胎盤生長因子抗體對大鼠子宮內(nèi)膜異位癥模型的治療作用

曾昭智，張錦紅，陸少君

(廣東藥科大學(xué) 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，廣東 廣州 510006)

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胎盤生長因子抗體對大鼠子宮內(nèi)膜異位癥模型的治療作用

曾昭智，張錦紅，陸少君

(廣東藥科大學(xué) 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，廣東 廣州 510006)

摘要:目的 探討胎盤生長因子抗體(anti-PLGF)對大鼠子宮內(nèi)膜異位癥模型的治療作用。方法 自體移植法建立大鼠子宮內(nèi)膜異位癥模型，分別觀察anti-PLGF對大鼠子宮內(nèi)膜異位癥模型異位子宮內(nèi)膜形態(tài)結(jié)構(gòu)、腹腔液血管內(nèi)皮生長因子和白細(xì)胞介素-8的影響。結(jié)果 anti-PLGF 1 mg/kg劑量組能明顯抑制模型大鼠腹腔液中血管內(nèi)皮生長因子水平，并能顯著減小大鼠子宮內(nèi)膜異位組織的體積，與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而腹腔液中白細(xì)胞介素-8水平無明顯變化。結(jié)論 anti-PLGF通過抑制異位內(nèi)膜的血管形成，從而有效抑制異位內(nèi)膜的生長。

關(guān)鍵詞:胎盤生長因子抗體； 子宮內(nèi)膜異位癥； 血管內(nèi)皮生長因子； 白細(xì)胞介素-8

子宮內(nèi)膜異位癥(endometriosis，EMs)是育齡婦女的常見疾病。臨床主要表現(xiàn)有痛經(jīng)、盆腔包塊或觸痛的結(jié)節(jié)、不孕、月經(jīng)不調(diào)等，具有侵襲性、廣泛種植、易復(fù)發(fā)的特性，有類似于惡性腫瘤的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和種植生長的能力，其發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明。有研究發(fā)現(xiàn)子宮內(nèi)膜異位癥患者腹腔液及子宮內(nèi)膜等局部組織中胎盤生長因子(placental growth factor，PLGF)水平明顯升高[1-3]，PLGF是血管內(nèi)皮生長因子(vascular epithelial growth factor，VEGF)家族成員，PLGF與受體結(jié)合后發(fā)揮生物學(xué)作用，可增加VEGF活性及誘導(dǎo)血管生成。白細(xì)胞介素-8(IL-8)細(xì)胞因子同樣具有強(qiáng)生血管活性，能促進(jìn)新生血管的形成，使異位內(nèi)膜基底部毛細(xì)血管的數(shù)量和面積均顯著增多[4]。2007年Fischer等[5]的研究證明，胎盤生長因子抗體(anti-PLGF)可以抑制腫瘤組織的血管生成，而對正常的血管沒有影響。本實(shí)驗(yàn)從抑制血管生成的角度探討anti-PLGF對大鼠子宮內(nèi)膜異位癥模型的治療作用及其機(jī)制。

1材料

1.1藥物與試劑

anti-PLGF(上海瑞齊生物技術(shù)有限公司)；白細(xì)胞介素和血管內(nèi)皮生長因子ELISA檢測試劑盒(上海哈靈生物科技有限公司)；沙利度胺(上海阿拉丁生化科技股份有限公司)；磷酸鹽緩沖液(武漢博士德生物工程有限公司)。

1.2主要儀器

FA2004B電子天平(上海精科天美)；BA310顯微鏡(麥克奧迪實(shí)業(yè)集團(tuán)有限公司)；3K15冷凍離心機(jī)(德國SIGMA)；Infinite 200 pro酶標(biāo)儀(瑞士Tecan)。

1.3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級SD大鼠，雌性，體質(zhì)量180～220 g，南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，生產(chǎn)許可證號SCXK(粵)2011-0015。

