全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血清高、低密度脂蛋白膽固醇分析性能驗(yàn)證

孫云芝，唐　歐，許安春

(成都市中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川成都 610072)

?

全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血清高、低密度脂蛋白膽固醇分析性能驗(yàn)證

孫云芝，唐歐，許安春△

(成都市中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川成都 610072)

摘要:目的對(duì)在AU5400全自動(dòng)生化分析儀上檢測(cè)高/低密度脂蛋白膽固醇(H/LDL-C)的分析性能進(jìn)行驗(yàn)證。方法參考《臨床實(shí)驗(yàn)室對(duì)商品定量試劑盒分析性能的驗(yàn)證》及國(guó)內(nèi)外有關(guān)性能評(píng)價(jià)的文件和報(bào)道,結(jié)合臨床工作實(shí)際,對(duì)全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血清H/LDL-C的精密度、正確度、分析測(cè)量范圍和生物參考區(qū)間4項(xiàng)分析性能進(jìn)行驗(yàn)證和評(píng)價(jià)。結(jié)果H/LDL-C測(cè)定在2個(gè)不同濃度水平的重復(fù)標(biāo)準(zhǔn)差和期間標(biāo)準(zhǔn)差都小于廠家規(guī)定的不精密度要求;采用室間質(zhì)評(píng)樣本作為參考物質(zhì),HDL-C的參考物質(zhì)偏移值小于參考物質(zhì)賦值的不確定度，驗(yàn)證廠家聲稱可靠；LDL-C的參考物質(zhì)偏移值大于參考物質(zhì)賦值的不確定度，則將此偏移的驗(yàn)證區(qū)間與參考物質(zhì)的賦值比較，得出參考物質(zhì)賦值在此驗(yàn)證區(qū)間內(nèi)，表明此差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義也認(rèn)可廠家聲稱可靠；HDL-C分析測(cè)量范圍為0.245～2.605 mmol/L,LDL-C的分析測(cè)量范圍為1.04～12.85 mmol/L，略寬于廠家聲明的線性范圍；生物參考區(qū)間驗(yàn)證結(jié)果均在設(shè)定的范圍之內(nèi)。結(jié)論貝克曼庫爾特全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定H/LDL-C的分析性能與廠家聲明基本一致,符合臨床的要求,可以應(yīng)用于臨床。

關(guān)鍵詞:全自動(dòng)生化分析儀；高密度脂蛋白膽固醇；低密度脂蛋白膽固醇；性能驗(yàn)證；精密度；正確度

高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)主要由肝臟合成，由載脂蛋白、磷脂、膽固醇及少量脂肪酸組成，是逆向轉(zhuǎn)運(yùn)的膽固醇酯，可有效降低患動(dòng)脈粥樣硬化及冠狀動(dòng)脈心臟病的危險(xiǎn)[1]。HDL-C降低可作為冠心病的危險(xiǎn)指標(biāo)；血清低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)檢測(cè)作為反映缺血性心血管病發(fā)病危險(xiǎn)的指標(biāo)已在臨床被廣泛應(yīng)用[2]，許多前瞻性研究和臨床試驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)LDL是冠心病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的最主要影響因素[2-3]?！吨袊?guó)成人血脂異常防治指南》明確規(guī)定不同危險(xiǎn)因素存在情況下LDL-C的控制目標(biāo)。目前，H/LDL-C檢測(cè)已經(jīng)廣泛應(yīng)用于臨床。為此，筆者參考《臨床實(shí)驗(yàn)室對(duì)商品定量試劑盒分析性能的驗(yàn)證》及國(guó)內(nèi)外有關(guān)性能評(píng)價(jià)的文件和報(bào)道,結(jié)合臨床工作實(shí)際,對(duì)全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血清H/LDL-C的精密度、正確度、分析測(cè)量范圍和生物參考區(qū)間4項(xiàng)分析性能進(jìn)行驗(yàn)證和評(píng)價(jià)。

1材料與方法

1.1樣本來源選取門診和住院部標(biāo)本，要求空腹至少8 h后采血，3 500 r/min離心10 min，取血清檢測(cè)。

1.2儀器與試劑檢測(cè)儀器為貝克曼-庫爾特AU5400全自動(dòng)生化分析儀。試劑包括，(1)北京中生北控HDL-C檢測(cè)試劑；(2)北京中生北控HDL-C檢測(cè)試劑；(3)北京中生北控配套校準(zhǔn)品；(4)RANDOX質(zhì)控血清水平2、水平3。

