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    肝細(xì)胞癌的免疫組化、分子檢測及MRI診斷評價

    2022-10-17 14:26:06符媛媛李可帥張小燕
    實用癌癥雜志 2022年10期
    關(guān)鍵詞:肝細(xì)胞免疫組化陽性率

    符媛媛 李可帥 張小燕

    腫瘤的發(fā)生和發(fā)展與腫瘤新生血管關(guān)系密切[1-2]。充分了解腫瘤的血管生成規(guī)律和解剖結(jié)構(gòu)及功能特點對認(rèn)識腫瘤和提升預(yù)后至關(guān)重要[3-4]。血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、成纖維生長因子( fibroblast growth factors,FGF)能通過受體特異性地發(fā)揮促進(jìn)刺激內(nèi)皮細(xì)胞的分裂和遷移,是促進(jìn)腫瘤增長的重要分子。免疫組化檢查方法在臨床中極為常用,磷脂酰肌醇蛋白多糖-3(glypican-3,GPC-3)和細(xì)胞角蛋白(cytokeratin-19,CK-19)是一種常見促癌因子。檢查分子VEGF、FGF和GPC-3、CK-19在診斷惡性腫瘤中有重要作用。MRI具有檢查安全性高、圖像清晰的特點,能反映組織的血流供給情況,常用于診斷惡性腫瘤。肝細(xì)胞癌是我國臨床常見的惡性腫瘤,最近幾年呈年輕化發(fā)生趨勢[5]。據(jù)數(shù)據(jù)顯示[6],我國肝細(xì)胞癌5年生存率不足5%,治療以手術(shù)聯(lián)合化療為主,但預(yù)后不理想。及早診斷對提升肝細(xì)胞癌預(yù)后有積極意義。本文使用免疫組化、分子檢測及MRI診斷肝細(xì)胞癌,現(xiàn)報告如下。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料

    選擇醫(yī)院2018年1月至2021年1月診治的肝細(xì)胞癌患者160例作為研究對象,將其納入病例組。男性102例,女性58例;年齡最小37歲,最大79歲,平均(52.47±3.43)歲;病程最短1年,最長6年,平均(3.08±0.24)年;臨床分期(TNM):Ⅰ~Ⅱ期104例,Ⅲ~Ⅳ期56例。臨床癥狀:乏力102例、納差84例、消瘦115例、腹痛42例。納入標(biāo)準(zhǔn):①符合世界衛(wèi)生組織制定的肝癌診斷標(biāo)準(zhǔn);②病理確診;③未接受治療的患者;④知情同意,自愿參加。排除標(biāo)準(zhǔn):①合并其他惡性腫瘤患者;②妊娠期、哺乳期患者;③合并嚴(yán)重性基礎(chǔ)疾病患者;④精神疾病患者。另選擇同期體檢疑似肝細(xì)胞癌患者160例,將其納入對照組,男性107例,女性53例;年齡最小37歲,最大80歲,平均年齡(52.41±3.43)歲。

    1.2 方法

    1.2.1 免疫組化檢查GPC-3、CK-19 細(xì)針抽取肝癌組織,將標(biāo)本送實驗室檢查。先使用10%的甲醛固定標(biāo)本,并將腫瘤組織脫水、透明、浸蠟和包埋處理。將肝組織連續(xù)切片(4 μm),使用蘇木精染色。采用EnVision 2步法檢查GPC-3、CK-19。具體步驟:將切片經(jīng)烤片、脫蠟等處理,使用PBS緩沖液洗滌3遍,每次5 min。置入6.0檸檬酸緩沖液中進(jìn)行修復(fù),高溫加熱2 min,中火2 min等處理,再次使用PBS緩沖液處理,加入GPC-3一抗(鼠抗人單克隆抗體),4℃冰箱過夜,PBS緩沖液浸3 遍,每遍5 min,加二抗PV6000,溫度37 ℃ 時間為10 min,PBS緩沖液浸3遍,DAB顯色,PBS液終止染色。乙醇脫水后使用二甲苯封片。CK-19免疫組化步驟同于GPC-3。試劑盒均購于北京生物有限公司。

