miRNA—181a及其靶基因共濟(jì)失調(diào)—毛細(xì)血管擴(kuò)張突變基因在胃癌組織中的表達(dá)研究

鄧若愚 聶玉強(qiáng) 張向陽 朱玲麗

【摘要】[目的]：分析miRNA-181a及其靶基因共濟(jì)失調(diào)-毛細(xì)血管擴(kuò)張突變基因在胃癌組織中的表達(dá)結(jié)果。[方法]：選取我院2014年～2015年收治的外科手術(shù)切除胃癌組織標(biāo)本10例作為研究對(duì)象，設(shè)為實(shí)驗(yàn)組；同時(shí)選取癌旁肺癌組織10例作為對(duì)照組。分析胃癌組織中miRNA-18la和靶基因共濟(jì)失調(diào)-毛細(xì)血管擴(kuò)張突變基因蛋白表達(dá)的相關(guān)性。提取蛋白質(zhì)和總RNA，采取熒光定量PCR檢驗(yàn)標(biāo)本中的miRNA-18la，采用Western blot檢驗(yàn)靶基因共濟(jì)失調(diào)-毛細(xì)血管擴(kuò)張突變基因蛋白。對(duì)比兩組患者miRNA-18la和靶基因共濟(jì)失調(diào)-毛細(xì)血管擴(kuò)張突變基因蛋白的表達(dá)量。[結(jié)果]：miRNA-18la在實(shí)驗(yàn)組中的表達(dá)量為（1.998±1.912），在對(duì)照組中的表達(dá)量為（0.493±和0.098），實(shí)驗(yàn)組中的靶基因共濟(jì)失調(diào)-毛細(xì)血管擴(kuò)張突變基因蛋白表達(dá)量為（0.2565±0.00876），在對(duì)照組中的表達(dá)量為（0.5535±0.0453），兩組患者在miRNA-18la和靶基因共濟(jì)失調(diào)-毛細(xì)血管擴(kuò)張突變基因蛋白的表達(dá)量具有明顯差異，P〈0.05表示統(tǒng)計(jì)學(xué)有意義。miRNA-18la和靶基因共濟(jì)失調(diào)-毛細(xì)血管擴(kuò)張突變基因蛋白的表達(dá)呈現(xiàn)正相關(guān)聯(lián)系。[結(jié)論]：miRNA-18la在實(shí)驗(yàn)組中明顯升高，靶基因共濟(jì)失調(diào)-毛細(xì)血管擴(kuò)張突變基因蛋白在實(shí)驗(yàn)組中表達(dá)量明顯降低，影響原因大概是基因沉默機(jī)制miRNA-18la降低了靶基因共濟(jì)失調(diào)-毛細(xì)血管擴(kuò)張突變基因蛋白的表達(dá)量，在胃癌疾病發(fā)生發(fā)展中起到了促進(jìn)作用。

【關(guān)鍵詞】miRNA-18la；靶基因共濟(jì)失調(diào)-毛細(xì)血管擴(kuò)張突變基因蛋白；胃癌組織

臨床發(fā)現(xiàn)，胃癌發(fā)病率和死亡率高，疾病早期的診斷率及手術(shù)切除率成功率較低，患者5年生存率僅有40%左右。胃癌疾病具有很多影響因素，例如p53、p21、NFκB、COX2、PTEN、RUNX3、ATM和KLF6等。為了能夠了解胃癌發(fā)生、發(fā)展的相關(guān)基因資料以及胃癌的分子遺傳學(xué)機(jī)制，提供胃癌診斷和治療基礎(chǔ)的理論依據(jù)成為臨床上重點(diǎn)研究的內(nèi)容[1]。miRNAs參與了調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖、分化、凋亡以及遷移等生物學(xué)過程，在細(xì)胞的發(fā)育和表型確定中發(fā)揮了重要的作用，miRNA在腫瘤中的異常表達(dá)、腫瘤的發(fā)生發(fā)展以及治療預(yù)后密切相關(guān)。靶基因共濟(jì)失調(diào)-毛細(xì)血管擴(kuò)張突變基因是一種抑制癌變的基因，通過激活p53和p21等基因來激活G1 /S期檢測(cè)點(diǎn)，并通過chk1、chk2和Cdc25家族成員來激活S期和G2/M期檢測(cè)點(diǎn)。

1資料和方法

1.1一般資料 選取我院2014年～2015年收治的外科手術(shù)切除胃癌組織標(biāo)本10例作為研究對(duì)象，設(shè)為實(shí)驗(yàn)組；同時(shí)選取癌旁肺癌組織10例作為對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組患者均確診為胃癌晚期，患者在手術(shù)前沒有采用化療等治療，對(duì)照組患者取距離胃癌病灶5厘米以上的組織作為研究，手術(shù)后通過液氮速凍后保存在零下八十?dāng)z氏度的冰箱中[2]。

