吸收性氧化纖維素止血膠囊的止血作用研究

仲光勇，郭佩利，宋延平，趙林濤

(1.陜西中醫(yī)藥大學，咸陽　712046;2.陜西超群制藥有限公司，西安　710018；3.陜西省中醫(yī)藥研究院藥理室，西安　710003)

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吸收性氧化纖維素止血膠囊的止血作用研究

仲光勇1，3，郭佩利2，宋延平3*，趙林濤3

(1.陜西中醫(yī)藥大學，咸陽712046;2.陜西超群制藥有限公司，西安710018；3.陜西省中醫(yī)藥研究院藥理室，西安710003)

摘要：目的研究吸收性氧化纖維素止血膠囊(XYZJ)的止血作用和止血機制。方法通過小鼠凝血、斷尾止血模型和大鼠血小板聚集實驗，評價本品的止血作用；通過血小板活化實驗研究本品的止血機制。結(jié)果本品各劑量組小鼠體外凝血和外傷出血時間明顯小于對照組(P<0.05，P<0.01)；本品高、中劑量組1～5 min血小板聚集度明顯高于對照組(P<0.05，P<0.01)；本品高、中劑量組顆粒膜蛋白(CD62P)血小板陽性表達率明顯高于對照組(P<0.05，P<0.01)。結(jié)論吸收性氧化纖維素止血膠囊有一定的止血作用，其止血作用可能是縮短凝血時間和增加血小板聚集度，其止血的機制可能是增強血小板活化功能。

關鍵詞：止血膠囊；出血時間；凝血時間；血小板聚集；血小板活化

吸收性氧化纖維素膠囊是由陜西超群制藥有限公司開發(fā)研制的一種新型的止血藥,服用后經(jīng)體內(nèi)生化變化,最終降解為單糖類而被機體吸收,臨床上得到廣泛應用，多用于治療各種原因的出血,并取得較好療效。但其作用效果和作用機制未見報道。出血時間和凝血時間是檢驗止血藥物最常用、最直觀的2個指標，凝血時間測定是觀察中藥對凝血機制、止血機制是否有影響的主要方法[1]。本實驗研究了本品對小鼠的止血作用，對大鼠血小板聚集和血小板活化

的實驗研究，旨在研究其止血作用和止血機制，為臨床應用提供實驗依據(jù)。

1儀器與材料

1.1儀器QX-200全血血小板聚集儀(上海醫(yī)大儀器有限公司)；Epics XL流式細胞儀(Beckman Coulter Inc)。

1.2藥物與試劑吸收性氧化纖維素止血膠囊，由陜西超群制藥有限公司提供，批號20141127；云南白藥，云南白藥集團股份有限公司生產(chǎn)，批準文號：國藥準字Z53020798，批號ZJA1406；二磷酸腺苷二鈉(ADP)，北京高科恒輝技術發(fā)展有限公司生產(chǎn)，批號014313；鹽酸腎上腺素注射液(AD)，天津藥業(yè)集團新鄭股份有限公司生產(chǎn)，批號H41021054。FITC Mouse Anti-Rat CD61，Rabbit lgG(H+l)PE，Rabbit Anti-CD62P/PE，均由賽泰克生物科技有限公司生產(chǎn)。

1.3實驗動物KM小鼠，體質(zhì)量18～22 g，雌雄各半，由西安交通大學醫(yī)學院實驗動物中心提供，合格證號：61001700000410，許可證號：SCXK(陜)2012-003；SD大鼠，體質(zhì)量200～250 g，雌性，由第四軍醫(yī)大學實驗動物中心提供；合格證號：0021656，許可證號：SCXK(軍)2012-0007。

2方法與結(jié)果

2.1凝血時間實驗將60只KM小鼠隨機分為5組，每組12只：空白組；云南白藥0.308 g·kg-1組；吸收性氧化纖維素止血膠囊1.476，0.738和0.369 g·kg-1組。按照體質(zhì)量灌胃藥物，每天1次，連續(xù)2 d，末次給藥后1 h，用眼科彎鑷迅速摘取一側(cè)眼球，即有血流出，在載玻片兩端各滴1滴，血滴直徑約5 mm，立即用秒表計時，從采血開始至挑起血絲為止，所用時間即為凝血時間，2滴血的平均凝血時間為小鼠的凝血時間[2-4]。對小鼠凝血時間的影響，吸收性氧化纖維素止血膠囊高、中、底劑量組凝血時間明顯小于對照組(P<0.05，P<0.01)，結(jié)果見表1。