    染色結(jié)果判斷以黃色或棕黃色為陽性標(biāo)準(zhǔn),按照染色程度分為強(qiáng)陽性(+++)為細(xì)胞陽性率>60%、中等陽性(++)為細(xì)胞陽性率31%~60%、弱陽性(+)為細(xì)胞陽性率10%~30%,陰性(-)為細(xì)胞陽性率在30%及以下。

    1.2.2 分子VEGF、FGF檢查 抽取2組肘靜脈血3 ml,離心處理后留下血清,使用酶聯(lián)免疫吸附法檢測VEGF、FGF水平。

    1.2.3 MRI診斷 使用西門子3.0T,采用相關(guān)配套組織的體部相控陣列線圈和腹部相控陣列線圈,層厚為5 mm,層間隔1 mm,梯度場強(qiáng)度為45 Mt/m。常規(guī)檢查后,注射對比劑,開啟增強(qiáng)掃描,在動脈期、靜脈期及延遲期從膈頂?shù)接夷I下極進(jìn)行掃描檢查。圖像判斷由2名專業(yè)醫(yī)生進(jìn)行。肝癌診斷標(biāo)準(zhǔn):腫瘤組織可呈低信號、高信號和等信號;在自旋回波長、多回波圖像上、絕大多數(shù)的肝癌呈不均勻的高信號區(qū),并隨回波時間延長信號強(qiáng)度衰減,信號變得更為不均勻,邊界模糊不清且不規(guī)則。平掃在T1加權(quán)成像相對肝實質(zhì)為低信號,T2為高信號,隨回波時間延長,T2權(quán)重加大,信號衰減。病灶附近血管和鄰近器官受損,出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。

    1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

    2 結(jié)果

    2.1 2組GPC-3、CK-19陰性表達(dá)情況比較

    病例組GPC-3陽性率為71.86%、CK-19陽性率為66.25%,均高于對照組(P<0.05),見表1。

    表1 2組免疫組化GPC-3、CK-19檢查結(jié)果比較(例,%)

    2.2 2組VEGF、FGF水平比較

    病例組患者分子VEGF水平為(441.58±13.02)pg/ml、FGF水平為(0.69±0.06)ng/ml,均高于對照組(P<0.05),見表2。

    表2 2組VEGF、FGF水平比較

    2.3 病例組不同分期患者GPC-3、CK-19陽性率比較

    臨床Ⅲ~Ⅳ期患者GPC-3、CK-19陽性率均高于Ⅰ~Ⅱ期患者(P<0.05),見表3。

    表3 病例組不同分期患者GPC-3、CK-19比較(例,%)

    2.4 病例組患者分子VEGF、FGF水平比較

    Ⅲ~Ⅳ期患者分子VEGF、FGF,高于Ⅰ~Ⅱ期患者(P<0.05),見表4。

    表4 不同分期患者分子VEGF、FGF水平比較

    2.5 2組患者M(jìn)RI診斷陽性結(jié)果比較

    病例組患者M(jìn)RI檢出率和陽性率均高于對照組(P<0.05)。病例組中Ⅰ~Ⅱ期、Ⅲ~Ⅳ期MRI診斷陽性率差異比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),見表5。

    表5 組患者M(jìn)RI診斷陽性結(jié)果比較(例,%)

