淺談注射劑生產(chǎn)的微生物控制

陳傳就

摘要：注射劑的質(zhì)量關(guān)乎患者生命安危，因此我國(guó)GMP無(wú)菌附錄規(guī)定“注射劑的生產(chǎn)須滿足其質(zhì)量和預(yù)定用途的要求，應(yīng)最大限度降低微生物、各種微粒和熱原的污染?！蓖ㄟ^(guò)分析微生物的主要污染因素和防治措施，為注射劑生產(chǎn)的微生物控制和降低污染提供參考。

關(guān)鍵詞：無(wú)菌工藝；注射劑；微生物控制；微生物污染

注射劑是直接注入人體的一種劑型，不經(jīng)過(guò)任何人體屏障直接進(jìn)入體循環(huán)。微生物污染是影響注射劑質(zhì)量的關(guān)鍵因素之一，關(guān)乎患者的生命安危。2006年的克林霉素磷酸酯（欣弗事件）就是典型的例子之一。安徽華源制藥公司未經(jīng)嚴(yán)格驗(yàn)證擅自增加滅菌柜裝載量，改變滅菌溫度和時(shí)間，致使產(chǎn)品無(wú)菌檢查和熱源檢查均不合格，造成93例患者發(fā)生嚴(yán)重反應(yīng)和11例死亡的藥品不良事件。欣弗事件不是偶然，警醒我們?cè)谏a(chǎn)過(guò)程中時(shí)刻關(guān)注藥品質(zhì)量，關(guān)注微生物污染問(wèn)題。微生物的污染來(lái)源于多方面，以下是幾個(gè)主要的因素。

1 人員

人是主要的污染源，是微生物污染的關(guān)鍵影響因素。任何一流的廠房設(shè)計(jì)和先進(jìn)的設(shè)備都離不開(kāi)認(rèn)為人員活動(dòng)的干預(yù)，因此可以說(shuō)，人員的管理水平?jīng)Q定著藥品質(zhì)量水平。國(guó)外經(jīng)過(guò)試驗(yàn)得出：①潔凈室內(nèi)當(dāng)工作人員穿無(wú)菌服時(shí)，靜止時(shí)的發(fā)菌量一般為10～300個(gè)/min/人，軀體一般活動(dòng)時(shí)的發(fā)菌量為150～1000個(gè)/min/人，快步行走時(shí)的發(fā)菌量為900～2500個(gè)/min/人。②咳嗽一次的發(fā)菌量一般為70～700個(gè)/min/人，噴嚏一次的發(fā)菌量一般為4000～60000個(gè)/min/人。③穿平常衣服時(shí)發(fā)菌量為3300～62000個(gè)/min/人。④無(wú)口罩發(fā)菌量：有口罩發(fā)菌量為（1∶7）～（1∶14）。

由上數(shù)據(jù)可知，潔凈室內(nèi)穿無(wú)菌衣人員的靜態(tài)發(fā)菌量一般不超過(guò)300個(gè)/min/人，動(dòng)態(tài)發(fā)菌量一般不超過(guò)1000個(gè)/min/人。

由此可見(jiàn)，人員的活動(dòng)對(duì)潔凈區(qū)微生物數(shù)量產(chǎn)生非常重大的影響，甚至是決定性的影響。要消除人員帶來(lái)的污染，必須規(guī)范人員的行為和操作。

1.1相應(yīng)的潔凈區(qū)域 必須僅限于相關(guān)區(qū)域的生產(chǎn)操作人員進(jìn)出，非相關(guān)區(qū)域的操作人員是不允許進(jìn)入，非生產(chǎn)相關(guān)人員原則上禁止進(jìn)出生產(chǎn)潔凈區(qū)域。特殊情況下，參觀人員，機(jī)械設(shè)備維修人員等需要進(jìn)入潔凈區(qū)的，必須經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的更衣培訓(xùn)，并在生產(chǎn)相關(guān)人員的陪同和指導(dǎo)下才能或許進(jìn)入。

