面包中丙酸鈣的測定液相色譜條件優(yōu)化

王麗珊　何土芬　黃漢中

丙酸鈣是一種新型食品添加劑，是聯(lián)合國糧農(nóng)組織和世界衛(wèi)生組織批準(zhǔn)使用的可靠安全的食品和飼料用防霉劑。對菌革蘭氏陰性菌、黃曲霉素、細菌及霉菌等具有廣泛的抗菌作用，丙酸鈣可用作食品及飼料的防霉劑，用于面包及糕點的保存劑。丙酸鈣易于與面粉混合均勻，在作為保鮮防腐劑的同時又能提供人體必需的鈣質(zhì)，起到強化食品的作用。根據(jù)GB2760-2010《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》規(guī)定，丙酸鈣允許用于生濕面制品，豆類制品，醋，醬油，面包，糕點飲料等食品中。本文意在研究面包中丙酸鈣的檢測方法。

食品中丙酸鈣常用的檢測方法有氣相色譜法，高效液相色譜法。目前氣相色譜法檢測丙酸最為常見，由于氣相色譜法前處理較繁瑣，實驗成本較高，而GB/T23382-2009《高效液相色譜法測定面包中的丙酸鈣》前處理簡便，以超純水作為溶劑，無毒，低成本，但該方法得出的效果不佳，回收率78%～83%，本研究著重對色譜檢測條件進行優(yōu)化改良，提高了檢測的分離度及回收率，能滿足實驗室中大批量樣品檢測。

由于丙酸鈣微溶于有機試劑，易溶于水，所以選用超純水作提取溶劑。使用超聲提取能使分子運動加劇，提取效果更徹底。水作提取劑時加入磷酸溶液，可使丙酸鈣酸化成丙酸而被檢測。

材料及方法

設(shè)備與試劑。設(shè)備：DIONEX P680戴安高效液相色譜儀（配有紫外監(jiān)測器）；超聲波水浴SY-1030F；超純水器M-illi-Q System；電子天平；離心機CT14RD；攪拌器飛利浦HR1608；具塞50ml比色管；Ph試紙；0.45μm微孔濾膜。

試劑：甲醇（色譜純）；磷酸磷酸氫二銨（分析純）配備1.5g/磷酸氫二銨溶液，用1mol/L磷酸溶液調(diào)ph2.7-3.5（現(xiàn)配現(xiàn)用），經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾；丙酸鈣標(biāo)準(zhǔn)品（99.0%）1.1.3標(biāo)準(zhǔn)儲備液（10mg/ml）

樣品選用方法

樣品處理。直接浸提法：把方包搗碎攪拌均勻，準(zhǔn)確稱取5g（準(zhǔn)確至0.01 g）至50ml具塞比色管加入20ml水，加入1mol/L磷酸溶液0.5ml，混勻，經(jīng)超聲浸提30min后，用1mol/L磷酸溶液調(diào)ph至3左右，用水定容至刻度，搖勻。全部轉(zhuǎn)移至50ml具塞塑料離心管中，以轉(zhuǎn)速4500r/min離心5min，取上清液，經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾，待測。

色譜條件。流動相的確定：加標(biāo)：往稱好的試樣]組（A1，A2，A3），2組（A4，A5，A6）中分別準(zhǔn)確加入丙酸標(biāo)準(zhǔn)溶液（10mg/ml）1.00ml，即加標(biāo)量為0.5mg/ml，樣品空白A7，A8，按上述方法一并處理待測。

1組相色譜條件：C18柱（安捷倫AICHROMBondC18 150mm*4.6mm/5μm）；流動相1.5g/L磷酸氫二銨溶液：甲醇（90：10）等度洗脫；紫外檢測波長214nm；流速1.0ml/min；柱溫30℃；進樣量20μl。

2組相色譜條件：C18柱；流動相1.5g/L磷酸氫二銨100%平衡1min，1-4.1min甲醇上升至10%，磷酸氫二銨降至90%，4.1-5min甲醇10%，磷酸氫二銨90%等度，5-7min磷酸氫二銨上升至1 00%，平衡4min；紫外檢測波長214nm；流速1.0ml/min柱溫：30℃；進樣量20μl。

結(jié)果與分析

本結(jié)果表明梯度洗脫的組2丙酸回收率明顯高于等度的組1，峰形堅銳，對稱性好，出峰時間在9.107。

樣品浸提時加入磷酸溶液使樣品中丙酸鈣轉(zhuǎn)化成丙酸便于提?。磺捌趯嶒灡砻髁魉贋?.0ml/min校準(zhǔn)曲線相關(guān)性，分離效果最為理想，故本實驗選用該流速作進一步研究；相對氣相色譜法，液相色譜法前處理更為簡便，無毒，節(jié)約實驗成本，且經(jīng)實驗優(yōu)化色譜條件后回收率高而穩(wěn)定，在工作有較強的可操作性及實用性。