    2.6 免疫組化GPC-3、CK-19、分子VEGF、FGF檢測及MRI診斷價值分析

    AUC的面積又反映了各個指標(biāo)預(yù)測結(jié)果的準(zhǔn)確性,五項聯(lián)合診斷鑒別效能最高(P<0.05),見表6、圖1。

    表6 免疫組化GPC-3、CK-19、分子VEGF、FGF檢測及MRI診斷價值分析

    圖1 免疫組化GPC-3、CK-19、分子VEGF、FGF檢測及MRI診斷價值ROC曲線

    3 討論

    肝細(xì)胞癌病死率、轉(zhuǎn)移率和復(fù)發(fā)率較高[7-8]。免疫組化在診斷肝癌中起到重要作用[9-10]。GPC-3 和CK-19是一種血清學(xué)和組織學(xué)上的肝癌標(biāo)志物,在良性肝疾病中有少量表達(dá),在肝癌中高表達(dá)。GPC-3 和CK-19能影響組織中血管抑制蛋白的基因表達(dá),提高血管內(nèi)皮生長因子的活性,進(jìn)一步促使新生血管形成。既往研究結(jié)果顯示[11],CK-19表達(dá)與惡性腫瘤形成和侵襲有關(guān),但關(guān)于此蛋白與肝細(xì)胞癌的研究尚處于探索中。GPC-3主要于肝癌細(xì)胞膜上或細(xì)胞間質(zhì)中進(jìn)行著色,通常可以觀察到的肝細(xì)胞膜和細(xì)胞間質(zhì)中均有顯色[12-13],單一顯色較少見。本文研究結(jié)果顯示,病例組患者GPC-3 和CK-19陽性表達(dá)率明顯升高,且高于疑似肝細(xì)胞癌患者。不同肝細(xì)胞癌臨床分期患者中Ⅲ~Ⅳ期GPC-3 和CK-19陽性表達(dá)率高于Ⅰ~Ⅱ期。分析原因是GPC-3 和CK-19蛋白能激活wnt信號途徑,阻斷內(nèi)源性拮抗因子骨形態(tài)發(fā)生蛋白7信號途徑,調(diào)節(jié)胰島素生長因子轉(zhuǎn)化,促使肝細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化,并增加新生血管生成能力,促使肝癌細(xì)胞發(fā)生和發(fā)展。

    分子學(xué)檢查方法較多,其中酶聯(lián)免疫吸附法較常見。血清VEGF、FGF因子在促進(jìn)腫瘤血管生成上有重要作用。VEGF能促進(jìn)新生血管形成,在肝細(xì)胞癌中高表達(dá)。VEGF在癌細(xì)胞生長和轉(zhuǎn)移中具有較重要的意義[14-15]。既往研究發(fā)現(xiàn)[16],VEGF是最有效的促進(jìn)血管生長因子,主要作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞,其表達(dá)水平與微血管密度和惡性程度呈正相關(guān)。FGF是一種重要的促血管生成因子,其生物學(xué)作用較廣泛,在血管形成和促進(jìn)創(chuàng)傷痊愈中有重要作用。有研究發(fā)現(xiàn)[17],F(xiàn)GF在促使神經(jīng)組織生長和發(fā)展中具有積極的促進(jìn)作用。FGF能夠在腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞分裂和增殖中起到促進(jìn)作用,且在肝癌患者血清中高表達(dá)[18]。本研究結(jié)果顯示,病例組患者血清VEGF、FGF水平高表達(dá),且在臨床分期Ⅲ~Ⅳ期患者中表達(dá)最高。以上結(jié)果說明血清VEGF、FGF分子參與肝細(xì)胞癌發(fā)生和發(fā)展。

    MRI現(xiàn)已廣泛用于檢查惡性腫瘤。MRI是多方位和多序列掃描,不僅能提升軟組織的分辨率,還能根據(jù)不同序列對病灶成分進(jìn)行顯示,可以將腫瘤病灶與正常組織進(jìn)行準(zhǔn)確區(qū)別,對鑒別腫瘤良惡性、判斷腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移有重要作用。本研究結(jié)果顯示,MRI能較準(zhǔn)確診斷肝細(xì)胞癌,在診斷肝細(xì)胞癌臨床分期上陽性率相同。以上結(jié)果證實,MRI在診斷肝細(xì)胞癌上有較好的價值,并能準(zhǔn)確判斷肝細(xì)胞癌臨床分期。分析其診斷價值可知,免疫組化GPC-3、CK-19、分子VEGF、FGF檢測及MRI聯(lián)合診斷肝細(xì)胞癌價值最高。一是組織細(xì)胞和血清學(xué)檢查能相互彌補(bǔ)不足,二是聯(lián)合MRI可從影像學(xué)上直觀顯示腫瘤形態(tài),故而聯(lián)合診斷能提升診斷價值。

    綜上所述,肝細(xì)胞癌患者GPC-3、CK-19、 VEGF、FGF高表達(dá),聯(lián)合MRI診斷能提升對肝細(xì)胞癌的診斷價值,建議使用。

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