小麥ent—柯巴基焦磷酸合酶基因TaCPS1的克隆與熒光定量分析

郭慶東 李全權(quán) 田秋菊　　錢艷麗　　許田 楊艷林 王洪剛 封德順

摘要：ent-柯巴基焦磷酸合酶（ent-copalyl diphosphate synthase， CPS）是植保素合成途徑中的關(guān)鍵酶。本研究利用mRNA差異顯示技術(shù)，從小偃麥異附加系種質(zhì)SN6306中得到一個與抗白粉病相關(guān)的TaCPS1基因。該基因ORF長2 394 bp，編碼797個氨基酸。對其進(jìn)行生物信息學(xué)分析表明，該序列推導(dǎo)的蛋白無信號肽，主要由親水性氨基酸組成，可能存在于細(xì)胞質(zhì)中；其具有類異戊二烯合成酶超家族的保守結(jié)構(gòu)域。熒光定量分析結(jié)果表明，SN6306中的TaCPS1基因在白粉病菌E09誘導(dǎo)處理72 h時，表達(dá)量上調(diào)了大約45倍，但感病親本煙農(nóng)15（YN15）基本不受誘導(dǎo)。在茉莉酸甲酯誘導(dǎo)下，TaCPS1基因表達(dá)量升高將近15倍；在水楊酸誘導(dǎo)下，TaCPS1基因表達(dá)量升高將近 2.4倍。推測TaCPS1基因可能參與小麥抗白粉病機(jī)制中的水楊酸和茉莉酸激素調(diào)節(jié)途徑。

關(guān)鍵詞：小麥；ent-柯巴基焦磷酸合酶；TaCPS1；基因克??；生物信息學(xué)分析；熒光定量PCR；白粉病抗性

中圖分類號：S512.101文獻(xiàn)標(biāo)識號：A文章編號：1001-4942（2016）07-0001-09

小麥白粉病由禾本科布氏白粉菌（Blumeriagraminis f. sp.tritici （Bgt））引起，該病菌是一種專性寄生的子囊菌，只能在活的寄主組織上生長發(fā)育，白粉病菌對濕度和溫度的適應(yīng)范圍很廣，小麥從幼苗到成株均可被白粉病菌侵染[1]。20世紀(jì)60年代以來，由于小麥半矮稈品種的推廣、氮肥施用量的增大，白粉病的危害日趨嚴(yán)重，在世界主要麥區(qū)由次要病害上升為主要病害，也成為我國小麥安全生產(chǎn)的主要限制因子[2]。雖然化學(xué)農(nóng)藥對小麥白粉病防治有一定的作用，但會造成環(huán)境污染?？寺?、鑒定和應(yīng)用在小麥抗白粉病中起重要作用的基因?qū)π←溈共∮N及穩(wěn)定糧食生產(chǎn)具有重要意義。

ent-柯巴基焦磷酸合酶（ent-copalyl diphosphate synthase， CPS）是赤霉素生物合成途徑中的關(guān)鍵酶，也是植保素合成途徑中的一個關(guān)鍵酶，其催化牻牛兒基牻牛兒基焦磷酸（geranyl geranyl diphosphate， GGDP）環(huán)化成古巴基焦磷酸（ent-copalyl diphosphate， CDP）[3]。

赤霉素是高等植物體內(nèi)非常重要的一種植物激素，調(diào)控著莖的伸長、花的分化、種子和果實(shí)的發(fā)育以及休眠等多個生理過程[4，5]。高等植物中赤霉素生物合成途徑已基本確定[6，7]，CPS是其合成途徑中的關(guān)鍵酶。CPS的活性主要取決于CPS基因的表達(dá)水平，該基因主要受植物生長發(fā)育的調(diào)控[8，9]。CPS 基因若完全突變，植物不能產(chǎn)生任何赤霉素，這將導(dǎo)致植物種子不能萌發(fā)、植株矮化和雄性不育等[10，11]。

