炮制對(duì)三子養(yǎng)親湯多糖溶出的影響

隋利強(qiáng)+呂文海

【摘要】目的：建立三子養(yǎng)親湯中多糖的含量測(cè)定方法，并探討其炮制意義。方法：采用水提醇沉法提取多糖，以硫酸蒽酮法進(jìn)行含量測(cè)定。結(jié)果：線性范圍為3.47～20.82μg，r=0μ9997，平均回收率為100.26%，RSD=1.21%。結(jié)論：建立的分析方法簡(jiǎn)便易行，重復(fù)性好。三子養(yǎng)親湯方中飲片炒制后可增加多糖類(lèi)成分的溶出，加熱過(guò)程中部分多糖結(jié)構(gòu)發(fā)生變化。

【關(guān)鍵詞】三子養(yǎng)親湯；炮制；多糖；硫酸蒽酮法

【中圖分類(lèi)號(hào)】R283.1 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號(hào)】1007-8517（2016）08-0017-03

Abstract：Objective create method to determine the content of polysaccharide in Sanziyangqintang and discuss the significance of processing.Method extract polysaccharide by water extract and alcohol precipitation， determine the content by sulphuric acid-anthroic ketone method.Results The linearity range of is 3.47μg/ml～20.82μg/ml，r=0.9997， average recovery rate is 100.26%， RSD=1.21%. Conclusion：The method is simple and stable. The polysaccharide content of Sanziyangqintang rise after processing， the structure of polysaccharide changed after heating.

Keywords：Sanziyangqintang， processing polysaccharide， sulphuric acid-anthroic ketone method

三子養(yǎng)親湯方源于明代的《韓氏醫(yī)通》，是目前臨床的常用方劑。方由紫蘇子、白芥子、萊菔子組成，臨床用于咳嗽喘逆、痰多胸痞、食少難消，舌苔白膩，脈細(xì)滑等癥[1]以及老年慢性支氣管炎、咳嗽、過(guò)敏性哮喘、小兒喘息性肺炎等[2-5]。方中三味藥的用法是微炒，擊碎，煮作湯飲，歷代臨床多沿用此法。方中的白芥子生用辛散力強(qiáng)，善于通絡(luò)止痛，炒后能緩和辛散走竄之性，避免耗氣傷陰，長(zhǎng)于順氣豁痰。紫蘇子生品多用于腸燥便秘，炒后辛散之性緩和，更宜于風(fēng)寒喘咳。萊菔子生升熟降，生用能升能散，長(zhǎng)于涌吐風(fēng)痰，炒后緩和了涌吐痰涎的副作用，突出了消食除脹、降氣化痰的作用，因此三子養(yǎng)親湯方中飲片臨床應(yīng)用以炒品配方居多。

文獻(xiàn)報(bào)道[6]，白芥子和萊菔子中多糖含量較高，而藥理研究表明，多糖是多種中藥的有效成份之一，具有多種生物活性，是理想的免疫增強(qiáng)劑。研究采用水提醇沉法提取三子養(yǎng)親湯多糖，用硫酸蒽酮法測(cè)定其含量。同時(shí)以生品飲片組方后測(cè)定其多糖的含量，比較探討炮制對(duì)三子養(yǎng)親湯多糖溶出的影響，進(jìn)一步驗(yàn)證該方飲片炮制入藥的合理性。

1儀器和試藥

1.1儀器U-3010紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（日本日立）； FA1004電子天平（上海民橋精密科學(xué)儀器有限公司）。

1.2材料D-無(wú)水葡萄糖對(duì)照品（批號(hào)：110833-200302，中國(guó)藥品生物制品檢定所）。白芥子（批號(hào)：A40904，購(gòu)自湖北）；萊菔子（批號(hào)：20150101，購(gòu)自江西）；紫蘇子（批號(hào)：141030，購(gòu)自江蘇）。炒萊菔子、炒白芥子、炒紫蘇子按2015版《中國(guó)藥典》清炒法進(jìn)行加工炮制。

2方法與結(jié)果

2.1多糖提取液的制備按參考文獻(xiàn) [7-10]，精密稱(chēng)取炒白芥子0.2g，炒紫蘇子0.3g，炒萊菔子0.3g。用石油醚120ml索氏提取至無(wú)色，加80%乙醇100ml，回流提取2次，每次2h，合并濾液，回收乙醇。藥渣揮干溶劑，轉(zhuǎn)移至圓底燒瓶中，加水200ml，回流提取2h，濾過(guò)，加水定容至250ml，作為多糖提取液。

2.2對(duì)照品溶液的制備[11]精密稱(chēng)取105℃干燥至恒重的無(wú)水葡萄糖對(duì)照品34.7mg，置100ml容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液（濃度347μg/ml）。

2.3供試品溶液的制備精密量取吸取供試品溶液lml于試管中，在冰水浴中加入0.2%蒽酮-濃硫酸溶液4ml，置沸水浴中反應(yīng)10min，取出置冰水浴中10 min。在波長(zhǎng)400～800nm 之間進(jìn)行掃描，結(jié)果葡萄糖溶液和樣品提取液在630nm處均有有最大吸收。吸收光譜圖見(jiàn)圖1、2。

2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制精密量取對(duì)照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6ml，加水至1ml，按2.1項(xiàng)下的方法在630nm 處測(cè)定吸光度，以吸光度A 為縱坐標(biāo) ，葡萄糖濃度C（μg/ml） 為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：A=0.03116+0.038125977C，r=0.9997。實(shí)驗(yàn)表明，在3.47～20.82μg范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。標(biāo)準(zhǔn)曲線見(jiàn)圖3。

