人工結(jié)香沉香質(zhì)量評價(jià)體系的研究

劉肖林　蔡艷芳　何兆錦（廣東省佛山市第一人民醫(yī)院藥學(xué)部中藥房　佛山　528000）

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人工結(jié)香沉香質(zhì)量評價(jià)體系的研究

劉肖林蔡艷芳何兆錦（廣東省佛山市第一人民醫(yī)院藥學(xué)部中藥房佛山528000）

摘要：目的：探討建立人工結(jié)香沉香的質(zhì)量評價(jià)體系及結(jié)香作用機(jī)制的初探。方法：采用“小孔滴注法”真菌誘導(dǎo)結(jié)香的方式，選取不同產(chǎn)地白木香樹，按照2010年《中國藥典》中對沉香藥材性狀描述、顯微鑒別、薄層鑒別、醇溶性浸出物含量方法，建立切實(shí)可行的沉香質(zhì)量評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果：芐基丙酮是沉香樣品中的化學(xué)成分，不同批次人工結(jié)香沉香藥材性狀、顯微特征、薄層色譜與對照藥材相同，醇溶性浸出物含量在12.07%～25.00%之間。結(jié)論：不同批次的人工結(jié)香沉香藥材質(zhì)量符合藥典的規(guī)定，芐基丙酮成為結(jié)香的標(biāo)志進(jìn)行含量測定評價(jià)沉香藥材質(zhì)量具有科學(xué)價(jià)值。

關(guān)鍵詞：沉香人工結(jié)香質(zhì)量評價(jià)芐基丙酮薄層色譜

沉香為瑞香科（Thymelaeaceae）沉香屬（Aquilaria spp.）的部分種以及擬沉香屬（Gyrinops spp.）的部分種，沉香可以通過自然、微生物或者人工方式發(fā)生生物化學(xué)過程，從而形成具有香味的木材[1]。沉香的形成過程稱之為結(jié)香[2]。近幾年來，人們對沉香過度采伐，造成了白木香植物資源的匱乏，白木香植物已經(jīng)列為國家二級保護(hù)野生植物[3]。因此，人們多采用人工結(jié)香的方式如砍傷法、鑿洞法、鉆孔灼燒法、接菌法等促進(jìn)結(jié)香，滿足市場中對于藥材的用藥需求[4]。本文中采用了“小孔滴注法”真菌誘導(dǎo)結(jié)香的方式，建立人工結(jié)香沉香的質(zhì)量評價(jià)體系及結(jié)香的作用機(jī)制初探。

1　儀器及試藥

1.1儀器：顯微鏡（尼康株式會(huì)社，型號(hào)：ECLIP80），顯微成像系統(tǒng)（尼康株式會(huì)社），紫外分析儀器（北京電泳設(shè)備股份有限公司，型號(hào)：JY025），電子分析天平（美國梅特勒，型號(hào)：MTL02），恒溫水浴鍋（北京化工科技有限公司，型號(hào)：HH-6）。

1.2試劑：沉香對照品（中國食品藥品檢定所，批號(hào)：20141223），薄層層析板（北京科技生物公司，批號(hào)：HX041725，10cm× 20cm），香草醛溶液（北京化工科技公司，生產(chǎn)批號(hào)：20131225），鹽酸溶液、乙醚溶液、三氯甲烷溶液，乙醇溶液（北京化工科技公司）均為分析純，水為三蒸水，95%乙醇溶液由乙醇溶液+三蒸水配制而成。分別取經(jīng)“小孔滴注法”真菌誘導(dǎo)法結(jié)香的白木香樹，經(jīng)專業(yè)人士鑒定為白木香，按照2010版《中國藥典》[5]的要求將沉香藥材剖取出，批次根據(jù)沉香結(jié)香的時(shí)間編號(hào)（20120212、20121202、20130526、20131112、20131212），樣品信息見表1。