表1吸收性氧化纖維素止血膠囊對小鼠凝血時間的影響

Tab.1 The effect of medical absorbable hemostcdic fibre capsules on the clotting time in mice

±s，n=12)

注：給藥組與對照組比較*P<0.05,**P<0.01。2.2出血時間實驗將小鼠隨機分為5組，每組10只，

雌雄各半：空白組；云南白藥0.308 g·kg-1組；吸收性氧化纖維素止血膠囊1.476，0.738和0.369 g·kg-1組。分組后稱定體質(zhì)量，按體質(zhì)量灌胃藥物，空白組灌胃等體積純凈水，灌胃體積均為25 mL·kg-1。每天1次,連續(xù)2 d，末次藥后1 h，分別以利剪在距小鼠尾尖0.5 cm處橫斷，待血液自然流出后計時，每隔15 s用濾紙吸去血滴1次,直至血液自然停止(濾紙吸時無血跡)為止，秒表記錄，即為出血時間[5-7]。對小鼠出血時間的影響，吸收性氧化纖維素止血膠囊高、中、低劑量組出血時間明顯低于對照組(P<0.01)，結(jié)果見表2。

表2吸收性氧化纖維素止血膠囊對小鼠出血時間的影響

Tab.2 The effect of medical absorbable hemostcdic fibre capsules on the bleeding time in mice

±s, n=10)

注：給藥組與對照組比較**P<0.01。

2.3ADP誘導全血血小板聚集實驗將50只SD大鼠隨機分為5組，每組10只：空白組；云南白藥0.155 g·kg-1組；吸收性氧化纖維素止血膠囊0.744，0.372和0.186 g·kg-1組。分組后按體質(zhì)量灌胃藥物，每天1次，連續(xù)2 d。末次給藥后1 h，頸總動脈取血0.45 mL，接至已硅化過并預先加過肝素的試管內(nèi)，測定其血小板的聚集程度，以ADP為誘導劑，按照全血血小板聚集儀的操作規(guī)程測定每份血樣1，2，3，4和5 min的聚集程度[2]。

云南白藥組1～5 min血小板聚集程度明顯高于對照組(P<0.05)；吸收性氧化纖維素止血膠囊0.744和0.372 g·kg-1組1～5 min血小板聚集度明顯高于對照組(P<0.05)，結(jié)果見表3。

表3吸收性氧化纖維素止血膠囊對大鼠血小板聚集的影響

Tab.3 The effect of medical absorbable hemostcdic fibre capsules on the platelet aggregation in rats

±s)

注：給藥組與對照組比較*P<0.05，**P<0.01。

2.4AD誘導全血血小板聚集實驗及血小板活化實驗將大鼠隨機分為5組，每組10只：空白組；云南白藥0.155 g·kg-1組；吸收性氧化纖維素止血膠囊0.744，0.372和0.186 g·kg-1組。按體質(zhì)量灌胃藥物，每天1次，連續(xù)2 d。末次給藥后1 h，頸總動脈取血2 mL，接至已硅化過并預先加過肝素的試管內(nèi)，測定其血小板的聚集程度，以AD為誘導劑，按照全血血小板聚集儀的操作規(guī)程測定每份血樣1，2，3,4和5 min的聚集程度；同時用枸櫞酸鈉抗凝血管取血1 mL，流式細胞儀檢測血小板活化功能[8]。云南白藥組、吸收性氧化纖維素止血膠囊0.744和0.372 g·kg-1組1～5 min血小板聚集度明顯高于空白組(P<0.01，P<0.05)，結(jié)果見表4。

表4吸收性氧化纖維素止血膠囊對大鼠血小板聚集的影響

Tab.4 The effect of medical absorbable hemostcdic fibre capsules on the platelet aggregation in rats

±s)

注：給藥組與對照組比較*P<0.05，**P<0.01。

吸收性氧化纖維素止血膠囊0.744和0.372 g·kg-1組顆粒膜蛋白(CD62P)陽性血小板表達率明顯高于對照組(P<0.05，P<0.01)，結(jié)果見表5。

表5吸收性氧化纖維素止血膠囊對大鼠顆粒膜蛋白陽性血小板表達率的影響

Tab.5 The effect of medical absorbable hemostcdic fibre capsules on the rat CD62P positive expression rate of platelet

±s, n=10)