植保素是植物受到生物或非生物因子侵襲時在體內(nèi)合成并迅速積累的抗微生物活性的小分子化合物，在植物抗病過程中起著重要作用。目前已分離鑒定的植保素大致可分為以下幾種：黃（烷）酮類、類黃酮類、倍半萜類、吲哚類、雙苯類、香豆素類、萜類、環(huán)二酮類、內(nèi)酯類、醌類、苯乙酮類、苯并呋喃類以及生物堿類等。其中萜類成分廣泛存在于植物、真菌等生物體中，既包括固醇、胡蘿卜素等初級代謝產(chǎn)物，又包括成千上萬結(jié)構(gòu)各異的次級代謝產(chǎn)物。萜類合酶是萜類成分生物合成的關(guān)鍵酶，萜類成分結(jié)構(gòu)的豐富性與萜類合酶家族成員的多樣性密不可分。自1992年開始有植物萜類合酶基因克隆的報道，迄今為止，已有超過200種植物萜類合酶基因的cDNA被克隆，包括煙草、薄荷、番茄、丹參等多種植物的單萜合酶、倍半萜合酶、二萜合酶[12～17]。牻牛兒基牻牛兒基焦磷酸（GGPP） 是植物中二萜化合物的共同前體物質(zhì)，其首先通過不同的環(huán)化酶催化成環(huán)，然后進(jìn)一步形成結(jié)構(gòu)各異的二萜化合物[18]?？掳突沽姿岷厦福–PS）是植物三環(huán)二萜類化合物生物合成過程中的起始環(huán)化酶。

Otomo等[19]報道了CPS在水稻中的生物學(xué)功能，指出其是赤霉素和植保素生物合成分支點(diǎn)的關(guān)鍵酶之一，并發(fā)現(xiàn)OsCyc1（即OsCPS4）、OsCyc2（即OsCPS2）和OsCPS1等酶分別參與了momilactones A、B，oryzalexin S、oryzalexins A～F和phytocassanes A～E以及赤霉素的合成，并且前二者基因表達(dá)量受紫外線誘導(dǎo)上調(diào)，而OsCPS1的表達(dá)量不受紫外線的誘導(dǎo)。Prisic等[20]報道了水稻中包含兩種不同的CPS基因，分別編碼CPS1ent和CPS2ent兩種酶。這兩種酶有不同的代謝功能，CPS1ent通常參與赤霉素的生物合成，而CPS2ent參與植保素的生物合成，這與Otomo等[19]的報道相一致。Prisic等[20]同時指出OsCPS1ent與玉米中參與赤霉素合成的An1/ZmCPS1ent的相似性比與其Ⅱ類萜合成酶旁系同源物的相似性要高，這種生物合成過程中跨物種的保守性反映出從赤霉素初級生物合成過程衍生出的相關(guān)次級代謝的分化先于禾本科內(nèi)部導(dǎo)致現(xiàn)代玉米和水稻產(chǎn)生的不同世系的早期分化。Toyomasu等[21]根據(jù)小麥表達(dá)序列標(biāo)簽從小麥中擴(kuò)增出了三個CPS基因（TaCPS1、TaCPS2和TaCPS3），并且利用大腸桿菌進(jìn)行了原核表達(dá)，證明這三個基因編碼的蛋白具有ent-柯巴基焦磷酸合酶的活性。通過進(jìn)化樹和表達(dá)分析認(rèn)為TaCPS3負(fù)責(zé)參與赤霉素的生物合成，而TaCPS1和TaCPS2則有可能在功能上與水稻中的OsCPS2 和OsCPS4同源，參與植保素的生物合成[22]。在玉米CPS的研究中，Harris等[22]在2005年報道了玉米的CPS基因（An2）受鐮刀菌誘導(dǎo)，An2編碼的蛋白和玉米中參與赤霉素生物合成的An1編碼的蛋白有約60%的相似性，其催化產(chǎn)生的二萜中間產(chǎn)物可能參與了初級或者次級代謝。Schmelz等[23]指出An2基因轉(zhuǎn)錄量的積累先于植保素kauralexin區(qū)域化的大量產(chǎn)生，這也印證了An2在玉米抗病中的重要作用。Falara等[24]報道了在百瑞木中克隆到一個二萜合成酶基因，該酶催化copal-8-ol二磷酸的合成，和其他物種中的柯巴基二磷酸合酶有較高的相似性，且該酶的表達(dá)量受傷害誘導(dǎo)。Kurusu等[25]報道顯示水稻CPS4（OsCPS4/OsCyc1）和類內(nèi)根-貝殼杉烯合酶4（OsKSL4/OsKS4）負(fù)責(zé)參與momilactones的生物合成，而CPS2（OsCPS2/OsCyc2）和類內(nèi)根-貝殼杉烯合酶7（OsKSL7/OsDTC1）則負(fù)責(zé)參與phytocassanes的生物合成，這些酶都受TvX/EIX的誘導(dǎo)。Kurusu等[25]研究還發(fā)現(xiàn)OsCIPK（Calcineurin B-like protein-interacting proteinkinases）14/15可能參與TvX/EIX誘導(dǎo)的植保素生物合成的調(diào)節(jié)，因此鈣離子信號途徑很有可能參與到這一過程中。

