5種中藥制劑殺滅幽門(mén)螺桿菌的實(shí)驗(yàn)研究

楊春賓

摘要：目的 研究5種中藥制劑殺滅幽門(mén)螺桿菌的效果。方法 選擇2014年5月～2015年5月我院保存的新鮮活檢胃黏膜標(biāo)本作為實(shí)驗(yàn)材料，培養(yǎng)幽門(mén)螺桿菌群，制作細(xì)菌懸液，制備40、50、55mg/ml的黃連、黃芪健中湯、逍遙湯、枳實(shí)、紫草中藥制劑，記錄菌群存活情況和中藥的滅菌率。結(jié)果 一定濃度的黃連、黃芪健中湯和枳實(shí)可有效滅殺幽門(mén)螺桿菌，可將幽門(mén)螺桿菌的菌落數(shù)從107CFU/ml降至106CFU/ml，黃連該濃度在在40～50mg/ml之間，黃芪健中湯和枳實(shí)的該濃度在50～55mg/ml之間，逍遙湯和紫草的滅菌效果隨著中藥制劑的濃度增大而增強(qiáng)；黃連的殺菌作用最理想，50～55mg/ml黃連滅殺幽門(mén)螺桿菌的殺菌率達(dá)99.00%，而枳實(shí)、黃芪健中湯的殺菌功效次之。結(jié)論 黃連的殺菌作用最強(qiáng)，其次為枳實(shí)、黃芪健中湯、紫草、逍遙湯。

關(guān)鍵詞：中藥；幽門(mén)螺桿菌；實(shí)驗(yàn)

幽門(mén)螺桿菌感染的引發(fā)多種胃腸道疾病的重要原因[1]。目前，臨床上通常應(yīng)用多種抗生素的方法治療幽門(mén)螺桿菌感染，但是這種聯(lián)合方式增強(qiáng)了藥物的副作用，且耐藥菌株的發(fā)生率逐漸增大[2]。本次選擇2014年5月～2015年5月我院保存的新鮮活檢胃黏膜標(biāo)本作為實(shí)驗(yàn)材料，取得了一定的成果，其詳情如下。

1 試驗(yàn)材料

1.1中藥材料 選擇本院中藥制劑黃連、黃芪健中湯、逍遙湯、枳實(shí)、紫草進(jìn)行試驗(yàn)，妥善保存中藥。

1.2布氏肉湯血瓊脂培養(yǎng)基 15g瓊脂、0.1g重亞硫酸鈉、5g氯化鈉、2g酵母粉、10g葡萄糖、10g胰蛋白胨、1000ml蒸餾水、8%～10%羊血液、1%抗生素混合液混合，控制培養(yǎng)基pH值為7.2。

1.3西紅柿汁培養(yǎng)基 取新鮮西紅柿，剝皮搗碎，用紗布擠壓西紅柿得濾汁。取1g葡萄糖、10g蛋白胨、5g氯化鈉、3g牛肉膏、400ml西紅柿汁、1000ml蒸餾水混合，攪拌均勻，加入瓊脂18.0/L，攪勻，在121℃的條件下滅菌，持續(xù)20min。冷卻至50℃后，加入15μg頭孢菌素、250單位多粘菌素B、10μg萬(wàn)古霉素、5μgTMP、1～2滴乳酸混合。

1.4菌株 在西紅柿培養(yǎng)基雙碟上涂抹胃黏膜組織，放于微需氧環(huán)境下，控制環(huán)境保持37℃溫度、5%～8%O2、5%～8%CO2、33.6%H2，培養(yǎng)2d后，對(duì)菌群、菌體的形態(tài)、生化反應(yīng)進(jìn)行觀察，采用快速尿素酶試驗(yàn)方法對(duì)菌體進(jìn)行試驗(yàn)，確認(rèn)其為幽門(mén)螺桿菌。取該幽門(mén)螺桿菌置入布氏肉湯中，保持微需氧環(huán)境，培養(yǎng)2d后取出。

1.5方法 布氏肉湯血瓊脂培養(yǎng)基去除瓊脂即為液體培養(yǎng)基，將5種中藥制劑放入到液體培養(yǎng)基中，將中藥濃度調(diào)至40、50、55mg/ml。取細(xì)菌置于液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)12～18h，制成細(xì)菌懸液，保證懸液濃度為1×108CFU/ml。將1ml細(xì)菌懸液分別加入不同濃度不同中藥制劑液中，并設(shè)置無(wú)中藥的對(duì)照管，均培養(yǎng)1d，培養(yǎng)環(huán)境為36℃微需氧環(huán)境。之后，在布氏肉湯血瓊脂培養(yǎng)基平板上涂抹試管中的待檢物，繼續(xù)培養(yǎng)3d，對(duì)存活菌落數(shù)進(jìn)行計(jì)量。對(duì)照管菌落數(shù)位起始菌落數(shù)，殺菌率=100%×（起始均數(shù)-存活菌數(shù)）/起始菌數(shù)。