表1　5批沉香藥材基本資料表

2　質(zhì)量評價(jià)方法與結(jié)果

2.1顯微鑒別：根據(jù)《中國藥典》2010年版第一部中關(guān)于沉香藥材的顯微鑒別要求，對上述5批沉香藥材顯微特征通過顯微鏡進(jìn)行鏡下觀察。各批次藥材觀察到射線、導(dǎo)管以及木間韌皮部等顯微結(jié)構(gòu)[6]。其中導(dǎo)管圓多角形，有的含有棕色的樹脂。韌皮部均扁長橢圓狀或者是條帶狀，射線部分與之相交，細(xì)胞壁較薄，有棕色樹脂。

2.2醇溶性浸出物含量測定：按照《中國藥典》2010年第一部的測定方法，將樣品進(jìn)行粉碎，電子分析天平精密稱取粉末4.0g，置于200mL錐形瓶中，加入95%乙醇溶液100mL后膠塞將錐形瓶口密封后稱重，靜置2h后將回流冷凝管連接，水浴鍋中加熱至沸騰狀態(tài)后保持沸騰1h。以室溫將錐形瓶取出，密塞后再進(jìn)行重量的稱定，繼續(xù)采用95%乙醇溶液將損失后的重量進(jìn)行補(bǔ)齊，搖勻后進(jìn)行過濾，采用移液管精密吸取濾液50mL放置于干燥的蒸發(fā)皿中，水浴鍋上蒸干，置于100℃的恒溫保溫箱中恒溫干燥4h，取出后置于干燥器中冷卻1h，進(jìn)行精密稱定。以干燥品計(jì)算供試品中乙醇浸出物中樣品的含量。

2.3顯色鑒別：取“2.2”項(xiàng)下的各個(gè)不同批次樣品的醇溶性浸出物適量置于蒸發(fā)皿中，蒸發(fā)皿上蓋一塊玻璃片后放置于三腳架上，采用酒精燈進(jìn)行加熱，待蓋玻片上出現(xiàn)油狀物質(zhì)后停止加熱，后加1滴鹽酸溶液及香草醛少量，后滴加2滴乙醇溶液，觀察記錄樣品溶液染色的變化情況。見表2。

表2　沉香醇溶性浸出物的成分含量和顯色反應(yīng)

2.4薄層色譜鑒別：各個(gè)批次的沉香樣品經(jīng)粉碎機(jī)粉碎后過26目篩，按照“2.1”項(xiàng)下的配制方式進(jìn)行提取配制，取各個(gè)批次的浸出液20mL，置于蒸發(fā)皿中水浴上加熱蒸干后，用95%乙醇溶液將殘?jiān)M(jìn)行溶解后，采用移液管吸取2mL浸出物溶液移入5mL容量瓶中，乙醇溶液定容至刻度后搖勻，放置于-20℃冰箱中作為供試品溶液備用。另一方面取沉香對照藥材1.0g，按照同樣的配制方式制成對照品溶液。按照薄層色譜法實(shí)驗(yàn)方法，吸取供試品溶液及對照品溶液各15μL，分別點(diǎn)于同一硅膠薄層色譜板上，以三氯甲烷：乙醚=9∶1作為展開劑進(jìn)行薄層色譜分析，取出后將薄層板晾曬至干燥，置于紫外分析儀器中，于366nm處進(jìn)行觀察，各個(gè)批次的樣品在與對照品藥材色譜相對的位置上均顯示相同顏色的熒光斑點(diǎn)。

3　小結(jié)