前人的研究表明柯巴基焦磷酸合酶在水稻和玉米等作物中具有抗植物病害作用，但其是否具有抗小麥白粉病的作用尚未見報道。在前期的研究中，我們以本實(shí)驗(yàn)室培育的高抗白粉病異附加系小麥種質(zhì)SN6306與高感白粉病親本小麥品種煙農(nóng)15為材料，利用未經(jīng)侵染和經(jīng)過白粉病菌E09 誘導(dǎo)處理12 h 的小麥SN6306葉片cDNA來挖掘小麥白粉病菌誘導(dǎo)的差異表達(dá)片段，發(fā)現(xiàn)其中編號為47969的contig在誘導(dǎo)后表達(dá)量明顯上調(diào)。本研究根據(jù)小麥測序數(shù)據(jù)庫（http：//wheat-urgi.versailles.inra.fr/）中的相似性比對，通過PCR 方法從SN6306的cDNA中克隆到一個TaCPS1基因，并對此序列進(jìn)行生物信息學(xué)和基因表達(dá)分析，為進(jìn)一步研究TaCPS1基因在小麥抗白粉病中的作用及在育種中的應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

供試材料為小麥-中間偃麥草雙體異附加系SN6306與其親本小麥煙農(nóng)15。其中SN6306高抗小麥白粉病菌生理小種E09，為高感白粉病小麥品種煙農(nóng)15 （YN15）（Triticum aestivum L.， 2n=42）與小麥近緣屬中間偃麥草（Thinopyrum intermedium， 2n=42）的雜交后代，附加了一對來自中間偃麥草的染色體。煙農(nóng)15由煙臺市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院育成，高感白粉病菌生理小種E09。

挑選籽粒飽滿的小麥種子用10% NaClO消毒10 min，隨后用蒸餾水漂洗數(shù)次，蒸餾水中催芽1 d 后，移至蛭石與基質(zhì)（1∶1）的混合培養(yǎng)基中，培養(yǎng)條件為光照時間16 h，光照強(qiáng)度12 000 lx，25℃；黑暗時間8 h，18℃。白粉病菌為北方和黃淮麥區(qū)流行小種E09，通過高感白粉病小麥品種YN15 來進(jìn)行傳代培養(yǎng)。接種方法為首先用干凈棉棒在長滿白粉病菌的YN15 葉片上進(jìn)行涂抹，然后對長至一葉一心期的SN6306 進(jìn)行葉片接種涂抹。

1.2RNA提取與反轉(zhuǎn)錄

按照全式金公司RNA 提取試劑盒操作說明進(jìn)行總RNA 提取。所用材料為SN6306經(jīng)白粉病菌E09誘導(dǎo)12 h的葉片。瓊脂糖凝膠電泳和分光光度法檢測提取的總RNA 的質(zhì)量與純度。以提取的3 μg 總RNA 作為模板，以O(shè)ligo-dT為引物，利用TransScriptFirst-Strand cDNA Synthesis Super Mix （全式金）試劑盒進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄。具體方法如下：將RT管置于冰上，用移液器添加3 μL提取的總RNA，2 μL濃度為10 μmol/L的dT-ACP1，加RNase-free 水補(bǔ)至9 μL，用移液器吸打混勻；80℃水浴3 min，冰上放置2 min，短暫離心后，再加入2×TS Reaction Mix 10 μL與TransScriptRT/RI Enzyme Mix 1 μL，使反應(yīng)體系總體積為20 μL，輕輕混勻；混勻后于42℃孵育90 min，94℃加熱2 min，冰上放置2 min，輕輕混勻；最后向反應(yīng)體系中添加DNase-free 水80 μL，使其稀釋到100 μL，反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物放于-20℃?zhèn)溆谩?/p>