2 結(jié)果

一定濃度的黃連、黃芪健中湯和枳實(shí)可有效滅殺幽門(mén)螺桿菌，可將幽門(mén)螺桿菌的菌落數(shù)從107CFU/ml降至106CFU/ml，黃連該濃度在在40～50mg/ml之間，黃芪健中湯和枳實(shí)的該濃度在50～55mg/ml之間，逍遙湯和紫草的滅菌效果隨著中藥制劑的濃度增大而增強(qiáng)，見(jiàn)表1。黃連的殺菌作用最理想，50～55mg/ml黃連滅殺幽門(mén)螺桿菌的殺菌率達(dá)99.00%，而枳實(shí)、黃芪健中湯的殺菌功效次之，見(jiàn)表2。

3 討論

胃癌、消化道潰瘍、慢性胃炎等均與幽門(mén)螺桿菌有密切關(guān)系[3]。目前，專(zhuān)家已經(jīng)從分子、基因水平來(lái)開(kāi)展幽門(mén)螺桿菌的致病機(jī)制[4]。臨床上經(jīng)歷了單一抗菌藥、2種抗菌藥、三重治療的幽門(mén)螺桿菌的治療過(guò)程，其中，三重治療的效果最顯著，其根除率可達(dá)90.00%[5]。但是，化學(xué)合成藥物的毒副作用限制了藥物的治療效果，且治療費(fèi)用較高，推廣應(yīng)用難度較大。因此，關(guān)于中藥制劑滅殺幽門(mén)螺桿菌的研究也逐漸受到關(guān)注。

本次研究中，一定濃度的黃連、黃芪健中湯和枳實(shí)可有效滅殺幽門(mén)螺桿菌，可將幽門(mén)螺桿菌的菌落數(shù)從107CFU/ml降至106CFU/ml，逍遙湯和紫草的滅菌效果隨著中藥制劑的濃度增大而增強(qiáng)。可見(jiàn)，這5種中藥制劑均具有一定的滅殺幽門(mén)螺桿菌的功效。本次研究中，黃連的殺菌作用最理想，50～55mg/ml黃連滅殺幽門(mén)螺桿菌的殺菌率達(dá)99.00%，而枳實(shí)、黃芪健中湯的殺菌功效次之。小檗堿是黃連發(fā)揮抑菌功效的主要成分，純小檗堿與黃連粗提取物的抑菌效果基本相同，但是其具體抑菌機(jī)制仍有待進(jìn)一步研究。通常認(rèn)為小檗堿可以對(duì)細(xì)菌的增殖和呼吸產(chǎn)生抑制作用，使細(xì)菌體內(nèi)的糖代謝過(guò)程受到干擾，影響其脫氧反應(yīng)的正常進(jìn)行，從而達(dá)到滅菌的目的。總上所述，黃連的殺菌作用最強(qiáng)，其次為枳實(shí)、黃芪健中湯。

參考文獻(xiàn)：

[1]曹鵬飛.英連金化濁解毒方治療慢性萎縮性胃炎的臨床與實(shí)驗(yàn)研究[D].河北醫(yī)科大學(xué)，2011.

[2]王彥.Hp相關(guān)性慢性胃炎證素研究及中醫(yī)藥治療的療效評(píng)價(jià)研究[D].北京中醫(yī)藥大學(xué)，2013.

[3]張麗穎.中藥聯(lián)合標(biāo)準(zhǔn)三聯(lián)療法提高幽門(mén)螺桿菌根除率的臨床療效評(píng)價(jià)研究[D].中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院，2013.

[4]黃衍強(qiáng)，黃干榮，李曉華，等.中藥提取物對(duì)耐藥幽門(mén)螺桿菌生物膜形成的影響[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2013，12（11）：1407-1409.

[5]榮茜，胡德兵，李英倫.中藥抑制幽門(mén)螺桿菌及其作用機(jī)制的研究進(jìn)展[J].中成藥，2015，20（08）：1795-1799. 編輯/哈濤