1.2人員無(wú)菌意識(shí)的培訓(xùn) 應(yīng)對(duì)每一個(gè)員工培訓(xùn)微生物基礎(chǔ)知識(shí)，潔凈區(qū)基本知識(shí)，無(wú)菌藥品基本知識(shí)和法規(guī)等。人的意識(shí)決定著人的行為，加強(qiáng)無(wú)菌意識(shí)培訓(xùn)，才能從源頭上將污染減少到最低。

1.3人員的更衣程序 每個(gè)員工正確更衣不是一件簡(jiǎn)單的事情，里面包含很多細(xì)節(jié)性的東西。人員是活動(dòng)的，更衣不合格，就會(huì)把污染帶入潔凈區(qū)，產(chǎn)品就會(huì)承受巨大的風(fēng)險(xiǎn)。很多跨國(guó)公司對(duì)更衣的要求非常嚴(yán)格，大多普通的員工反復(fù)練習(xí)1個(gè)月甚至更長(zhǎng)才能達(dá)到要求，才能獲準(zhǔn)進(jìn)入無(wú)菌核心區(qū)域操作。企業(yè)應(yīng)該嚴(yán)肅對(duì)待更衣問(wèn)題，差不多的思想千萬(wàn)要不得。

2 滅菌設(shè)備和滅菌程序

滅菌設(shè)備要選擇方便驗(yàn)證的設(shè)備，比如方便驗(yàn)證布點(diǎn)。有很多手提式的滅菌設(shè)備既沒(méi)有驗(yàn)證口，也不方便驗(yàn)證布點(diǎn)。這樣的滅菌設(shè)備是不可控的，是絕不能使用的。滅菌程序必須要經(jīng)過(guò)驗(yàn)證。滅菌鍋的裝載量，裝載方式，空載滿載等都要經(jīng)過(guò)驗(yàn)證，包括微生物的挑戰(zhàn)性實(shí)驗(yàn)。滅菌程序一經(jīng)驗(yàn)證，就必須按照既定的驗(yàn)證程序進(jìn)行，任何擅自改變都會(huì)產(chǎn)生無(wú)可預(yù)計(jì)的風(fēng)險(xiǎn)。

2.1裝載量和裝載方式 一個(gè)滅菌程序要按照既定的裝載量和裝載方式進(jìn)行。裝載量和裝載的隨意改變會(huì)影響滅菌氣體的流通和穿透性，可能導(dǎo)致滅菌不徹底，產(chǎn)品發(fā)生污染。

2.2微生物的耐熱性評(píng)估 微生物在不同的介質(zhì)中耐熱性能是不一樣的，D值有可能存在較大波動(dòng)，有可能會(huì)超過(guò)所用生物指示劑的D值。每個(gè)公司應(yīng)該采集物料、環(huán)境和人員身上分離到的菌株，測(cè)定相關(guān)的D值并進(jìn)行對(duì)比，才能選用最合適的驗(yàn)證程序。比如附著于膠塞的分離菌，其耐熱性能可能高于生物指示劑（如嗜熱脂肪芽孢桿菌生物指示劑）的耐熱性能，盲目的以生物指示劑為參照，就會(huì)導(dǎo)致滅菌不徹底，對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量和患者產(chǎn)生危害。

2.3對(duì)無(wú)菌保證的理解 歐盟滅菌決策樹(shù)對(duì)濕熱滅菌的F0值要求至少為8 min。這里應(yīng)該理解為手段，而不是標(biāo)準(zhǔn)。F0≥8 min不一定符合藥典標(biāo)準(zhǔn)，F(xiàn)0≤8 min不一定就不符合藥典標(biāo)準(zhǔn)，關(guān)鍵是要對(duì)生產(chǎn)全過(guò)程進(jìn)行必要的監(jiān)控措施、滅菌前作污染菌的檢查（污染菌總數(shù)及耐熱性）；另外，有人將耐熱性最強(qiáng)的芽孢接入產(chǎn)品中，濃度須達(dá)到106，認(rèn)為只有滅菌程序能使之下降6D或12D時(shí)，此滅菌工藝才能達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)，這是一種誤解。接種進(jìn)入產(chǎn)品的生物指示劑耐熱性高，在上述濃度下將其完全殺滅所需的F0會(huì)由此變得很大。

