痰結(jié)核桿菌在結(jié)核患者中的檢驗(yàn)方法探討

馬瑞瑛 楊振萍

摘要：目的 探討痰結(jié)核桿菌在結(jié)核患者中的檢驗(yàn)方法。方法 選取2014年1 ～12月收治的結(jié)核病患者133例，取所有患者痰液標(biāo)本分三份分別采用羅氏培養(yǎng)基培養(yǎng)法、痰涂片抗酸染色法和PCR檢查法進(jìn)行結(jié)核桿菌檢測，分析對比3種方法檢測結(jié)果，檢測時(shí)間與檢測成本。結(jié)果 經(jīng)過對比，PCR 檢測法檢測結(jié)核桿菌陽性率高于痰涂片抗酸染色法和羅氏培養(yǎng)基培養(yǎng)法，痰涂片抗酸染色法檢測時(shí)間最短，羅氏培養(yǎng)基培養(yǎng)法檢測成本最低（P<0.05）。結(jié)論 3種方式檢測結(jié)核患者痰結(jié)核桿菌，PCR檢測法檢測準(zhǔn)確率最高，其次為菌培養(yǎng)法。但涂片法所用檢測時(shí)間較短。臨床上應(yīng)依據(jù)實(shí)際情況選擇所需。

關(guān)鍵詞：痰結(jié)核桿菌；結(jié)核?。粰z驗(yàn)方法

結(jié)核病是結(jié)核桿菌所引起的慢性傳染性疾病，因其具有的高度傳染性，一直以來都是人類的健康殺手，影響十分嚴(yán)重。近幾年，隨著結(jié)核桿菌的變異和抗藥性不斷增加，結(jié)核病的發(fā)病率、發(fā)病人數(shù)與病死率呈上升趨勢發(fā)展。這種情況在發(fā)展中國家這種情況更加嚴(yán)重，據(jù)統(tǒng)計(jì)，全球目前約有大約30%人數(shù)受到了結(jié)核桿菌感染，每年新增結(jié)核病例900多萬，死于結(jié)核病的人數(shù)約為200萬，該病已成為因單一病原體引起，致病致死率最高的疾病[1]。因此，準(zhǔn)確快速的結(jié)核桿菌檢測并幫助確診結(jié)核病人對發(fā)現(xiàn)、控制、治療結(jié)核病都有十分關(guān)鍵的意義。目前對于結(jié)核桿菌的檢測是診斷結(jié)核病較為有效的方法。通常結(jié)核桿菌的診斷方法主要是采用羅氏培養(yǎng)基培養(yǎng)法和痰涂片抗酸染色法。這兩種方法雖然有一定效果，但在一定條件上受限太多，各有優(yōu)缺點(diǎn)，涂片法相對簡單容易操作，但檢出率較低。羅氏培養(yǎng)基培養(yǎng)法先對檢出率高但通常需要4～8w的檢測周期。隨著現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，熒光定量PCR（fluorescent quantitative PCR，F(xiàn)Q-PCR）做為新開發(fā)出的技術(shù)，因其具有的高特異性和敏感度，被逐漸應(yīng)用到臨床診斷[2]。本研究對比分析了幾種痰結(jié)核桿菌的檢驗(yàn)方法效果，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取我院2014年1～12月收治的結(jié)核病患者133例，去痰液標(biāo)本133份，其中男73例，女60例，年齡17～46歲，平均38.7歲，所有患者均有不同程度盜汗、低熱，乏力等臨床癥狀， 經(jīng)臨床觀察與病理學(xué)診斷確診為肺結(jié)核。

1.2方法 所有患者于清晨用生理鹽水清理口腔后咳痰，并棄去第一口痰液，取第二口分三份分別裝在無菌標(biāo)本盒內(nèi)立即送至我院檢驗(yàn)科檢測。對痰液標(biāo)本分別應(yīng)用羅氏培養(yǎng)基培養(yǎng)法、痰涂片抗酸染色法和PCR檢測。

1.2.1羅氏培養(yǎng)基培養(yǎng) 取2ml痰液標(biāo)本中膿性部分置于消化管中，根據(jù)消化管中標(biāo)本濃稠度，取適量3.0%～4.0%NaOH溶液加入消化管，放置在渦旋震蕩器上搖晃均勻后靜置15 min，取0.1ml無菌環(huán)境下接種在兩支羅氏培養(yǎng)基上，溫箱溫度設(shè)置在（36±1）℃孵育培養(yǎng)8w，分別在孵育的第3d和第7d觀察記錄生長數(shù)據(jù)，以后每周均觀察記錄一次。

1.2.2痰涂片抗酸染色法 按照《痰涂片鏡檢標(biāo)準(zhǔn)化操作及質(zhì)量保證手冊》中的規(guī)范要求留取操作送檢的痰液標(biāo)本，在生物安全柜中取痰液標(biāo)本的膿性部分涂厚片，干后采用抗酸染色，顯微鏡在100視野下檢測記錄。