1.3TaCPS1基因的克隆

通過對前期mRNA差異顯示技術(shù)得到的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)編號為47969的contig受小麥白粉病菌誘導(dǎo)后上調(diào)表達(dá)，將該片段在NCBI上進(jìn)行BlastN，發(fā)現(xiàn)比對區(qū)段與TaCPS1（已注冊，注冊號為AB439588.1）的相似性為99%。

根據(jù)比對結(jié)果我們推測該基因?yàn)門aCPS1基因，并根據(jù)其序列設(shè)計(jì)特異引物對TaCPS1F：5′-ATGCAGGTGTTTAACGGTAACC-3′和TaCPS1R：5′-GTAGTAAGGGAGGTTTTTCTCCAAC-3′，以SN6306經(jīng)白粉病菌侵染后的葉片cDNA為模板進(jìn)行擴(kuò)增。PCR 反應(yīng)體系為：2×PCR mix 10 μL （百泰克），10 μmol/L 的引物TaCPS1F和TaCPS1R各0.5 μL，反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物cDNA 2 μL，剩余用ddH2O補(bǔ)至20 μL。PCR 反應(yīng)程序采用Touch-Down PCR 程序，即95℃ 5 min 預(yù)變性后，首先10個循環(huán)，每個循環(huán)退火溫度降一度（94℃ 40 s， 62～52℃ 40 s， 72℃ 2.5 min），后進(jìn)行27 個普通循環(huán)（94℃ 40 s， 52℃ 40 s， 72℃ 2.5 min），最后72℃延伸10 min，10℃保存。PCR 產(chǎn)物用1%瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳分離，按照TaKaRa的膠回收試劑盒說明回收擴(kuò)增產(chǎn)物，將回收產(chǎn)物與pEASY-T1 （全式金）載體過夜連接，轉(zhuǎn)化DH5α大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞。選取3 個獨(dú)立陽性克隆送公司測序（上海博尚），以保證結(jié)果的準(zhǔn)確性。

1.4生物信息學(xué)分析

按照黃春麗等[26]的方法對TaCPS1基因序列和蛋白序列進(jìn)行生物信息學(xué)分析：使用ORF finder軟件對TaCPS1基因序列的開放閱讀框進(jìn)行分析；使用在線SignalP工具對編碼蛋白序列的信號肽有無進(jìn)行分析；使用ExPASy的ProtScale對編碼蛋白的親疏水性進(jìn)行分析；利用NCBI上的BlastP功能對其蛋白結(jié)構(gòu)等進(jìn)行預(yù)測與分析；使用軟件DNAMAN進(jìn)行蛋白的多序列聯(lián)配分析；使用軟件MEGA5 進(jìn)行系統(tǒng)進(jìn)化樹分析。

1.5小麥白粉病菌誘導(dǎo)下TaCPS1基因的表達(dá)情況分析

1.5.1小麥葉片總RNA的提取與cDNA第一鏈的合成所用材料為SN6306與YN15幼苗未經(jīng)侵染（0 h）與經(jīng)白粉病菌E09誘導(dǎo)處理12、24、48、72 h的葉片，共計(jì)10個樣品?？俁NA提取及cDNA第一鏈的合成方法同1.2。

1.5.2TaCPS1基因的熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qRT-PCR）分析設(shè)計(jì)擴(kuò)增引物47969F/R，47969F：5′-ACCGTTGCAGCTCT

GAAGAA-3′與47969R： 5′-AGGGGCTCACCTCTTCCATA-3′，使該引物擴(kuò)增的目的片段跨一個內(nèi)含子序列且引物在高度同源的TaCPS2與TaCPS3的cDNA中無匹配。選用小麥β-Actin基因作為內(nèi)參基因，引物序列為β-Actin F：5′-CCGGCATTGTCCACATGAA-3′與β-Actin R：5′-CGGTTCAGCTTTTCCTTTTGG-3′。以SN6306與YN15各時間點(diǎn)第一條鏈cDNA為模板，對白粉病菌誘導(dǎo)下TaCPS1基因的表達(dá)特征進(jìn)行分析。