1.3方法

1.3.1精密度驗(yàn)證精密度驗(yàn)證進(jìn)行5天，每天一個(gè)批次,每個(gè)批次選取高、低兩個(gè)濃度水平的混合血清進(jìn)行測(cè)量。每個(gè)批次測(cè)量前按照廠家要求進(jìn)行校準(zhǔn)，測(cè)量前后均進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控標(biāo)本測(cè)量，如出現(xiàn)室內(nèi)質(zhì)控失控，則舍去此批數(shù)據(jù)，另加一個(gè)批次。每個(gè)批次對(duì)各濃度樣本分別重復(fù)測(cè)量3次。按照公式[4]分別計(jì)算重復(fù)標(biāo)準(zhǔn)差(Sr)，期間標(biāo)準(zhǔn)差(S1)，廠家聲稱值σr和σ1，并判斷是否小于廠家規(guī)定的性能標(biāo)準(zhǔn)。

1.3.3分析測(cè)量范圍驗(yàn)證按照參考文獻(xiàn)[5-7]，在廠家聲稱的線性范圍內(nèi)選取5～7個(gè)濃度樣本，盡量覆蓋整個(gè)線性范圍。準(zhǔn)備高、低值濃度樣本，分別命名樣本6(H)和樣本1(L)，按照5L、4L+1H、3L+2H、2L+3H、1L+4H、5H關(guān)系配置，形成系列濃度梯度。測(cè)量前按照廠家要求進(jìn)行校準(zhǔn)，測(cè)量前后均進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控標(biāo)本測(cè)量，如出現(xiàn)室內(nèi)質(zhì)控失控，則舍去此次數(shù)據(jù)，重新測(cè)量。每個(gè)濃度水平至少測(cè)定2次。按照公式計(jì)算線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)r2,若r2>0.995，則表明廠家聲稱的線性測(cè)量范圍是可接受的。

1.3.4生物參考區(qū)間驗(yàn)證參考CLSI C28-A2文件[8]，選取健康體檢者20例，年齡19～80歲，平均42歲。男女各一半。按照標(biāo)準(zhǔn)操作程序進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)并與設(shè)定的參考區(qū)間進(jìn)行比較，若20份標(biāo)本的檢測(cè)結(jié)果均在設(shè)定的參考區(qū)間內(nèi)或不超過2 份標(biāo)本超出，則驗(yàn)證通過。否則，進(jìn)行參考區(qū)間確立實(shí)驗(yàn)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。分析測(cè)量范圍的驗(yàn)證中截距a與0的比較用t檢驗(yàn),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1精密度驗(yàn)證HDL-C和LDL-C的Sr<σr，表明廠家聲稱的重復(fù)精密度可靠，HDL-C和LDL-C的Sl<σl，表明廠家聲稱的期間精密度可靠。見表1。

表1　　H/LDL-C精密度驗(yàn)證結(jié)果

表2　　HDL-C和LDL-C的正確度驗(yàn)證

2.3分析測(cè)量范圍驗(yàn)證以實(shí)測(cè)值為Y軸，預(yù)期值為X軸，將結(jié)果點(diǎn)在Y-X圖上，計(jì)算線性性回歸方程Y=bX+a?？梢缘贸鼍€性回歸方程為Y=0.997 4X+0.008 2，r2=0.999。相關(guān)系數(shù)r2>0.975,直線回歸方程b在0.97～1.03之間，常數(shù)小于±(C1+C6)×0.05/2,數(shù)據(jù)組呈線性關(guān)系。HDL的分析測(cè)量范圍為0.245～2.605 mmol/L，與廠商提供的可報(bào)告范圍基本一致。以實(shí)測(cè)值為Y軸，預(yù)期值為X軸，將結(jié)果點(diǎn)在Y-X圖上，計(jì)算線性性回歸方程Y=bX+a?？梢缘玫骄€性回歸方程為Y=1.004X-0.191 7，r2=0.999 4。r2>0.975，b在0.97～1.03之間，常數(shù)在±(C1+C6)×0.05/2范圍內(nèi),數(shù)據(jù)組呈線性關(guān)系。LDL的分析測(cè)量范圍為1.04～12.85 mmol/L，與廠商提供的可報(bào)告范圍基本一致。見表3、4。

表3　　HDL-C分析測(cè)量范圍驗(yàn)證

表4　　LDL-C分析測(cè)量范圍驗(yàn)證

2.4生物參考區(qū)間驗(yàn)證20份表面健康人血清HDL-C檢測(cè)濃度范圍在1.14～2.16 mmol/L之間，LDL-C檢測(cè)濃度范圍在1.92～3.07 mmol/L之間，均在廠家聲明的生物參考區(qū)間之內(nèi)。