1.2方法 本實(shí)驗(yàn)將用qRT-PCR分析miR-181a在胃癌細(xì)胞SGC-7901、MGC-803、BGC-823、MKN-28、AGS表達(dá)情況，結(jié)合細(xì)胞的增殖和分化特征，篩選合適的胃癌細(xì)胞株進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)；構(gòu)建質(zhì)粒miR-181a Inhibitor，使用miR-181a Inhibitor和陰性對(duì)照（質(zhì)粒NC）轉(zhuǎn)染胃癌SGC-7901細(xì)胞，通過相差顯微鏡觀察以及MTS、流式細(xì)胞儀（FACS）、Transwell細(xì)胞遷移和細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)等技術(shù)和方法分析miR-181a對(duì)胃癌細(xì)胞的細(xì)胞周期、增殖與凋亡、遷移與侵襲等生物學(xué)行為的影響[3]；應(yīng)用miRanda、Pictar和Targetscan等生物信息學(xué)方法對(duì)miR-181a靶基因進(jìn)行預(yù)測(cè)，雙螢光素酶報(bào)告系統(tǒng)驗(yàn)證miR-181a的靶基因（ATM）；qRT-PCR檢測(cè)HEK293T細(xì)胞中ATM mRNA的變化；Western Blot檢測(cè)HEK293T細(xì)胞中ATM蛋白的變化；研究胃癌和非癌組織表達(dá)的miR-181a和靶基因ATM蛋白表達(dá)的相關(guān)性[4]。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法[5] 采用SPSS13.0軟件進(jìn)行研究，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，采用%表示，計(jì)數(shù)資料采用X2檢驗(yàn)，采用（x±s）表示，P〈0.05表示統(tǒng)計(jì)學(xué)有意義。

2結(jié)果

miRNA-18la在實(shí)驗(yàn)組中的表達(dá)量為（1.998±1.912），在對(duì)照組中的表達(dá)量為（0.493±和0.098），實(shí)驗(yàn)組中的靶基因共濟(jì)失調(diào)-毛細(xì)血管擴(kuò)張突變基因蛋白表達(dá)量為（0.2565±0.00876），在對(duì)照組中的表達(dá)量為（0.5535±0.0453），兩組患者在miRNA-18la和靶基因共濟(jì)失調(diào)-毛細(xì)血管擴(kuò)張突變基因蛋白的表達(dá)量具有明顯差異，P〈0.05表示統(tǒng)計(jì)學(xué)有意義[6]。miRNA-18la和靶基因共濟(jì)失調(diào)-毛細(xì)血管擴(kuò)張突變基因蛋白的表達(dá)呈現(xiàn)正相關(guān)聯(lián)系。

3討論

為了能夠了解胃癌發(fā)生、發(fā)展的相關(guān)基因資料以及胃癌的分子遺傳學(xué)機(jī)制，提供胃癌診斷和治療基礎(chǔ)的理論依據(jù)成為臨床上重點(diǎn)研究的內(nèi)容。miRNAs參與了調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖、分化、凋亡以及遷移等生物學(xué)過程，在細(xì)胞的發(fā)育和表型確定中發(fā)揮了重要的作用，miRNA在腫瘤中的異常表達(dá)、腫瘤的發(fā)生發(fā)展以及治療預(yù)后密切相關(guān)。靶基因共濟(jì)失調(diào)-毛細(xì)血管擴(kuò)張突變基因是一種抑制癌變的基因，通過激活p53和p21等基因來激活G1 /S期檢測(cè)點(diǎn)，并通過chk1、chk2和Cdc25家族成員來激活S期和G2/M期檢測(cè)點(diǎn)[7-9]。

研究發(fā)現(xiàn)，miRNA-18la在實(shí)驗(yàn)組中的表達(dá)量為（1.998±1.912），在對(duì)照組中的表達(dá)量為（0.493±和0.098），實(shí)驗(yàn)組中的靶基因共濟(jì)失調(diào)-毛細(xì)血管擴(kuò)張突變基因蛋白表達(dá)量為（0.2565±0.00876），在對(duì)照組中的表達(dá)量為（0.5535±0.0453），兩組患者在miRNA-18la和靶基因共濟(jì)失調(diào)-毛細(xì)血管擴(kuò)張突變基因蛋白的表達(dá)量具有明顯差異，P〈0.05表示統(tǒng)計(jì)學(xué)有意義。miRNA-18la和靶基因共濟(jì)失調(diào)-毛細(xì)血管擴(kuò)張突變基因蛋白的表達(dá)呈現(xiàn)正相關(guān)聯(lián)系。因此，miRNA-18la在實(shí)驗(yàn)組中明顯升高，靶基因共濟(jì)失調(diào)-毛細(xì)血管擴(kuò)張突變基因蛋白在實(shí)驗(yàn)組中表達(dá)量明顯降低，影響原因大概是基因沉默機(jī)制miRNA-18la降低了靶基因共濟(jì)失調(diào)-毛細(xì)血管擴(kuò)張突變基因蛋白的表達(dá)量，在胃癌疾病發(fā)生發(fā)展中起到了促進(jìn)作用[10]。

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