(cè)前取出血清樣品，冰上融化后，4℃12 000 r/min離心10 min，除去血清中的不溶物。TNF-α和sEC的血清水平采用ELISA方法檢測(cè)，AFP采用放射免疫法，所有操作嚴(yán)格按試劑盒說明進(jìn)行。

2結(jié)果

2.1血清TNF-α、sEC、AFP在PHC患者手術(shù)前后及健康人中的比較術(shù)前各指標(biāo)均高于手術(shù)后，手術(shù)前后比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(分別為P<0.01，P<0.05，P<0.01)；術(shù)前各指標(biāo)也明顯高于健康對(duì)照組，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(分別為P<0.01，P<0.01，P<0.05)；而術(shù)后TNF-α、sEC稍高于健康對(duì)照組，但兩者比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。而AFP在術(shù)后與健康對(duì)照無明顯變化，兩者比較也無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1　健康人及HCC患者手術(shù)前后TNF-α、sEC和AFP值的變化

與術(shù)前比較，*P<0.05、**P<0.01；與健康對(duì)照比較，#P<0.05、##P<0.01

2.2PHC患者術(shù)前血清TNF-α、sEC、AFP與臨床病理特征的關(guān)系表2結(jié)果顯示PHC患者術(shù)前外周血TNF-α水平與臨床分期及分級(jí)顯著相關(guān)，分期較晚及低分化患者的血清TNF-α濃度較分期較早及分化較好患者明顯升高(P<0.01)；此外腫瘤大小、有無門靜脈癌栓、有無包膜，差異具有顯著性(P<0.05)；但不同年齡、性別及有無腹水，差異無顯著性(P>0.05)。

表2　PHC病理學(xué)參數(shù)與血清TNF-α、sEC、AFP水平的關(guān)系

同組內(nèi)比較，*P<0.05、**P<0.01

術(shù)前血清sEC濃度與肝細(xì)胞癌臨床分期及分級(jí)顯著相關(guān)，分期較晚及低分化患者的血清sEC濃度較早期患者明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；此外有無門靜脈癌栓、腹水、有無包膜，差異顯著(P<0.05)；但不同年齡、性別及腫瘤大小，差異無顯著性(P>0.05)。而術(shù)前AFP水平僅與肝細(xì)胞癌TNM分期密切相關(guān)(P<0.05)，與年齡、性別、腫瘤大小、腫瘤分級(jí)、有無門靜脈癌栓、有無包膜無關(guān)(P>0.05)，見表2。

3討論

TNF-α是由活化的巨噬/單核細(xì)胞系統(tǒng)產(chǎn)生有多種生物學(xué)效應(yīng)的一種重要細(xì)胞因子，除了由成纖維細(xì)胞、星狀細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生外，許多惡性腫瘤細(xì)胞也可產(chǎn)生TNF-α。研究顯示[6]：由TNF-α活化的NFκB和ROS均可在某些細(xì)胞中引起EMT，從而導(dǎo)致惡性腫瘤細(xì)胞的侵襲，進(jìn)而引起腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。在發(fā)生EMT的過程中[7]，某些特殊區(qū)域的上皮細(xì)胞基因表達(dá)發(fā)生完全性改變，其中E-cadherin的下調(diào)或缺失被認(rèn)為是關(guān)鍵性事件，但該種效應(yīng)在PHC中尚未見相關(guān)報(bào)道。目前己經(jīng)證實(shí)[8]E-cadherin在結(jié)腸癌、胃癌等消化道惡性腫瘤中表達(dá)下調(diào)，特別在肝癌肝細(xì)胞中缺失程度較高，并與預(yù)后有著較為密切的關(guān)系。sEC為E-cadherin生成的可溶性裂解片段，我們的前期研究發(fā)現(xiàn)，肝癌組織中E-鈣粘連蛋白的表達(dá)與肝癌的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。雖然AFP作為肝癌輔助診斷指標(biāo)的重要地位已被公認(rèn)[9]，但仍有30%～40%的肝癌患者血清AFP呈陰性[10]。因此，對(duì)這類患者尋求敏感的血清診斷標(biāo)記物，具有重要的臨床意義。

我們的前期研究發(fā)現(xiàn)，PHC患者肝癌組織中E-cadherin表達(dá)缺失，且在外周血中檢測(cè)sEC，有利于PHC的早期診斷和監(jiān)測(cè)術(shù)后的復(fù)發(fā)，與腫瘤組織標(biāo)本相比，血清學(xué)指標(biāo)具有簡(jiǎn)便、重復(fù)性好、便于隨訪等優(yōu)點(diǎn)。