3討論

根據(jù)《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實(shí)驗(yàn)室管理辦法》的要求，臨床實(shí)驗(yàn)室所用的檢驗(yàn)方法、儀器等應(yīng)保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確可靠，臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)所選購的商品定量試劑盒進(jìn)行檢查，以保證所選用的試劑盒達(dá)到臨床實(shí)驗(yàn)室要求的臨床性能、分析性能、經(jīng)濟(jì)性能等各方面的要求。LDL-C檢測(cè)的參考方法是超速離心法，需要特殊的儀器，操作時(shí)間長(zhǎng)，臨床很難開展[9]。HDL-C檢測(cè)的參考方法是超速離心結(jié)合肝素-錳沉淀法[1]。本檢測(cè)系統(tǒng)試劑的檢測(cè)原理是直接法-表面活性劑清除法。本實(shí)驗(yàn)對(duì)貝克曼庫爾特AU5400全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定H/LDL-C的主要分析性能進(jìn)行評(píng)價(jià)，包括不精密度、不準(zhǔn)確度、分析測(cè)量范圍、生物參考區(qū)間來了解該系統(tǒng)的性能。

在本檢測(cè)系統(tǒng)，5個(gè)批次的高、低值混合血清的重復(fù)標(biāo)準(zhǔn)差和期間標(biāo)準(zhǔn)差均小于廠家規(guī)定的分析性能；正確度的驗(yàn)證，可以采用患者樣本與其他檢驗(yàn)方法/試劑盒進(jìn)行正確度驗(yàn)證，也可以采用參考物質(zhì)進(jìn)行。本試驗(yàn)使用的是衛(wèi)生部臨檢中心2015年第一次脂類室間質(zhì)評(píng)第201514號(hào)樣本作為參考物質(zhì)進(jìn)行驗(yàn)證，計(jì)算得出HDL-C的參考物質(zhì)偏移值小于參考物質(zhì)賦值的不確定度，則驗(yàn)證廠家聲稱可靠；LDL-C的參考物質(zhì)偏移值大于參考物質(zhì)賦值的不確定度，則將此偏移的驗(yàn)證區(qū)間與參考物質(zhì)的賦值比較，得出參考物質(zhì)賦值在此驗(yàn)證區(qū)間內(nèi)，表明此差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義也認(rèn)可廠家聲稱可靠。對(duì)于線性測(cè)量范圍的驗(yàn)證，HDL-C檢測(cè)系統(tǒng)的分析測(cè)量范圍為0.245～2.605 mmol/L，略寬于廠家提供的線性范圍0.20～2.59 mmol/L，LDL-C檢測(cè)系統(tǒng)的分析測(cè)量范圍為1.04～12.85 mmol/L，略寬于廠家提供的線性范圍0.30～10.34 mmol/L。20份健康人血清濃度均在設(shè)定的參考區(qū)間范圍內(nèi)，可以認(rèn)為現(xiàn)用參考區(qū)間適用于本實(shí)驗(yàn)室。

綜上，本文參考試劑廠家、CLSI文件以及國(guó)內(nèi)關(guān)于定量檢測(cè)分析系統(tǒng)性能評(píng)價(jià)的相關(guān)報(bào)道，評(píng)價(jià)了在AU5400全自動(dòng)生化分析儀上檢測(cè)H/LDL-C的性能，基本與廠家申明的性能一致，該檢測(cè)系統(tǒng)能夠用于臨床。

參考文獻(xiàn)

[1]尚紅，王毓三，申子瑜.全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程[M].4版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2015：320-326.

[2]Castelli WP，Garrison RJ，Wilson PW，et al．Incidence of coronary heart disease and lipoprotein levels：the Framingham study[J]．JAMA，1986，256(20):2835-2838．

[3]Expert Panel on Detection,Evaluation,and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults.Executive summary of the third report of the national cholesterol education program(NCEP) expert panel on detection,evaluation,And treatment of high blood cholesterol in adults (Adult Treatment Panel Ⅲ)[J]．JAMA，2001，285(19):2486-2497．

[4]中華人民共和國(guó)國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì).WS/T 420-2013 臨床實(shí)驗(yàn)室對(duì)商品定量試劑盒分析性能的驗(yàn)證[S].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2013.

[5]王治國(guó).臨床檢驗(yàn)方法確認(rèn)與性能驗(yàn)證[M].北京:人民衛(wèi)生出版社，2009:153-159.

[6]馮仁豐.臨床檢驗(yàn)質(zhì)量管理技術(shù)基礎(chǔ)[M].2版.上海：上?？茖W(xué)文獻(xiàn)技術(shù)出版社，2008:111-138.

[7]張秀明，莊俊華，鄭松柏，等.臨床化學(xué)發(fā)光免疫法檢測(cè)AFP的分析性能驗(yàn)證與實(shí)驗(yàn)方法[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2007，30(11):1293.

[8]Clinical and Laboratory Standards Institute.C28-A2 How to define and determine reference intervals in the clinical laboratory[S].Wayne,PA,USA:CLSI,2000.

[9]王蓓麗，孫林，潘柏申.低密度脂蛋白膽固醇檢測(cè)方法的研究進(jìn)展[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2013,28(11)：975-980.

(收稿日期：2016-01-12)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.08.044

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1673-4130(2016)08-1117-03

△通訊作者，E-mail：31922465@qq.com。

·臨床研究·