1.2.3 PCR檢查 取4倍痰液標(biāo)本體積的4%NaoH溶液加入送檢痰液中，搖晃均勻，置于室溫下液化30min后，取0.5～1.5ml加入0.5ml4%NaoH放在離心管中靜置10min，進(jìn)行5min速度15000rpm下的低溫離心。棄上清，經(jīng)沉淀后加1ml無菌生理鹽水混合均勻，轉(zhuǎn)速15000rpm進(jìn)行5min離心，沉淀物重復(fù)操作1次。加入50μL裂解液充分混勻，沸水浴10min后15000rpm離心5min。取2μL處理后的樣本作為模板，加進(jìn)PCR管內(nèi)進(jìn)行PCR 擴(kuò)增。結(jié)果用陽性定量參考品CT值和陰、陽性質(zhì)控

品進(jìn)行判定。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)資料采用SPSS17.0軟件進(jìn)行處理分析，計(jì)量資料用χ2檢驗(yàn)，對相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，P<0.05差異明顯，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 133例結(jié)核患者檢驗(yàn)結(jié)果 133例結(jié)核患者痰液經(jīng)過三種方式檢驗(yàn)，羅氏培養(yǎng)基培養(yǎng)法檢驗(yàn)結(jié)核桿菌陽性59例，陽性率44.36%。痰涂片抗酸染色法檢驗(yàn)結(jié)核桿菌陽性40例，陽性率30.08%。PCR檢查結(jié)核桿菌陽性87例，陽性率65.41%。經(jīng)過對比，PCR檢查法檢測結(jié)核桿菌陽性率（65.41%）>羅氏培養(yǎng)基培養(yǎng)法（44.36%）>痰涂片抗酸染色法（30.08%）。差異明顯，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表1。

2.2 3種檢測方式檢測成本與檢測時(shí)間對比 經(jīng)過對比，檢測成本上PCR檢查法>痰涂片抗酸染色法>羅氏培養(yǎng)基培養(yǎng)法；檢測時(shí)間上羅氏培養(yǎng)基培養(yǎng)法>PCR檢查法>痰涂片抗酸染色法。3種方式對比差異顯著，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表2。

3 討論

肺結(jié)核是常見的呼吸道傳染病，治療不當(dāng)，常會轉(zhuǎn)移使腎臟等器官病變，對人類健康危害很大，一般結(jié)核患者早期的臨床癥狀雖然多樣但并不典型，容易出現(xiàn)誤診情況，而結(jié)核病患者的治療周期普遍較長，臨床上更加需要準(zhǔn)確有效的檢測方式幫助診治患者的病情。結(jié)核桿菌經(jīng)過病原學(xué)檢查確認(rèn)一直是診斷肺結(jié)核的金標(biāo)準(zhǔn)，對于早期的預(yù)防和治療階段幫助很大。結(jié)核桿菌檢測方法較多，目前主要應(yīng)用涂片抗酸染色法、培養(yǎng)法和RT-PCR檢測法[3]。涂片抗酸染色法與培養(yǎng)法做為傳統(tǒng)檢測方法檢測成本相對低一些，但檢測效果并不理想，而基于新技術(shù)的PCR檢測法有更加準(zhǔn)確的檢測率。本文研究顯示，分析133例結(jié)合患者痰液檢測結(jié)果，PCR檢測法檢測結(jié)核桿菌陽性率最高，羅氏培養(yǎng)基培養(yǎng)法次之，痰涂片抗酸染色法最低，PCR 檢測法是從分子領(lǐng)域?qū)Y(jié)核桿菌進(jìn)行定量、定性的檢測，相比具有較高的特異性和靈敏性，可作為評估療效的主要檢測手段應(yīng)用。羅氏培養(yǎng)基培養(yǎng)法所用檢測時(shí)間最長，但在菌落培養(yǎng)過程中可以評估細(xì)菌的耐藥性，對臨床研究有較大的應(yīng)用價(jià)值。

綜上所述，臨床上如要準(zhǔn)確的對痰結(jié)核桿菌進(jìn)行檢測，PCR檢測法是首選，羅氏培養(yǎng)基培養(yǎng)法對檢測治療過程中細(xì)菌抗藥性有一定的臨床價(jià)值。而痰涂片抗酸染色法適合規(guī)模性的普查活動(dòng)。

參考文獻(xiàn)：

[1]楊光武.不同檢驗(yàn)方法在肺結(jié)核早期診斷中的應(yīng)用[J].航空航天醫(yī)學(xué)雜志，2012，23（3）：309-310.

[2]趙文娟，張翠英，高玉然.三種結(jié)核抗體檢查診斷活動(dòng)性肺結(jié)核比較[J].預(yù)防醫(yī)學(xué)情報(bào)雜志，2012，28（9）：702-705.

[3]楊巍巍.結(jié)核患者痰結(jié)核桿菌檢驗(yàn)的方法探討[J].中國醫(yī)藥指南，2013，5（11）：258-259.

編輯/趙恒德