沉香藥材雖然與其他常用藥材比較相對名貴，文獻(xiàn)中對于沉香藥材質(zhì)量的評價(jià)方面研究報(bào)道相對滯后，具有分散性缺乏系統(tǒng)的描述。隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展及人們生活水平的不斷提高，臨床上對于沉香的認(rèn)識(shí)及藥用價(jià)值越來越受到重視，藥材的需求量逐年提高。人工結(jié)香沉香的技術(shù)主要通過真菌侵入性誘導(dǎo)有分泌出來，經(jīng)過幾年的沉淀形成沉香，沉淀的時(shí)間越長沉香的品質(zhì)越好，其經(jīng)濟(jì)價(jià)值也越高，因此，采用先進(jìn)的分析技術(shù)建立完善的沉香質(zhì)量評價(jià)體系和標(biāo)準(zhǔn)至關(guān)重要。研究中在分析沉香樣品中發(fā)現(xiàn)芐基丙酮是沉香的化學(xué)成分，在健康的白木香組織中未發(fā)現(xiàn)芐基丙酮，因此選擇芐基丙酮并進(jìn)行含量的測定是評價(jià)人工結(jié)香沉香藥材質(zhì)量的評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)[7]。

另一方面結(jié)香機(jī)制假說的發(fā)展為人工結(jié)香技術(shù)的發(fā)展提供了理論指導(dǎo)，目前對于沉香的結(jié)香作用機(jī)制通過文獻(xiàn)參考可以包括以下幾個(gè)方面：①病理學(xué)假說認(rèn)為沉香的形成與感病狀況有一定的關(guān)聯(lián)性[8]，沉香經(jīng)真菌感染白木香樹而得到，上個(gè)世紀(jì)三十年代國外開展大量接菌結(jié)香的研究，認(rèn)為沉香的形成主要因樹干損傷后由真菌侵入寄生，作用于木薄壁細(xì)胞貯存的淀粉出現(xiàn)一系列變化經(jīng)過常年的沉積得到；②“創(chuàng)傷性”假說表明沉香的形成主要是被開放性的傷口所引起，并不是因特殊的真菌所產(chǎn)生[9]，由一些生理性的阻礙作用，如創(chuàng)傷、昆蟲等聯(lián)合形成而沉積成沉香；③“非病理”假說認(rèn)為物理、化學(xué)性的傷害是沉香形成的主要因素，對植物的木質(zhì)部的傷害可以產(chǎn)生沉香類的物質(zhì)，對于活細(xì)胞的傷害強(qiáng)度越大沉香形成的面積也越大[10]，但是這種原因仍然需要進(jìn)一步研究調(diào)查證實(shí)；④防御反應(yīng)誘導(dǎo)結(jié)香假說認(rèn)為傷害或者真菌侵染均作為激發(fā)子誘導(dǎo)白木香產(chǎn)生防御的反應(yīng)，從而產(chǎn)生了具有抑菌活性的防御性物質(zhì)，抵御外界物理的、化學(xué)的傷害對白木香的深入性損傷[11]。但這些機(jī)制還需要在研究中提供更加充分的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)對假說進(jìn)行數(shù)據(jù)支持，從而為沉香結(jié)香的機(jī)制提供科學(xué)的參考數(shù)據(jù)。

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The preliminary study of artificial knot fragrant incense quality evaluation and edgeworthia mechanism

Abstract：Objective：To establish the system establishment of preliminary study of artificial knot fragrant incense quality evaluation and edgeworthia mechanism. Methods：Hole instillationfungus-induced ddgeworthia way was taken. Aquilaria trees of different places were chosen. Based on the 2010“Chinese Pharmacopoeia”the description of the medicinal properties of incense，microscopic identification，TLC，alcohol extract content method，practical incense quality evaluation criteria were created. Results：Benzyl acetone was the sample of the chemical composition of incense. Different batches of fragrant incense knot artificial medicinal properties，microscopic characteristics，TLC were the same with reference drug. The content of alcohol -soluble extract was between 12.07%～25.00% . Conclusion：The different batches of fragrant incenseknot artificial quality ingredients confirm the formulation of pharmacopoeia. Benzyl acetone knot become the symbol of edgeworthia，and it has scientific value for the determination of quality evaluation of medicinal incense.

Key words：Incense Artificial knot incense Quality evaluation Benzyl acetone TLC

中圖分類號(hào)：R284.1

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B

文章編號(hào)：1672-8351（2016）04-0132-02