3 清潔和消毒

現(xiàn)在很多廠家多采用過(guò)氧化氫、乳酸、臭氧等進(jìn)行熏蒸消毒，應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況使用。不管是何種消毒方式，不能參照相關(guān)的消毒物質(zhì)濃度，還需要考慮環(huán)境溫度和濕度，才能發(fā)揮最好的效果。所有的消毒效果必須以驗(yàn)證數(shù)據(jù)為準(zhǔn)。這里需要注意的是，生物指示劑的選擇。有些廠家選擇暴露的細(xì)菌芽孢生物指示劑，如枯草芽孢桿菌，而且消毒頻率比較大，需要注意因此帶來(lái)的污染。紫外消毒也是一種常用的有效的表面消毒方式，主要用在潔凈工作臺(tái)、層流罩、物流傳遞窗、甚至整個(gè)潔凈房間。紫外線消毒需要對(duì)紫外燈的波長(zhǎng)，使用時(shí)間和強(qiáng)度進(jìn)行確認(rèn)，才能保證消毒效果。紫外線波長(zhǎng)為136～390 nm，消毒用的紫外燈應(yīng)限制在短波的波長(zhǎng)范圍內(nèi)，為200～275 nm，殺菌作用最強(qiáng)的波段是250～270 nm，其最強(qiáng)滅菌波長(zhǎng)為253.7 nm，在操作面上的強(qiáng)度要求達(dá)到70 μW/cm2以上，殺菌作用隨菌種不同而不同。國(guó)產(chǎn)紫外燈平均壽命一般為2000 h，但是其滅菌有效使用時(shí)間要依據(jù)驗(yàn)證而定。傳遞窗傳遞物品的裝載方式也要經(jīng)過(guò)驗(yàn)證，否則紫外消毒的效果會(huì)大打折扣。

4 物料和物品的傳遞方式

理想的物料區(qū)應(yīng)該緊鄰生產(chǎn)區(qū)，縮短物料的傳輸距離，避免污染。物料區(qū)離生產(chǎn)區(qū)域太遠(yuǎn)，增加轉(zhuǎn)運(yùn)的麻煩更增加污染的風(fēng)險(xiǎn)，在非正常天氣比如梅雨季節(jié)的時(shí)候更明顯。物流通道應(yīng)有專(zhuān)用的通道，并且進(jìn)和出的通道嚴(yán)格分開(kāi)。物料進(jìn)入潔凈區(qū)前，表面要進(jìn)行徹底的清潔和消毒，避免將污染帶入無(wú)菌區(qū)域。無(wú)菌物品轉(zhuǎn)移應(yīng)該避免二次污染。滅完菌的物料或者物品，從滅菌設(shè)備中轉(zhuǎn)移到目標(biāo)區(qū)域，操作不當(dāng)很容易造成二次污染。常見(jiàn)的如無(wú)菌原料的轉(zhuǎn)運(yùn)，無(wú)菌膠塞的轉(zhuǎn)運(yùn)，凍干成品出箱的轉(zhuǎn)運(yùn)（進(jìn)行軋蓋），都需要在層流下進(jìn)行轉(zhuǎn)運(yùn)，人員的操作也必須要十分的仔細(xì)小心，除了不能直接接觸無(wú)菌物品等最基本的要求外，應(yīng)避免人體部分或者長(zhǎng)時(shí)間暴露于層流下物料的上方或前方。

總結(jié)：注射劑生產(chǎn)過(guò)程中，每一個(gè)環(huán)節(jié)都是預(yù)防微生物污染不可忽視的。廠房設(shè)施的良好設(shè)計(jì)和布局，水系統(tǒng)，公用氣體，空調(diào)系統(tǒng)等公用系統(tǒng)等，都能夠產(chǎn)生重要的影響。人員是其中最重要的影響因素，物料的傳遞和轉(zhuǎn)運(yùn)，滅菌程序的合理驗(yàn)證和使用，消毒劑的交叉使用等各項(xiàng)細(xì)節(jié)性的東西嚴(yán)格遵循法規(guī)和無(wú)菌操作，能夠在極大的程度上避免微生物污染，提高產(chǎn)品質(zhì)量[1-4]。

參考文獻(xiàn)：

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編輯/張燕