HPLC法測定民族藥材蒙古山蘿卜中金絲桃苷的含量△

李甫泉 于 蕾 周雪梅

(1.內(nèi)蒙古自治區(qū)中醫(yī)醫(yī)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010020; 2.內(nèi)蒙古食品藥品檢驗(yàn)所，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010070)

HPLC法測定民族藥材蒙古山蘿卜中金絲桃苷的含量△

李甫泉1于 蕾1周雪梅2

(1.內(nèi)蒙古自治區(qū)中醫(yī)醫(yī)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010020; 2.內(nèi)蒙古食品藥品檢驗(yàn)所，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010070)

目的：建立民族藥材蒙古山蘿卜中金絲桃苷的HPLC測定方法。方法：采用HPLC法測定；流動相為甲醇-水-磷酸-三乙胺溶液(25：30：0.1：0.15)，流速1.0mL·min-1，檢測波長為350nm，柱溫為30℃。結(jié)果：金絲桃苷在0.0058～0.464μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，r=0.9999；平均回收率100.21%，RSD=0.77%(n=6)。不同采集地點(diǎn)的藥材金絲桃苷平均含量為0.68%。結(jié)論：蒙古山蘿卜中金絲桃苷含量高，成分穩(wěn)定，測定方法簡便、可靠，重現(xiàn)性好。

HPLC法；蒙古山蘿卜；金絲桃苷

蒙古山蘿卜Scabiosa comosa Fisch主要含有氯原酸、金絲桃苷等化學(xué)成分。該類成分具有抗氧化、抗炎、抗肝纖維化和免疫調(diào)節(jié)作用。目前有關(guān)蒙古山蘿卜藥材中金絲桃苷含量測定方法未見報(bào)道。本文采用HPLC方法對藥材中金絲桃苷測定方法進(jìn)行研究，為蒙古山蘿卜藥材質(zhì)量分析、評價(jià)與控制提供新的依據(jù)。

1 儀器與試劑

1.1 儀器：1100型高效液相色譜儀 (美國安捷倫公司)，SPD-2A紫外檢測器(島津)，TJ-912型色譜分析平臺(太極計(jì)算機(jī)公司)，IN-180型柱溫箱(上海英泰科技研究所)，SH6150D超生波清洗器(上海昆山)，電子天平(梅特勒)

1.2 試藥：金絲桃苷對照品(111521-200303)由中國藥品生物制品檢定所提供；甲醇為色譜純；其他均為分析純試劑；水為純化水；蒙古山蘿卜與2015年7～8月采自內(nèi)蒙古大青山圣水梁、南天門、蠻汗山。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 色譜條件：Kromasi -C18柱(200mm×4.6mm,5μm)；流動相：甲醇-水-磷酸-三乙胺溶液(25：30：0.1：0.15)；流速：1mL·min-1；溫度：30℃；檢測波長：350nm nm；進(jìn)樣量10μL。在此條件下待測組分可達(dá)到基線分離。樣品中金絲桃苷與其它組分有較好的分離，見圖1。

2.2 對照品溶液的制備：精密稱取金絲桃苷對照品適量，加甲醇制成0.58mg·mL-1的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備：取本品,粉碎，過篩，精密稱定50mg，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇10mL，稱質(zhì)量，超聲處理40min ，放冷，稱重，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液備用，即得。

2.4 線性關(guān)系考察：精密吸取對照品溶液0.1、0.2、0.4、1、2、4、8mL,分別加到10mL量瓶中，加甲醇稀釋到刻度，搖勻，注入高效液相色譜儀，測定峰面積；以峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)(X)做線性回歸, 回歸方程為Y = 2284159X +58465，r=0.9999。結(jié)果表明，金絲桃苷在0.0058～0.464μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.5 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)：取同一份供試品溶液，分別在0，2，4，8，12h進(jìn)樣測定，以金絲桃苷峰面積值計(jì)算RSD為0.31%。結(jié)果表明，供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 精密度實(shí)驗(yàn)：吸取同一批供試品溶液，在上述色譜條件下重復(fù)進(jìn)樣6次，測得金絲桃苷峰面積RSD為0.33%。

2.7 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)：取同批藥材(201111)按2.3項(xiàng)下平行制備6份樣品溶液，并按2.1項(xiàng)下測定，金絲桃苷的平均含量為0.66%， RSD=0.39%。

2.8 加樣回收率實(shí)驗(yàn)：取同批藥材(201111)已知含量的樣品6份，每份取約50mg，精密稱定，分別精密加入金絲桃苷對照品溶液1.0 mL(0.31 mg)，按2.3項(xiàng)下制備樣品溶液，同法操作，測定含量，計(jì)算回收率。金絲桃苷平均回收率為100.21%，RSD為1.21%

3 樣品測定

按2.3 項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按擬定的色譜條件測定蒙古山蘿卜金絲桃苷含量，結(jié)果圣水梁0.66%,南天門0.61% ,蠻汗山0.78%，平均含量0.68%。

4 討論

蒙古山蘿卜是傳統(tǒng)蒙醫(yī)藥治療肝病的藥材[1-2]?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，蒙古山蘿卜抗肝損傷纖維化具有保護(hù)作用[3]，其中氯原酸是主要活性成分。本文研究表明，蒙古山蘿卜富集金絲桃苷成分，這對藥材的質(zhì)量綜合評價(jià)和有效部位的提取具有實(shí)用價(jià)值。

[1]內(nèi)蒙古衛(wèi)生局.內(nèi)蒙古中草藥[M].呼和浩特：內(nèi)蒙古人民出版社,1972﹕158 -159.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)蒙藥分冊[S]. 1998﹕52.

[3]武桂枝，白音夫，常亮. 蒙古山蘿卜酸對免疫性肝炎的保護(hù)及免疫調(diào)節(jié)[J].中國民族醫(yī)藥雜志，2007, 13(4)﹕55-56.

2016年6月29日收稿

國家自然科學(xué)基金(編號：81260659)；內(nèi)蒙古自然科學(xué)基金(編號：2014MS0860)

李普泉，副主任藥師，研究方向:中藥炮制學(xué)。

R291.2

B

1006-6810(2016)11-0055-02