按照SYBRPremix Ex TaqTM說明書進(jìn)行操作，于CFX96TM Real-Time PCR Detection System擴(kuò)增儀上進(jìn)行擴(kuò)增。qRT-PCR反應(yīng)體系（反應(yīng)液配制在冰上進(jìn)行）：2×SYBR Premix Ex Taq（TliRNaseH Plus）10 μL，2.5 μmol/L PCR 47969F/R引物各2 μL，模板cDNA<100 ng，ddH2O補(bǔ)至20 μL。

qRT-PCR反應(yīng)程序：95℃預(yù)變性90 s；95℃變性5 s，60℃退火30 s，共40個循環(huán)；65℃至95℃，每次升高0.5℃，每溫度持續(xù)5 s，繪制熔解曲線。反應(yīng)結(jié)束后確認(rèn)qRT-PCR的擴(kuò)增曲線和熔解曲線，按照Livak 2-ΔΔCT方法進(jìn)行結(jié)果分析[27]。

1.6水楊酸和茉莉酸甲酯誘導(dǎo)后TaCPS1基因的表達(dá)情況分析

1.6.1葉片處理將事先配制好的SA（100 μmol/L）、JAMe（0.5 g/L）兩種激素溶液分別噴灑于SN6306葉片，分別采取0、12、24、36、48、60 h和72 h七個時間點(diǎn)的葉片，于液氮中速凍，隨后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱中長久保存，備用。

1.6.2總RNA的提取與cDNA第一鏈的合成將分別經(jīng)SA和JAMe處理0、12、24、36、48、60 h和72 h的SN6306葉片共計(jì)14個樣品進(jìn)行總RNA的提取及cDNA第一鏈的合成（方法同1.2）。

1.6.3熒光定量分析以上述反轉(zhuǎn)錄得到的cDNA為模板，以47969F/R為引物進(jìn)行qRT-PCR，方法同1.5.2。

2結(jié)果與分析

2.1TaCPS1基因的克隆

將在SN6306的差異表達(dá)cDNA中篩選到的編號為47969的contig在NCBI上進(jìn)行比對，發(fā)現(xiàn)其和普通小麥TaCPS1的序列相似度達(dá)到99%。以SN6306 cDNA為模板，用特異引物TaCPS1F/R擴(kuò)增目的基因，1%瓊脂糖凝膠分離擴(kuò)增產(chǎn)物，電泳后顯示大小約2 500 bp的條帶（圖1），經(jīng)測序得到長度為2 531 bp的TaCPS1序列。該序列的部分片段與前期獲得的編號為47969的contig完全相符。

2.2TaCPS1基因的cDNA和氨基酸序列分析

使用ORF finder軟件對TaCPS1基因序列的開放閱讀框進(jìn)行分析，預(yù)測TaCPS1基因編碼區(qū)長度為2 394 bp，編碼含有797個氨基酸的蛋白（圖2）。在ExPASY網(wǎng)站上對TaCPS1蛋白進(jìn)行分析，其分子量為90 200.4 D，理論pI為5.88。

2.3TaCPS1的生物信息學(xué)分析

使用SignalP 4.1對TaCPS1蛋白序列的信號肽進(jìn)行預(yù)測分析，結(jié)果表明該蛋白無信號肽。使用ProtScale工具在線分析TaCPS1蛋白序列親疏水性，結(jié)果表明該蛋白的氨基酸殘基主要為親水性氨基酸，推測其可能存在于細(xì)胞質(zhì)中。采用NCBI 的BlastP對TaCPS1的蛋白結(jié)構(gòu)進(jìn)行預(yù)測，發(fā)現(xiàn)其具有類異戊二烯合成酶超家族（Isoprenoid-Biosyn-C1 superfamily）的保守結(jié)構(gòu)域（圖3）。

通過DNAMAN對TaCPS1基因編碼的蛋白與從NCBI查找到的18個其它物種的CPS蛋白進(jìn)行多序列比對分析，結(jié)果表明TaCPS1和其它物種的CPS蛋白在氨基酸序列上具有很高的相似性（圖4）。用MEGA5.0對共計(jì)19個CPS蛋白進(jìn)行進(jìn)化樹分析，從系統(tǒng)進(jìn)化樹可以看出TaCPS1與粗山羊草CPS蛋白遺傳距離最近，進(jìn)化上同源（圖5）。