2方法

2.1大鼠子宮內(nèi)膜異位癥模型建立

參照文獻(xiàn)[6]，取雌性SD大鼠，體質(zhì)量180～220 g，各鼠以40 mg/kg戊巴比妥腹腔注射麻醉，在大鼠下腹部正中靠左上方做一個(gè)1.5 cm切口，挑出左側(cè)子宮角，結(jié)扎子宮系膜血管，再結(jié)扎需切除的子宮段的兩端，切取一段1.5 cm長的子宮。在無菌的戴克隆氏液中分離子宮內(nèi)膜，然后切取5 mm×5 mm的內(nèi)膜組織片段，將上皮層對著腹壁，縫合于腹壁上。建模后3周，擇動(dòng)情期大鼠，開腹見移植子宮內(nèi)膜體積增大，形成內(nèi)有液體積聚并有血管形成的透明小囊泡，以體積≥20 mm3，內(nèi)膜囊泡可見透明積液為造模成功標(biāo)準(zhǔn)。

2.2分組及給藥

取建模成功40只大鼠，按異位內(nèi)膜體積大小隨機(jī)分為4組，即模型組、沙利度胺陽性藥物組、anti-PLGF高、低劑量組，另取同批正常10只大鼠作為正常對照，各組每天腹腔注射1次，陽性藥物組注射沙利度胺50 mg/kg，anti-PLGF高、低劑量組分別注射anti-PLGF 1 mg/kg、0.5 mg/kg，正常組和模型組注射等體積的生理鹽水，連續(xù)2周。

2.3觀察指標(biāo)

2.3.1大鼠異位內(nèi)膜體積測量除正常對照組外，其余各組動(dòng)物用游標(biāo)卡尺測量異位子宮內(nèi)膜病灶的長、寬和高，并計(jì)算體積(V)，V=長mm×寬mm×高mm。

2.3.2腹腔液中VEGF和IL-8細(xì)胞因子的含量測定末次注射24 h后，乙醚麻醉大鼠，腹腔注射磷酸鹽緩沖液(PBS)5 mL，輕揉腹部，打開腹腔，沿腹壁吸取約5 mL 腹腔液，4 ℃，2 000 r/min離心15 min，取上清液-80 ℃保存?zhèn)溆茫骨灰褐蠽EGF和IL-8細(xì)胞因子含量的測定按照ELISA試劑盒說明書操作。

2.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

3結(jié)果

3.1anti-PLGF對大鼠子宮內(nèi)膜移植物體積和大致形態(tài)的影響

肉眼觀察除正常對照組外，各組大鼠均在右側(cè)腹壁見有異位病灶。模型組大鼠異位內(nèi)膜生長良好，體積明顯增大，呈隆起透亮的小囊狀，內(nèi)部充滿積液，表面血管清晰可見，而給藥組體積明顯較模型組縮小，周圍血管形成沒有模型組豐富。從表1可以看出，與模型組比較，沙利度胺組、anti-PLGF高劑量組動(dòng)物的內(nèi)膜移植物體積明顯變小，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，提示anti-PLGF有抑制子宮內(nèi)膜異位癥大鼠移植物體積的作用。

表1anti-PLGF對大鼠子宮內(nèi)膜移植物體積的影響

組別劑量/(mg·kg-1)給藥前體積/mm3給藥后體積/mm3模型組-88.47±11.4389.86±10.87沙利度胺組5089.51±10.8841.59±3.63*anti-PLGF 高劑量組192.83±9.6652.47±6.52* 低劑量組0.591.12±11.2884.19±7.85

與模型組比較：*P<0.05。

3.2anti-PLGF對子宮內(nèi)膜異位癥大鼠腹腔液中VEGF和IL-8細(xì)胞因子含量的影響

模型組大鼠腹腔液中VEGF和IL-8細(xì)胞因子水平明顯高于正常對照組，而anti-PLGF和沙利度胺治療14 d 后，腹腔液中VEGF水平明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，anti-PLGF對IL-8細(xì)胞因子水平無明顯影響，結(jié)果見表2。