本研究對(duì)66例PHC患者手術(shù)前、手術(shù)后和健康對(duì)照血TNF-α、sEC和AFP檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，術(shù)前TNF-α、sEC和AFP均高于手術(shù)后和健康者，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而術(shù)后TNF-α、sEC和AFP與健康對(duì)照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。表明PHC患者術(shù)前存在與AFP升高相一致的TNF-α、sEC異常表達(dá)，術(shù)前監(jiān)測(cè)TNF-α、sEC水平也可作為PHC的指標(biāo)。我們大膽地推測(cè)，TNF-α、sEC可作為象AFP一樣的肝癌的血清檢測(cè)標(biāo)志物。

進(jìn)一步對(duì)PHC患者術(shù)前TNF-α、sEC水平與肝癌患者臨床病理特征進(jìn)行分析，并與AFP進(jìn)行對(duì)比發(fā)現(xiàn)，術(shù)前TNF-α、sEC均與PHC的臨床分期和分級(jí)呈顯著相關(guān)性(P<0.01)，與有無門靜脈癌栓、有無包膜也有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。而術(shù)前AFP水平僅與肝細(xì)胞癌TNM分期密切相關(guān)(P<0.05)，與年齡、腫瘤大小、腫瘤分級(jí)、有無門靜脈癌栓、有無包膜相關(guān)無關(guān)(P>0.05)，表明術(shù)前檢測(cè)TNF-α、sEC能更好地判斷PHC的預(yù)后。但TNF-α與腫瘤的大小之間有相關(guān)性，而與有無腹水無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可能是TNF-α一方面作為腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移因子，另一方面TNF-α也是腫瘤細(xì)胞重要的免疫調(diào)節(jié)因子，故而在巨塊型肝癌中TNF-α表達(dá)顯著升高。而術(shù)前sEC與有無腹水有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而與腫瘤的大小無相關(guān)性。由此推測(cè)，在將TNF-α、sEC作為其預(yù)后的監(jiān)測(cè)因子時(shí)，TNF-α更傾向于反應(yīng)肝癌患者全身免疫狀態(tài)，而sEC傾向于反應(yīng)肝癌患者肝組織腹腔局部狀態(tài)。

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Study on the Relationship between the Expression of Serum TNF-α and sEC and Invasion and Metastasis of Primary Hepatic Carcinoma

YUAN Lin,SHEN Shi-qiang

(DepartmentofGeneralSurgery,thePeople'sHospitalofLiuzhou,LiuzhouGuangxi545006,China)

ABSTRACT：Objective To investigate the relationship between the expression of serum tumor necrosis factor-alpha (TNF-α) and soluble E-cadherin (sEC) and invasion and metastasis of primary hepatic carcinoma (PHC). Methods The levels of TNF-α，sEC and AFP in serum of 66 PHC patients and 50 healthy controls were tested ELISA，and its relationship with clinical and pathological characteristics were analyzed.Results The levels of TNF-α and sEC in PHC patients before operation were significantly higher than those in controls，which declined significantly one week after operation.The of TNF-α level before operation showed significant correlation with Edmondson grade，TNM staging，tumor size，the carcerous thrombi within the portal vein and the capsule of carcinoma(P<0.05 or P<0.01)，but had no correlation with age and sex of patients or ascites (P>0.05).The of sEC level before operation showed significant correlation with Edmondson grade，TNM staging，ascites，the carcerous thrombi within the portal vein and the capsule of carcinoma (P<0.05 or P<0.01)，but had no correlation with age and sex of patients or the tumor size (P>0.05).Conclusion The expression of TNF-α and sEC involves in the process of invasion and metastasis of PHC.It plays important roles in malignancy of PHC，which may be a predictive factor for prognosis and recurrence of PHC.

KEY WORDS：Tumor necrosis factor-alpha;Soluble E-cadherin；Primary hepatic carcinoma;Invasion;Metastasis

(收稿日期：2016-02-015)

DOI:10.16751/j.cnki.2095-4646.2016.02.0108

中圖分類號(hào)：R735.7

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：2095-4646(2016)02-0108-03

基金項(xiàng)目：廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)生廳計(jì)劃課題(Z2014433)；柳州市培養(yǎng)新世紀(jì)學(xué)術(shù)和技術(shù)帶頭人專項(xiàng)資金資助項(xiàng)目