2.4TaCPS1基因在小麥白粉病菌誘導(dǎo)后的表達(dá)情況分析

為了驗(yàn)證TaCPS1基因在響應(yīng)小麥白粉病菌中的作用，對其在SN6306與YN15對照（0 h）以及白粉病菌誘導(dǎo)12、24、48、72 h共計(jì)10個樣品中的表達(dá)模式進(jìn)行了qRT-PCR分析。結(jié)果表明，熒光定量的熔解曲線峰單一，判斷無雜帶；SN6306中的TaCPS1基因在白粉病菌誘導(dǎo)處理24 h后，表達(dá)量開始上升，到72 h時，其表達(dá)量上調(diào)了大約45倍，但YN15基本不受誘導(dǎo)（圖6）。由此推測，TaCPS1基因受小麥白粉病菌誘導(dǎo)上調(diào)，可能和SN6306抗小麥白粉病有關(guān)。

2.5TaCPS1基因在水楊酸和茉莉酸甲酯誘導(dǎo)后的表達(dá)情況分析

為了進(jìn)一步探究TaCPS1基因可能參與的抗白粉病機(jī)制，利用水楊酸和茉莉酸甲酯兩種激素對SN6306分別進(jìn)行誘導(dǎo)，并分別采取各時間點(diǎn)葉片，進(jìn)行實(shí)時熒光定量分析。結(jié)果表明，在茉莉酸甲酯誘導(dǎo)下，與0 h相比，TaCPS1基因表達(dá)量呈現(xiàn)出先升高后降低再升高的趨勢，并在誘導(dǎo)60 h時達(dá)到最高值，是0 h的近15倍（圖7）；在水楊酸激素誘導(dǎo)下，與0 h相比，TaCPS1基因表達(dá)量先降低后升高，并在誘導(dǎo)60 h時達(dá)到最高值，是0 h的2.4倍（圖7）。這表明TaCPS1基因可能參與了水楊酸和茉莉酸激素調(diào)節(jié)途徑。

3討論與結(jié)論

已有文獻(xiàn)報道在多種植物中存在多個CPS基因[28]，如日本粳稻全基因組中存在4個CPS基因，其中OsCPS1與植物激素赤霉素合成相關(guān)，OsCPS2與非赤霉素類二萜的生物合成相關(guān)，OsCPSsyn與

圖7TaCPS1基因在受到茉莉酸甲酯（上）與水楊酸（下）誘導(dǎo)后的表達(dá)情況syn-半日花烷型的二萜合成相關(guān)[20]。這些二萜化合物中的植保素成分在某種程度上促進(jìn)了植物對相關(guān)外源傷害如紫外傷害等產(chǎn)生抗性。前人對小麥CPS基因已做了很多研究，Toyomasu等[21]根據(jù)小麥表達(dá)序列標(biāo)簽從小麥中擴(kuò)增出了三個TaCPS基因（TaCPS1、TaCPS2和TaCPS3）；Wu等[29]在小麥中發(fā)現(xiàn)了TaCPS4與TaCPS5基因；Huang等[30]在小麥7A、7B和7D染色體中分別發(fā)現(xiàn)了一個TaCPS基因。但是關(guān)于TaCPS基因在小麥中的功能沒有太多研究，大部分研究僅說明TaCPS基因與植物激素赤霉素和非赤霉素類二萜的生物合成相關(guān)，對TaCPS基因在小麥抗白粉病方面的作用還沒有報道過。本研究中，TaCPS1基因受小麥白粉病誘導(dǎo)表達(dá)量上調(diào)，說明其與抗白粉病作用有關(guān)；TaCPS1基因被水楊酸和茉莉酸甲酯誘導(dǎo)表達(dá)量上調(diào)，推測TaCPS1基因參與了小麥抗白粉病反應(yīng)的水楊酸和茉莉酸激素調(diào)節(jié)途徑；TaCPS1基因的表達(dá)量明顯上調(diào)發(fā)生在第60 h，推測TaCPS1基因可能位于抗白粉病反應(yīng)的下游途徑，受水楊酸和茉莉酸激素調(diào)控。

本研究克隆到TaCPS1基因，并發(fā)現(xiàn)該基因可能與小麥白粉病抗性有關(guān)。下一步我們將針對該基因構(gòu)建大麥花葉病毒誘導(dǎo)的基因沉默（BSMV-VIGS）載體，擬進(jìn)一步通過基因沉默技術(shù)探討該基因的功能，為研究TaCPS1基因在小麥抗白粉病中的作用及在育種中的應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

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