表2anti-PLGF對子宮內(nèi)膜異位癥大鼠腹腔液中VEGF和IL-8細(xì)胞因子含量的影響

組別劑量/(mg·kg-1)w(VEGF)/(ng·kg-1)ρ(IL-8)/(ng·L-1)正常對照組-3.27±0.76*14.22±2.46*模型組18.58±3.2144.00±8.85沙利度胺組507.15±1.24*20.23±5.87*anti-PLGF 高劑量組114.15±1.10*40.39±6.53 低劑量組0.517.25±2.3040.68±7.00

與模型組比較：*P<0.05。

4討論

在子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生發(fā)展過程中，新生血管可以為異位病灶提供充足的氧氣和營養(yǎng)物質(zhì)，因此血管生成是異位病灶種植和增殖的必要條件[7]，相關(guān)研究已證實(shí)，子宮內(nèi)膜異位癥異位病灶及腹腔液中存在多種血管生長因子且水平較正常明顯升高，其中包括VEGF和IL-8細(xì)胞因子，其均能促進(jìn)血管生成。PLGF是VEGF家族成員之一，PLGF與受體結(jié)合后可增加VEGF的活性，促進(jìn)血管生成，PLGF在子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)病過程中有一定作用，anti-PLGF或其受體抗體制劑等抑制血管生成的藥物治療可能會(huì)為子宮內(nèi)膜異位癥的治療開辟一條新的途徑[8]。本實(shí)驗(yàn)用anti-PLGF作為藥物觀察其對子宮內(nèi)膜異位癥大鼠的治療作用，結(jié)果顯示：anti-PLGF和沙利度胺能有效縮小大鼠內(nèi)膜移植物體積，減少異位病灶周圍血管形成，模型組中大鼠腹腔液中VEGF和IL-8細(xì)胞因子水平明顯高于正常對照組，anti-PLGF和沙利度胺治療后能降低子宮內(nèi)膜異位癥大鼠腹腔液中VEGF水平，使異位內(nèi)膜的增殖速度降低，從而減少血管生成，降低血供，抑制異位內(nèi)膜組織的生長。但anti-PLGF對腹腔液中IL-8細(xì)胞因子水平無明顯影響。因此，anti-PLGF通過調(diào)節(jié)VEGF生成，抑制異位內(nèi)膜組織的生長發(fā)育，達(dá)到治療子宮內(nèi)膜異位癥的作用，但其對子宮內(nèi)膜異位癥大鼠組織及血液中VEGF和IL-8細(xì)胞因子水平的影響還不清楚，尚需進(jìn)一步探討。

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(責(zé)任編輯：幸建華)

Effect of anti-placenta growth factor antibody on endometriosis in rats

ZENG Zhaozhi,ZHANG Jinhong,LU Shaojun

(DepartmentofLaboratoryAnimalCenter,GuangdongPharmaceuticalUniversity,Guangzhou510006,China)

Abstract:Objective To explore the effect of anti-placenta growth factor (PLGF) antibody on endometriosis in rats. Methods The endometriosis model was established by autologous transplantation of endometrial tissue in rats. The effect of anti-PLGF antibody on the production of peritoneal VEGF and IL-8 and endometrium morphosis in endometriosis rats were detected. Results Compared with the model group,treatment with anti-PLGF antibody (1 mg/kg) reduced the level of VEGF and the volume of endometriosis tissue in rats (P<0.05). But the level of IL-8 did not show a significant difference in both groups. Conclusion Treatment with anti-PLGF antibody can inhibit the vasifaction and growth of ectopic endometrium in rats.

Key words:anti-placenta growth factor (PLGF) antibody; endometriosis; VEGF; IL-8

DOI:10.16809/j.cnki.1006-8783.2016030201

中圖分類號:R965

文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A

文章編號:1006-8783(2016)02-0228-03

作者簡介：曾昭智(1980—)，男，碩士，高級實(shí)驗(yàn)師，主要從事實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)研究，Email: 2000zzz@163.com。

基金項(xiàng)目：廣東省醫(yī)學(xué)科研基金(B2013191)

收稿日期：2016-03-02

網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間：2016-03-28 15:52網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/44.1413.R.20160328.1552.001.html