2.5精密度實(shí)驗(yàn)精密量取對(duì)照品溶液0.4ml，6份，按2.1項(xiàng)下制備方法制備對(duì)照品試液和空白試液，在625nm 波長(zhǎng)處重復(fù)測(cè)量6次，實(shí)驗(yàn)結(jié)果RSD為0.50%（n=6），表明儀器的精密度良好。結(jié)果見(jiàn)表1。

2.6穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)精密量取供試品溶液，分別于0、10、20、30、50、60min內(nèi)測(cè)定，結(jié)果位RSD（%）=1.11，表明供試品溶液在1h內(nèi)基本穩(wěn)定。見(jiàn)表2。

2.7重復(fù)性實(shí)驗(yàn)精密稱(chēng)取同一樣品粉末6份，每份0.8g，按照2.1項(xiàng)下方法操作，計(jì)算多糖含量，結(jié)果見(jiàn)表3。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示RSD=0.81%，表明該方法的重現(xiàn)性良好。

3.8加樣回收率實(shí)驗(yàn)取樣品（已知多糖含量1.36%）粉末0.8g，6份，精密稱(chēng)定，精密加入無(wú)水葡萄糖對(duì)照品0.251mg，按樣品測(cè)定方法制備溶液并測(cè)定吸光度值。按下式通過(guò)換算因子折算多糖的回收率。結(jié)果見(jiàn)表4。

回收率%=實(shí)際測(cè)得多糖量-樣品中含有多糖量加入葡萄量×換算因子×100%

3.9多糖的提取及精制參考萊菔子和白芥子中的多糖的提取方法[3-4]，取三子養(yǎng)親湯樣品50g，分別置索氏提取器中，用20倍石油醚回流提取4h，藥渣揮干溶劑；用20倍乙醚回流提取4h，藥渣揮干溶劑；用20倍80%乙醇回流提取4h，藥渣揮干溶劑，轉(zhuǎn)移至圓底燒瓶中，再以20倍水回流提取4h，提取液濃縮至一半，加入1%活性炭，脫色，濾過(guò)，濾液加入乙醇使含醇量達(dá)80%，靜置過(guò)夜，濾過(guò)，殘?jiān)来斡靡颐选⒈?、無(wú)水乙醇反復(fù)洗滌數(shù)次，得三子養(yǎng)親湯多糖，置硅膠干燥器中干燥備用。

3.10多糖換算因子測(cè)定精密稱(chēng)取三子養(yǎng)親湯粗多糖16mg，加水溶解并定容至50ml。精密量取0.5ml多糖溶液，按2.1項(xiàng)下方法操作，計(jì)算單糖濃度，按下列公式計(jì)算多糖換算因子。結(jié)果見(jiàn)表5，6。

f =W×1000C×D

W為多糖的重量（mg）；C 為溶液中單糖的濃度（μg/ml）；D 為稀釋倍數(shù)

結(jié)果表明，三子養(yǎng)親湯生、炒品配方多糖的換算系數(shù)變化較大，推測(cè)炮制過(guò)程對(duì)三子養(yǎng)親湯多糖的結(jié)構(gòu)有所改變。

3.11樣品測(cè)定取多糖提取液，按標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制方法操作，測(cè)定其吸光度值，按下式計(jì)算多糖含量。結(jié)果見(jiàn)表7、8。

多糖含量=C×D×fW×106×100%

C 為樣品溶液的葡萄糖濃度（μg/mL）；D 為樣品溶液的稀釋倍數(shù)；W 為樣品的重量（g）；f 為換算因子。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，三子養(yǎng)親湯炒品配方多糖含量高出生品配方46.3%，并且兩者的換算系數(shù)差異很大。說(shuō)明炒制過(guò)程對(duì)多糖的溶出影響較大，并且受熱過(guò)程中，部分多糖結(jié)構(gòu)發(fā)生變化。

3討論

實(shí)驗(yàn)以硫酸蒽酮法，對(duì)三子養(yǎng)親湯中多糖含量的測(cè)定方法進(jìn)行了方法學(xué)考察，結(jié)果證明該測(cè)定方法穩(wěn)定、可行。同時(shí)，對(duì)三子養(yǎng)親湯生、炒品配方中的多糖進(jìn)行了含量測(cè)定，結(jié)果表明三子養(yǎng)親湯炒品配方多糖溶出量高出生品配方46.3%，并且兩者的換算系數(shù)差異較大。提示三子養(yǎng)親湯方中飲片炒制后更有利于多糖的溶出，并且飲片炮制過(guò)程中，部分多糖結(jié)構(gòu)發(fā)生變化。但結(jié)果需進(jìn)一步結(jié)合單味藥炮制前后的多糖變化進(jìn)行深入分析。

多糖類(lèi)物質(zhì)具有多種生物活性，是理想的免疫增強(qiáng)劑，它能激活免疫細(xì)胞，提高機(jī)體免疫功能。因此認(rèn)為三子養(yǎng)親湯除了傳統(tǒng)的“祛邪”作用之外，還可能有“扶正”作用，兩者協(xié)同發(fā)揮藥效。歷代醫(yī)家多用炒品飲片配方，除增加其中多糖類(lèi)成分的溶出外，其炮制的內(nèi)在意義尚有待于深入探討。

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（收稿日期：2016.03.01）