注：XYZJ給藥組與對照組比較*P<0.05，**P<0.01。

3討論

吸收性氧化纖維素止血膠囊對小鼠凝血時間影響實驗表明：吸收性氧化纖維素止血膠囊1.476，0.738和0.369 g·kg-1組小鼠體外凝血時間明顯小于對照組。吸收性氧化纖維素止血膠囊對小鼠外傷出血時間影響實驗表明：吸收性氧化纖維素止血膠囊1.476，0.738和0.369 g·kg-1組小鼠外傷出血時間明顯小于對照組。結(jié)果表明，吸收性氧化纖維素止血膠囊具有明顯促凝血作用，對小鼠外傷出血具有明顯止血作用。

血小板聚集功能：血小板可相互黏著形成血栓堵塞傷口，有利于止血。本實驗采用血小板聚集儀測定血小板聚集功能。當血漿中加入誘導劑(二磷酸腺苷ADP、腎上腺素AD)后，血小板聚集，引起插入樣品的兩電極間電阻增大，血小板聚集程度越高，電阻值越大。吸收性氧化纖維素止血膠囊對ADP、AD誘導的大鼠血小板聚集程度實驗表明：吸收性氧化纖維素止血膠囊0.744和0.372 g·kg-1組1～5 min血小板聚集度明顯高于對照組。

血小板活化功能：當身體受到損害血管破裂時，血小板受刺激后能迅速發(fā)生變形、枯附、釋放、聚集等生理反應，并在纖維蛋白、凝血酶、血細胞等物質(zhì)參與下形成凝血塊而止血，這一過程被稱為血小板活化[9]。血小板活化的標志物為血小板膜糖蛋白的表達，當血小板處于活化狀態(tài)時，顆粒膜蛋白表達明顯增加，但靜息的正常血小板不表達，是血小板活化的晚期標志物。在體外實驗中，顆粒膜蛋白的增加并不會隨著時間的延長而發(fā)生逆轉(zhuǎn)，因此顆粒膜蛋白被業(yè)界認為是血小板活化的“金標準”，其在血小板質(zhì)膜上的表達或其陽性血小板的百分率的增加，被認為是活化血小板的特異性標志物，常用于測定血小板的活化功能。實驗表明，吸收性氧化纖維素止血膠囊0.744和0.372 g·kg-1組顆粒膜蛋白血小板陽性表達率明顯高于對照組。

綜上所述，吸收性氧化纖維素止血膠囊有一定的止血作用，其止血作用可能是縮短出血、凝血時間和增加血小板聚集度，其止血的機制可能是增強血小板活化功能。吸收性氧化纖維素止血膠囊的止血機制還有待一步研究。

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Study on the hemostasis effect of medical absorbable hemostatic fibre capsules

ZHONG Guangyong1,3，GUO Peili2,SONG Yanping3*,ZHAO Lintao3

(1.Shaanxi University of Chinese Medicine，Xianyang 712046，China;2.Shaanxi Chaoqun Pharmaceuticals Company，Xi′an 710018，China；3.Pharmacology Laboratory of Shaanxi Institute of Traditional Chinese Medicine，Xi′an 710003，China)

Abstract:ObjectiveTo study the hemostasis effect and hemostatic mechanism of medical absorbable hemostatic fibre capsules. MethodsThe hemostasis effect was evaluated through mouse blood coagulation, tail hemostasia model and platelet aggregation in rats；and the hemostatic mechanism was studied through platelet activation experiment. ResultsThe time of mice coagulation and bleeding in vitro in different dosages group was significantly less than that in the control group (P<0.05, P<0.01). The concentration of platelet aggregation in the high-and middle-dosage group from 1 to 5 minutes was significantly higher than that in the control group (P<0.05, P<0.01). The platelet positive expression rate of CD62P in the high and middle dosage group was significantly higher than that in the control group (P<0.05，P<0.01). ConclusionThe medical absorbable hemostatic fibre capsules show certain hemostasis effect, and may shorten the coagulation and bleeding time and increase the degree of platelet aggregation, and the hemostatic mechanism may be related to enhancing the platelet activation function.

Key words:hemostasia capsules；bleeding time；clotting time；platelet aggregation；platelet activation

(收稿日期：2015-09-11)

中圖分類號：R285.5

文獻標志碼：

文章編號：1004-2407(2016)03-0274-03

doi:10.3969/j.issn.1004-2407.2016.03.016

*通信作者：宋延平，男，研究員

作者簡介：仲光勇，男，在讀碩士研究生